簡(jiǎn)介：該實(shí)驗(yàn)綜合運(yùn)用DNA在片延伸、固相PCR、分子雜交、酶學(xué)信號(hào)放大等生物芯片技術(shù)建立了一種用DNA芯片快速檢測(cè)漢坦病毒并進(jìn)行基因分型的方法探討其臨床應(yīng)用價(jià)值實(shí)驗(yàn)利用等位基因特異性PCR的原理通過GENEBANK搜索所有漢坦病毒基因組片段比對(duì)分析各亞型的分型點(diǎn)設(shè)計(jì)出各亞型的分型引物在引物的5端的磷酸基團(tuán)上進(jìn)行CH26SSCH26POLYT10修飾利用二硫鍵將分型引物固定于芯片表面采用固相PCR在片延伸病毒特異DNA片段同時(shí)采用半巢式PCR以提高擴(kuò)增效率只有引物與模板完全配對(duì)時(shí)PCR才能夠正常進(jìn)行DNA在片延伸過程中通過生物素修飾的DUTP將生物素?fù)饺隓NA雙鏈利用親和素交聯(lián)的堿性磷酸酶對(duì)PCR結(jié)果進(jìn)行芯片酶學(xué)檢測(cè)檢測(cè)結(jié)果表明該方法能夠在芯片上檢測(cè)并區(qū)分漢坦病毒S基因的多個(gè)型別靈敏度可達(dá)到05NGΜL用此DNA芯片系統(tǒng)檢測(cè)臨床實(shí)際病毒樣品檢測(cè)結(jié)果與用血清學(xué)方法檢測(cè)得到的已知型別結(jié)果完全吻合

簡(jiǎn)介：南開大學(xué)碩士學(xué)位論文乙肝病毒X蛋白通過長(zhǎng)非編碼RNAHULC促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖的作用及分子機(jī)制研究姓名杜玉梅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師張曉東；葉麗虹201205摘要轉(zhuǎn)錄因子CREB上調(diào)HULC的表達(dá)。第二部分LNCIⅢAHULC促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖的作用HULC對(duì)肝癌細(xì)胞調(diào)節(jié)的功能不清。為了探討HBX是否通過HULC促進(jìn)肝癌的發(fā)生發(fā)展，應(yīng)用MTT方法檢測(cè)了瞬時(shí)過表達(dá)HULC對(duì)L02肝細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果顯示，過表達(dá)HULC可明顯促進(jìn)肝細(xì)胞增殖，呈時(shí)間依賴性；反之，在L02X和HEPG2X中干擾HULC則可抑制上述細(xì)胞的生長(zhǎng)，呈時(shí)間依賴性。EDU檢測(cè)顯示，在HEPG2X細(xì)胞中干擾HULC可顯著抑制肝癌細(xì)胞的增殖；克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示，在HEPG2X細(xì)胞中干擾HULC可明顯降低細(xì)胞的克隆形成能力裸鼠動(dòng)物成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在HEPG2X細(xì)胞中干擾HULC可顯著降低肝癌細(xì)胞的成瘤能力，進(jìn)一步應(yīng)用REALTIMEPCR檢測(cè)，與對(duì)照組相比在移植瘤組織中HULC的水平明顯降低。因此，LNCRNAHULC具有促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖的作用。第三部分LNCRNAHULC促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖分子機(jī)制的研究為了進(jìn)_步研究LNCRNAHULC促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制，通過檢索HULC基因所在的6P243區(qū)域的編碼基因，發(fā)現(xiàn)HULC基因附近存在SLC3583和抑癌基因P18兩個(gè)編碼基因。文獻(xiàn)報(bào)道，HULC對(duì)SLC3583調(diào)節(jié)作用并不明顯，因此我們探討了HULC對(duì)P18的調(diào)控作用。