活性維生素D3對白蛋白誘導人腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化的影響.pdf

1、目的:探討活性維生素D3[1，25(OH)2D3]對白蛋白誘導的正常人近端腎小管上皮細胞(HK-2細胞)-間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)分化過程的影響，及TGFβ1/ILK信號通路在此過程中的作用，探索1，25(OH)2D3延緩腎臟纖維化進程的可能機制。
　　方法:體外培養(yǎng)的HK-2細胞隨機分為以下組別:A空白對照組:未加任何刺激物;B1，25(OH)2D3誘導組[10-7mol/l1，25(OH)2D3];C白蛋白誘導組（5mg/ml白蛋白）;D

2、10-8 mol/l1，25(OH)2D3干預組[5mg/ml白蛋白+10-8 mol/l1，25(OH)2D3];E10-7mol/l1，25(OH)2D3干預組[5mg/ml白蛋白+10-7mol/l1，25(OH)2D3];F10-6mol/l1，25(OH)2D3干預組[5mg/ml白蛋白+10-6mol/l11，25(OH)2D3];G TGFβ1拮抗劑組（5mg/ml白蛋白+TGFβ1拮抗劑SB431542），以上各組均培養(yǎng)

3、24h。倒置顯微鏡下觀察HK-2形態(tài)的改變;采用RT-PCR法檢測細胞TGFβ1、ILK mRNA的水平;細胞免疫熒光法檢測細胞E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）的表達水平;ELISA法檢測上清液纖連蛋白(FN)的表達水平。
　　結(jié)果:①HK-2細胞正常呈卵圓形鋪路石樣，白蛋白刺激后細胞胞體變長，變細，細胞間隙增大;隨著1，25(OH)2D3濃度的升高，HK-2細胞形態(tài)改變程度較白蛋白誘導組逐漸

4、減輕;②白蛋白誘導組TGFβ1、ILK mRNA較空白對照組顯著升高（P均＜0.05），不同濃度1，25(OH)2D3干預組TGFβ1、ILK mRNA明顯下調(diào)（P均＜0.05）;③白蛋白誘導組E-cadherin的蛋白表達較空白對照組下降，α-SMA、FN的蛋白表達上升（P均＜0.05），而在不同濃度1，25(OH)2D3干預組及TGFβ1拮抗劑組E-cadherin的蛋白表達較白蛋白誘導組顯著上調(diào)，α-SMA、FN的蛋白表達顯著下調(diào)

5、（P均＜0.05），且隨1，25(OH)2D3濃度升高作用更加明顯。
　　結(jié)論:白蛋白可以使體外培養(yǎng)的HK-2細胞TGFβ1、ILK mRNA及α-SMA的蛋白表達增強， E-cadherin的蛋白表達減少，誘導腎小管上皮細胞-間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)分化的發(fā)生，導致細胞外基質(zhì)FN表達增加;1，25(OH)2D3呈濃度依賴性抑制白蛋白誘導的HK-2細胞轉(zhuǎn)分化過程，其可能機制為1，25(OH)2D3阻斷TGFβ1/ILK信號通路，最終可延緩腎臟