在線蛋白二維液相色譜儀的構(gòu)建及應用.pdf

1、通過對高效液相色譜儀的改進，構(gòu)建了新型的在線蛋白二維液相色譜分離裝置。經(jīng)過對該裝置的調(diào)試和加工，組裝成適合蛋白質(zhì)組學研究的多功能多維自動化液相色譜儀器，也是一個可與任何液相色譜儀相匹配的獨立的輔助設備，并將其命名為“色譜專家”，在此基礎上，初步實現(xiàn)了該儀器裝置的在線蛋白單柱二維液相色譜功能。 第一章為文獻綜述：詳細介紹了二維及其多維液相色譜法及其儀器的發(fā)展狀況，分析了目前報道的二維及其多維液相色譜儀器裝置的優(yōu)缺點，提出了改進儀器

2、裝置的設想和方案，對自動化的二維及其多維色譜儀器裝置做了簡要的總結(jié)。 第二章為實驗方法，包括本論文所涉及的所有實驗所需的各種儀器和試劑，以及各類酶的活性測定方法、SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳方法及其蛋白含量測定方法。 第三章首次構(gòu)建了一種在線單柱蛋白二維液相色譜分離裝置并命名“色譜專家”?！吧V專家”具有收集一維餾分并在線進樣到二維中去，在線緩沖溶液交換，收集餾分可以低溫4℃保存而且可以高溫水浴加熱的功能。同時以單柱二維液

3、相色譜法為例對該儀器裝置的運行原理做了深入的探討。利用具有疏水功能機理的弱陽離子交換柱在該儀器上成功實現(xiàn)了對多種標準蛋白的單柱二維液相分離，最后對標準蛋白在該儀器上單柱二維液相分離的質(zhì)量回收率和活性回收率進行了測試，獲得了較好的結(jié)果。 第四章利用構(gòu)建的在線蛋白二維液相色譜分離裝置，以商品的WCX—HIC雙機理柱，分別對牛胰腺中的胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶進行2D—LC-1C分離純化，經(jīng)過SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳和薄層掃描測定，均獲