我們首先檢測(cè)了上述21例肝癌組織和癌旁組織中P18的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)P18在肝癌組織中的表達(dá)水平明顯低于癌旁組織，并且在上述33例肝癌組織中發(fā)現(xiàn)P18的表達(dá)水平與HULC的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。在HEPG2細(xì)胞中干擾HULC，顯示P18的MRNA水平和蛋白水平發(fā)生上調(diào)，呈劑量依賴性。將P18基因1003N349NT克隆到PGL3BASIC載體上，報(bào)告基因結(jié)果顯示，該區(qū)域具有啟動(dòng)子活性。報(bào)告基因顯示，在肝細(xì)胞L02中過表達(dá)HULC可抑制P18的啟動(dòng)子活性，呈劑量依賴性；當(dāng)干擾HEPG2細(xì)胞中HULC，可激活P18的啟動(dòng)子活性，呈劑量依賴性。上述結(jié)果表明，HULC通過抑制P18基因的啟動(dòng)子活性進(jìn)而抑制P18的表達(dá)。MTT分析結(jié)果顯示，雙干擾P18和HULC，發(fā)現(xiàn)干擾HULC可以降低干擾P18促進(jìn)細(xì)胞增殖的能力。檢測(cè)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤組織中P18的表達(dá)水平，結(jié)果顯示在SIHULC組的移植瘤組織中P18蛋白的表達(dá)水平明顯高于SICTRL組，進(jìn)一步證實(shí)了SIHULC抑制肝癌細(xì)胞增殖的作用與上調(diào)P18有關(guān)。

簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)博士學(xué)位論文腺病毒介導(dǎo)重組人源化ING4基因抑制非小細(xì)胞肺癌NCIH460細(xì)胞生長(zhǎng)機(jī)制研究姓名段光軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（呼吸內(nèi)科）指導(dǎo)教師胡華成20080401腺病毒介導(dǎo)重組人源化ING4基因抑制非小細(xì)胞肺癌NCIH460細(xì)胞生長(zhǎng)機(jī)制研究中文摘要亡形態(tài)學(xué)改變，并出現(xiàn)凋亡小體；RTPCR、WESTERNBLOTTING檢測(cè)結(jié)果提示AD．ING4基因以P53依賴方式誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞上調(diào)P21和BAX基因表達(dá)，下調(diào)BCL．2和SURVIVIN基因表達(dá)來誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡；RTPCR和ELISA檢測(cè)提示ING4基因可以抑制腫瘤主要血管生成相關(guān)基因VEGF表達(dá)；體內(nèi)試驗(yàn)表明AD．ING4基因可以抑制腫瘤生長(zhǎng)并抑制腫瘤體內(nèi)血管生成。結(jié)論運(yùn)用定點(diǎn)突變技術(shù)對(duì)MING4進(jìn)行了人源化改造，并成功重組構(gòu)建了人源化ING4腺病毒表達(dá)載體；經(jīng)RTPCR和熒光顯微鏡檢測(cè)證實(shí)腺病毒AD．ING4可以在非小細(xì)胞肺癌NCI．H460細(xì)胞株中穩(wěn)定表達(dá)；腺病毒AD．ING4在非小細(xì)胞肺癌NCI．H460細(xì)胞株中表達(dá)可致肺癌細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞病變CPE，并主要通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和抑制腫瘤血管生成來抑制腫瘤細(xì)胞增殖；腺病毒AD．ING4誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌NCI．H460細(xì)胞凋亡的主要分子機(jī)制是以P53依賴方式上調(diào)促凋亡因子BAX表達(dá)，下調(diào)BCL．