氧化豆油對草魚(Ctenopharyngodon idellus)腸道粘膜原代細胞的損傷作用及其保護的研究.pdf

1、本研究以草魚為試驗動物，建立規(guī)范的草魚IECs原代培養(yǎng)操作方法及生長效果評價指標，并以氧化豆油水溶物、丙二醛、酵母培養(yǎng)物水溶物為對象，分別試驗對應(yīng)111.06～888.48g/L氧化豆油的水溶物、1.23～9.89μmol/L丙二醛、對應(yīng)10～200mg/L酵母培養(yǎng)物的水溶物、50～200mg/L酵母培養(yǎng)物的水溶物與4.94～9.89μmol/L丙二醛聯(lián)合使用下對草魚IECs原代細胞生長的影響。
　　 結(jié)果：表明：采用機械刮取消

2、化法進行腸道粘膜組織的消化，離心轉(zhuǎn)速以400r/min為宜；在使用M199培養(yǎng)液、6％濃度CO2、15%濃度胎牛血清、接種濃度為2000（個／孔）條件下可批量復制草魚原代腸道粘膜細胞。采用熒光倒置顯微鏡觀察法與Giemsa染色法，MTT檢測法及培養(yǎng)液中AKP與LDH/MTTOD能系統(tǒng)、有效的評價細胞生長效果。
　　 與對照組相比，培養(yǎng)液中對應(yīng)中添加111.06～888.48g/L氧化豆油的水溶物在作用12h內(nèi)對草魚IECs原代細

3、胞細胞生長、細胞形態(tài)及細胞分化成熟產(chǎn)生了抑制，其作用程度與添加濃度、作用細胞時間具有依賴性，其對細胞結(jié)構(gòu)及細胞抗氧化能力造成一定程度的影響，其中添加對應(yīng)888.48g/L氧化豆油的水溶物在12h內(nèi)極顯著降低了細胞活性及培養(yǎng)液中AKP酶活力（P＜0.01），對細胞形態(tài)有損傷,3～9h內(nèi)極顯著增高培養(yǎng)液中LDH/MTTOD值(P＜0．01)，顯著降低了培養(yǎng)液中SOD酶活力及T-AOC能力（P＜0.05）。
　　 與對照組相比，添加終

4、濃度為4.94、9.89μmol/L的丙二醛對草魚IECs原代細胞的細胞生長有顯著抑制，在3～6h能極顯著抑制細胞生長（P＜0.01），在12h內(nèi)能極顯著降低細胞總蛋白含量（P＜0.01）,3h時極顯著增高培養(yǎng)液中LDH/MTTOD值(P＜0.01)，6h時極顯著降低培養(yǎng)液中GSH-PX酶活力（P＜0.01）,3、9h時極顯著降低培養(yǎng)液中T-AOC能力(P＜0.01)，培養(yǎng)液中SOD酶活力變化不顯著。丙二醛與含相同濃度丙二醛的氧化豆油水

5、溶物對草魚IECs原代細胞的損傷有相似性。
　　 與對照組相比，單獨添加終濃度為50～200mg/L的酵母培養(yǎng)物水溶物在3～6h對細胞生長有促進作用，其中3h時細胞增殖率最高可提高42.83%。聯(lián)合使用酵母培養(yǎng)物水溶物及丙二醛時，添加對應(yīng)50～200mg/L酵母培養(yǎng)物的水溶物對4.94、9.89μmol/L丙二醛導致的細胞損傷有一定程度保護作用，但并未能使細胞恢復至對照組水平。與單獨添加4.94μmol/L濃度丙二醛相比，添加1

6、00mg/L酵母培養(yǎng)物的水溶物對下在6、12h極顯著增高細胞活性(P＜0.01),3～12h內(nèi)極顯著增高細胞總蛋白含量(P＜0.01),3、6h極顯著降低了LDH/MTTOD值(P＜0.01)，一定程度提高了培養(yǎng)液中GSH-PX、SOD酶活力及T-AOC能力。
　　 從細胞超微結(jié)構(gòu)來看，在培養(yǎng)液中添加對應(yīng)444.24g/L氧化豆油的水溶物與添加終濃度為4.94μmol/L丙二醛在9h內(nèi)均導致細胞內(nèi)基質(zhì)透明呈氣球樣，同時胞漿空泡變