Ⅰ型與Ⅱ型子宮內膜癌差異表達microRNA的篩選及其靶基因的研究.pdf

1、目的:篩選Ⅰ型和Ⅱ型人子宮內膜癌細胞系中差異表達的miRNA并預測和初步驗證其靶基因。 方法:(1)通過體內成瘤病理學檢查、免疫組化檢測ER、PR、p53和Ki-67的表達、對雌孕激素作用的反應來鑒定兩個細胞系Ishikawa和KLE的分型；(2)無雌孕激素環(huán)境下培養(yǎng)細胞系Ishikawa和KLE，提取總RNA進行miRNA芯片檢測和基因表達譜芯片檢測；提取總蛋白進行蛋白質組學分析；(3)用miRANDA和TargetScan軟

2、件結合芯片和蛋白質分析結果，預測差異表達的miRNA可能的靶基因；(4)選擇可能分別以ESR1和PGR為靶基因的miRNA100、99a和miRNA378、768-3p，用Real-Time RT-PCR技術驗證在體內和體外培養(yǎng)的兩個細胞系以及10例人內膜癌標本中其表達的差異性。 結果:經鑒定確認Ishikawa來源于Ⅰ型內膜癌，KLE甩來源于Ⅱ型內膜癌；miRNA芯片篩選出兩個細胞系中差異表達的miRNA共126個；基因表達譜

3、芯片篩選出兩個細胞系中差異表達的基因共3355個；蛋白質組學分析在兩個細胞系中共鑒定出差異表達的蛋白14個；鑒定出的蛋白和免疫組化檢測的共18個蛋白中有13個預測到可能以其為靶基因的目標miRNA；Real-Time RT-PCR驗證出hsa-miR-100在Ⅰ型組病理標本中的表達顯著低于Ⅱ型組，miRNA100、99a、378、768-3p在體外和體內培養(yǎng)的細胞系Ishikawa和KLE中的差異表達基本一致。 結論:本實驗在兩