2、SURVIVIN表達(dá)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡；腺病毒AD．ING4同時(shí)通過促進(jìn)P53反應(yīng)基因P21表達(dá)，上調(diào)BAX表達(dá)，并改變BAX／BCL．2比例，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡；腺病毒AD．ING4可以抑制腫瘤主要血管生成相關(guān)基因VEGF的表達(dá)，并在體內(nèi)抑制腫瘤血管生成腺病毒AD．ING4注射可以抑制H460實(shí)體瘤腫瘤生長(zhǎng)。關(guān)鍵詞ING4基因，人；腺病毒；載體；構(gòu)建；基因治療；肺癌，非小細(xì)胞II作者段光軍指導(dǎo)老師胡華成

簡(jiǎn)介：兒童自我延遲滿足控制能力的認(rèn)知特征研究益，因此更具有積極的適應(yīng)意義。二、作為一種能力，自我延遲滿足與個(gè)體的認(rèn)知能力有關(guān)聯(lián)，有效的延遲行為要求各種意識(shí)狀態(tài)下達(dá)成延遲能力的認(rèn)知能力，包括個(gè)體有目的的自我分心、“冷的”C001抽象認(rèn)知策略、元認(rèn)知、心理理論、執(zhí)行功能等認(rèn)知能力的參與，而不僅僅停留在反應(yīng)抑制上。三、幼兒自我延遲滿足的等待時(shí)間受言語表征內(nèi)容的影響，指向任務(wù)規(guī)則的“冷”認(rèn)知言語表征對(duì)于提升幼兒的延遲等待時(shí)間有顯著的影響作用，尤其是對(duì)3～4歲幼兒影響效果更為突出。似乎男孩的道德行為發(fā)展更重視的是規(guī)則和事件本身的價(jià)值。四、自我延遲滿足元認(rèn)知策略知識(shí)的發(fā)展水平也是影響兒童延遲滿足的重要因素。隨著年齡的增長(zhǎng)，兒童延遲滿足元認(rèn)知策略知識(shí)水平由無知、朦朧的低水平向一致性、自我調(diào)節(jié)的高水平不斷發(fā)展。4歲幼兒基本上處于無知水平；5歲幼兒的元認(rèn)知知識(shí)開始萌芽小學(xué)階段，尤其是3年級(jí)以后，兒童延遲滿足的元認(rèn)知策略知識(shí)進(jìn)入一致性水平的平穩(wěn)發(fā)展階段；自我調(diào)節(jié)的元認(rèn)知水平在6年級(jí)兒童身上稍有體現(xiàn)。五、學(xué)前兒童在應(yīng)對(duì)延遲滿足的策略使用上也呈現(xiàn)不同的年齡特點(diǎn)，抑制策略在低年齡的中班幼兒中占一定優(yōu)勢(shì)，規(guī)則任務(wù)性策略在大班中比較明顯。分心策略隨著年齡的增長(zhǎng)而成為JL童應(yīng)對(duì)挫折時(shí)最常采用的主導(dǎo)策略。六、兒童自我延遲滿足元認(rèn)知策略知識(shí)的發(fā)展呈現(xiàn)一定的規(guī)律性，從具體到抽象，從單維性到多維性，從尋求情景的外部幫助到依靠自我的力量，這些變化與此階段兒童認(rèn)知思維的發(fā)展密不可分。七、自我延遲滿足與兒童心理理論、執(zhí)行功能在任務(wù)、年齡發(fā)展、額葉功能等方面具有關(guān)聯(lián)性。隨著兒童年齡的增長(zhǎng)，幼兒在這三項(xiàng)能力上都有顯著提高，尤其在4歲階段。八、自我延遲滿足與心理理論、執(zhí)行功能之間存在顯著的正相關(guān)聯(lián)，但它們彼此間的關(guān)系的影響實(shí)質(zhì)在本研究中仍不明確，需要迸一步的實(shí)驗(yàn)研究的驗(yàn)證。關(guān)鍵詞自我延遲滿足外部延遲滿足元認(rèn)知心理理論執(zhí)行功能U

簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文電子束照射半腦后認(rèn)知功能變化特點(diǎn)及機(jī)制的研究姓名李學(xué)忠申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師包仕堯田野200241皇王壅璺塾蘭墮亙墜塑墊壁奎垡壁盛墨墊型塑墮塞墮15GV及以上照射組大鼠海馬細(xì)胞外液谷氨酸含量在照射后半月增加，谷氨酸含量上升程度與照射劑量有關(guān)，到照射后第3月恢復(fù)正?；蛏缘?。，F(xiàn)4、1結(jié)論半腦照射可使大鼠學(xué)習(xí)、記憶能力下降，下降程度與照射劑量有關(guān)，照射劑量越大，下降程度越明顯。照射鼠早期學(xué)習(xí)、記憶能力的下降可能與照射性感覺障礙及海馬細(xì)胞外液的氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸的變化有一定的關(guān)系。一L一關(guān)鍵詞半腦照射大鼠學(xué)習(xí)、記憶能力電刺激敏感性谷氨酸E，T

