血管性血友病的臨床分析及分子發(fā)病機制研究.pdf

1、本文從以下幾部分進行了論述。
　　第一部分 162例血管性血友病的臨床分析
　　研究目的：血管性血友病(von Willebrand disease.VWD)是由于血管性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)基因突變引起血漿中VWF數(shù)量減少或質量異常所導致的最常見的遺傳性出血性疾病,呈常染色體遺傳?；颊咦杂卓捎休p度或中度皮膚黏膜出血、鼻衄、胃腸道出血及外傷后出血不止等癥狀,女性常有月經過多。遺傳性V

2、WD分為三種類型:1型(VWF量的部分缺乏)、2型(VWF質的缺陷,又分為2A、2B、2M和2N四個亞型)和3型(VWF量的完全缺乏),這三種類型和各亞型間具有不同的生理病理機制,治療方法上也有各自特點。因此需要實驗室進行系列檢測以確保準確診斷和分型。本部分的回顧性研究代表了單中心血管性血友病(VWD)患者的流行病學特點、臨床特征、診治現(xiàn)狀。
　　方法：回顧性分析162例VWD患者的臨床資料、分型診斷結果及治療、轉歸情況。

3、　　結果：162例患者中男性76例、女性86例,男性平均年齡7.2(2.0~41.0)歲,女性平均年齡20.7(5.0~48.0)歲。1型VWD患者86例(53.1％),2型42例(25.9％,2A型33例、2M型4例、2N型5例),3型34例(21.0％)。87例患者(53.7％)有明確家族史。出血表現(xiàn)以皮膚瘀斑(61.7％)、鼻出血(53.7％)、手術或外傷后出血不止(53.1％)為主,月經量多為女性患者常見主訴(66.3％)。Vi

4、cenza出血評分標準結果顯示56例患者(34.6％)有異常出血評分。45例患者(27.8％)予血制品替代治療,8例患者使用了1-去氨基-8-右旋-精氨酸血管加壓素治療。57例月經量多的女性患者中,25例并發(fā)貧血者予補鐵治療。對于出血量多不易控制的患者,8例需聯(lián)合孕激素控制出血,2例行子宮切除術。
　　結論：VWD是臨床表現(xiàn)有較大異質性的常見的遺傳性出血性疾病,對于疑診VWD的患者應分步進行確診及分型檢查,從而有效地實施個體化治療

5、。
　　第二部分 6例血管性血友病的實驗診斷和基因分析
　　研究目的：血管性血友病因子(von Willebrand Factor,VWF)是血管內皮細胞和骨髓巨核細胞合成的一種糖蛋白。VWF質的缺陷和量的缺乏會導致血管性血友病(von Willebrand disease,VWD)。基因分析有助于了解分子發(fā)病機制,對攜帶者的判定、產前診斷以及患者的預后、治療都有重要的意義。本研究從6例VWD患者的臨床及基因診斷出發(fā),探討基

6、因型與表現(xiàn)型的相關性,旨在從分子水平闡明VWD的發(fā)病機制。
　　方法：采用第一部分所述VWD系列實驗,以全血細胞計數(shù)(主要為血小板計數(shù))、部分激活的凝血活酶時間(APTT)、凝血酶原時間(PT)和纖維蛋白原含量(Fg)作為VWD的篩查實驗;VWF抗原(VWF∶Ag)測定、VWF瑞斯托霉素輔因子活性(VWF∶Rco)、血漿凝血因子VIII活性(FVIII∶C)作為確診實驗;以VWF多聚體分析、瑞斯托霉素誘導的血小板聚集試驗(RIPA

7、)、VWF膠原結合試驗(VWF∶CB)、VWF和凝血因子VIII結合試驗(VWF∶FVIIIB)作為分型實驗,確診6例遺傳性VWD(分別為3例2A型,3例3型)。為了增加對2A型和3型VWD分子發(fā)病機制的認識,我們用常規(guī)PCR分別擴增這6例VWD患者的VWF基因,并進行測序分析。
　　結果：6例患者中3例為2A型,3例為3型。測序結果鑒定到7個基因突變,包括4814A>C(Y1605S)、752A>G(E248G)、4789C>T

8、(R1597W)、421G>A(D141N)、3379+1G>A、2480G>A(C827Y)、3897delT,其中4814A>C(Y1605S)、752A>G(E248G)、2480G>A(C827Y)、3897delT為國際首次報道。Y1605S的雜合性突變恰位于A2區(qū)ADAMTS13蛋白酶裂解位點(Y1605-M1606),使原來隱藏的位點得以暴露,VWF因子對ADAMTS13水解酶敏感性增加,導致2A型VWD的發(fā)生。E248G

9、的雜合性突變位于D1區(qū),屬于不成熟VWF蛋白的前肽部分,影響VWF多聚化,導致胞內貯留,是2A型VWD的發(fā)生原因。R1597W為2A型VWD較常見的突變類型,已被證實可導致VWF上ADAMTS13蛋白酶裂解位點(Y1605-M1606)附近的空間構象發(fā)生改變,使突變蛋白對ADAMTS13敏感性增高。3379+1G>A的純合突變影響正常RNA的剪切過程,產生含有提前終止密碼子的異常剪接體,使得血漿中VWF水平顯著減低。C827Y位于D’區(qū)

10、,D’區(qū)Cys參與VWF鏈內二硫鍵形成,與分子內結構穩(wěn)定有關,影響多聚體的形成和促進突變蛋白的清除,其合并3897delT的框移突變導致VWF合成顯著減少,推測是3型VWD的發(fā)病機制。而3型VWD患者4中,僅發(fā)現(xiàn)D141N的雜合性突變,是否存在其他類型的突變及其發(fā)病機制仍需進一步鑒定和研究。
　　結論：VWD具有復雜的分子發(fā)病機制,這不僅要求有一套系統(tǒng)的實驗方法以對VWD進行明確診斷和分型,還需要運用多種分子生物學技術對其進行深入