基因拆分限控轉基因漂流的研究.pdf

1、在科技界和公眾關注的GMC安全性問題中，轉基因漂流及其可能引起的環(huán)境后果和對人類健康的潛在影響是問題的焦點之一。讓公眾接受轉基因產(chǎn)品，最好的辦法是從根本上杜絕基因漂流，以保障環(huán)境和食品安全。探索研究用生物學限控措施(Biological containment)防止基因漂流的新一代技術，已成為國際研究的熱點和前沿課題，它不僅是發(fā)展新一代技術的基礎研究，而且對進一步促進和推動轉基因作物的產(chǎn)業(yè)化具有重要意義。本研究以抗除草劑草甘膦的EPSP

2、S基因為對象，利用intein介導的蛋白剪接功能，研究基因拆分后的重新組裝效率，以明確基因拆分技術限控基因漂流的效果。主要結果如下： 1)分別構建了含有完整G2-aroA(EPSPS)基因、EPSPSn-In和Ic-EPSPSc融合基因片段的植物表達載體PG2，pEPSPSn-In和pIc-EPSPSc。獲得含有完整G2-aroA基因、單獨含有EPSPSn-In和單獨含有Ic-EPSPSc的轉基因煙草，PCR檢測證明基因已整合到

3、煙草基因組中。 2)G2-aroA轉基因煙草的草甘膦抗性分析發(fā)現(xiàn)：T1代轉基因煙草種子在含有676.3ppm草甘膦的培養(yǎng)基上仍然能夠萌發(fā)和生長，而受體材料NC89種子在含有33.8ppm草甘膦的培養(yǎng)基上全部死亡；轉基因煙草植株田間能耐受4000ppm的草甘膦，而非轉基因煙草植株在噴灑1500ppm草甘膦后就會死亡。 3)將含有EPSPSn-In和Ic-EPSPSc片段的轉基因煙草雜交，獲得同時含有兩個基因片段的轉基因煙草

4、雜種。轉基因煙草雜種進行草甘膦抗性分析發(fā)現(xiàn)：同時含有兩個片段的雜交種在84.5ppm草甘膦的培養(yǎng)基上能正常萌芽和生長，而單獨含有EPSPSn-In或Ic-EPSPSc的轉基因煙草不能正常生長。RT-PCR檢測說明雜交后代的草甘膦抗性是由于拆分后的兩個基因片段通過intein介導的蛋白剪接形成了有功能的完整蛋白所致。 4)結合不同類型轉基因煙草種子在100mg/L卡那霉素的MS0培養(yǎng)基上的分離情況，推測拆分后的基因片段在雜交后代中