HMGB1的聚ADP-核糖基化修飾促進其乙?；揎?pdf

1、目的:高遷移率族蛋白1(HMGB1)作為重要的晚期炎癥介質在炎癥(包括SAP)的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用,HMGB1在翻譯后修飾包括乙酰化、磷酸化、甲基化和ADP-核糖基化。HMGB1主動分泌過程中,乙?；揎棸缪萘撕苤匾慕巧?促進HMGB1向胞漿移位和細胞外分泌。近年的研究發(fā)現(xiàn)PARP-1參與了炎癥過程的HMGB1核內定位和向細胞外分泌的過程,可能與HMGB1的ADP-核糖基化修飾有關。本研究旨在研究HMGB1的聚ADP-核糖基化修飾

2、及其對乙?；揎椀挠绊?探討PARP-1調控HMGB1細胞內定位和細胞外分泌的可能機制,為PARP-1抑制劑在臨床上用于抗HMGB1相關炎癥的治療提供更多的理論依據(jù)。
　　方法:以LPS(100ng/ml)、LPS+3-AB(10mmol/l)刺激RAW264.7細胞2h和4h,用RIPA裂解法提取出細胞全蛋白;用HMGB1抗體進行免疫沉淀富集HMGB1;用PAR抗體、乙?；?賴氨酸抗體進行Western-blot檢測HMGB1的

3、聚ADP-核糖基化和乙酰化水平。體外構PARP-1以6-生物素-17-NAD為底物對HMGB1進行聚ADP-核糖基化,用HRP標記的鏈霉親和素抗體進行免疫印跡檢測生物素化-ADP核糖;體外CBP以乙酰輔酶A為底物對HMGB1進行進一步的的乙?；?用乙?；?賴氨酸抗體進行Western-blot檢測蛋白的繼續(xù)乙?；?。
　　結果:單用LPS刺激RAW264.7細胞活化PARP-1后,HMGB1的聚ADP-核糖基化水平明顯高于對照組

4、(0h),乙酰化水平也明顯高于對照組;同時以(PARP-1活性抑制劑)3-AB刺激以后,HMGB1的聚ADP-核糖基化水平明顯低于LPS組,乙?；揭裁黠@低于LPS組,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。體外HMGB1在PARP-1作用下進行聚ADP-核糖基反應后,結果顯示PARR-1組HMGB1的聚ADP-核糖基化水平明顯高于control組(PARR-1熱滅活對照組),繼續(xù)乙?；揭裁黠@高于control組,差異具有統(tǒng)計學意義(