EGFR基因缺失突變檢測(cè)新技術(shù)及其應(yīng)用于游離DNA檢測(cè)的可行性.pdf

1、蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書(shū)而使用過(guò)的材料。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文作者簽名：緇日期：絲笙!三PEGFR基岡缺失突變檢測(cè)新技術(shù)及其應(yīng)用于游離DNA檢測(cè)的町行性中文摘要

2、EGFR基因缺失突變檢測(cè)新技術(shù)及其應(yīng)用于游離DNA檢測(cè)的可行性中文摘要目的：評(píng)估分子開(kāi)關(guān)技術(shù)在RealtimeqPCR平臺(tái)檢測(cè)EGFR基因19外顯子delE746一A750和delL747一$752insS缺失突變的敏感性和特異性，探討藍(lán)白斑篩選技術(shù)在EGFR基因19外顯子EGFR基因19外顯子檢測(cè)的新應(yīng)用，并評(píng)估Blocker引物聯(lián)合藍(lán)白斑篩選技術(shù)和分子開(kāi)關(guān)技術(shù)在游離DNA中檢測(cè)EGFR基因19外顯子缺失突變的可行性。方法：根據(jù)EGF

3、R基因19外顯子delE746一A750和delL747一$752insS缺失突變，即15堿基和18堿基缺失突變?yōu)闄z測(cè)靶點(diǎn)，分別設(shè)計(jì)3’末端與突變基因位點(diǎn)配對(duì)的引物，并硫化磷酸修飾；采用高保真DNA聚合酶聯(lián)合3’末端硫代修飾的特異性引物所構(gòu)成的分子開(kāi)關(guān)技術(shù)，在Real—timeqPCR平臺(tái)對(duì)含有相應(yīng)缺失突變的質(zhì)粒模板、正常人基因組DNA模板及基因組混合突變質(zhì)粒模板進(jìn)行敏感性和相關(guān)性的分析和方法評(píng)估。對(duì)24例肺癌患者的游離DNA樣品進(jìn)行了

4、分子開(kāi)關(guān)技術(shù)的篩查。設(shè)計(jì)一組特異性PCR引物，以樣本DNA(包括EGFR野生型、突變型質(zhì)粒、血基因組DNA、外周血游離DNA等)為模板進(jìn)行插入片段的PCR擴(kuò)增，通過(guò)改變閱讀框架序列，致使野生型閱讀框架中含有終止密碼子TAA，缺失突變型因丟失一段核酸片段而不含有終止密碼子TAA，結(jié)合藍(lán)白斑篩選，以菌落的顏色來(lái)確定樣品有無(wú)EGFR基因19外顯子的缺失突變。設(shè)計(jì)與EGFR基因19外顯子野生型序列配對(duì)，其3’末端引入一個(gè)問(wèn)臂，以阻止3’端聚合酶