簡(jiǎn)介：第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文EB病毒與OKADAICACID分別及協(xié)同處理HNE1細(xì)胞的蛋白表達(dá)譜姓名徐守軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)病理學(xué)指導(dǎo)教師姚開泰20030606EB病毒與OKADAICACID分別及協(xié)離處理HNEL細(xì)胞的蛋白表達(dá)譜碩士生指導(dǎo)老師徐守軍姚開泰教授孛文攮要鼻咽癌NASOPHARYNGEALCARCINOMA，NPC是中國(guó)南方數(shù)省高發(fā)的鼻疆郄惡性上皮滾瞧黲瘞。囂蘺熬礴究表弱，NPC發(fā)瘸是一令多因素、多階段的過程，主要如EB病毒、化學(xué)致癌物以及遺傳等因索相關(guān)。血清學(xué)以及組織學(xué)的迂攥表明，EB病毒與NPC密甥耪關(guān)，在NPC纓鼴敷及鼻咽部非典型增生的上皮細(xì)胞中都W以檢測(cè)到EB病毒，但是在鼻咽部正常上皮細(xì)胞中卻寒能檢測(cè)到EB瘸毒，表明EB瘸毒可能在NPC發(fā)病的舉期感染了上皮細(xì)胞，假其感染細(xì)胞的機(jī)制以及在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用仍不明確。根攢腫瘤發(fā)生的三階段學(xué)談，腫癯促進(jìn)蠢4在腫瘤發(fā)生中也超到一定的關(guān)鍵性作用。岡田酸OKADAICACID，OA作為蛋自磷酸酶1PROTEINPHOSPHATASE1，PPL以及蛋白磷酸酶2APROTEINPHOSPHATASE2A，PP2A的特異性抑制翔，可以顯著增加細(xì)胞內(nèi)磷酸化鬣自的含量，是一種有效的腫瘤促進(jìn)劑，因此OA可以作為研究腫瘤發(fā)生發(fā)展機(jī)制的一耱有翊工其。蛋白質(zhì)組學(xué)PROTEOMICS技術(shù)是一種新的、簡(jiǎn)通量的后基因組研究方法，近警來廣泛魏痤霜予久類疾病，蘢茭是耱癌發(fā)病瓠鍵豹磅究。經(jīng)典的方法主疆通過維電泳分離蛋白，然后質(zhì)譜分析得到肽質(zhì)量指紋圖譜，逶過戮特霹撿褰褥裂鬣鑫戇穗關(guān)信患。將蛋憊震維學(xué)分輯方?jīng)褢?yīng)爝于EBV與鼻咽癌關(guān)系的研究，有利于從一個(gè)嶄新的角度，對(duì)鼻咽癌發(fā)生發(fā)鼴壤鍘遴行毒益靛掇索。本課題利用22實(shí)駿設(shè)計(jì)，以空白處理組為陰性對(duì)照，分別設(shè)立EB病毒、OA和EB病毒BOA實(shí)驗(yàn)組，體終感染或者處理鼻咽痰纓胞系HNE1，麓點(diǎn)分析EB病薄感染前后細(xì)胞內(nèi)蛋白寢達(dá)譜的變化以及OA在其中可能發(fā)揮蛉作用，從蛋白質(zhì)水平，初步探索EB病毒與NPC的關(guān)3一

簡(jiǎn)介：青島大學(xué)碩士學(xué)位論文腸道病毒腦炎患兒腦脊液中IL4IFNΓ失衡與NSE異常表達(dá)的相關(guān)性研究姓名徐延玲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)兒內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師陳宗波20070604STUDYTHERELATIONSHIPBETWEENIMBALAUEEOFIL4／IFN丫ANDNEURONSPECIFICENOLASENSEABNORMAIEXPRESSIONINEEREBROSPINALFLUIDFROMCHILDRENWITHENTEROVIRALCENTRALNERVOUSSYSTEMINFECTIONABETRADOBJECTIVE3MROUGHTHEDETECTIONOFIL4AND匣N響CEREBROSPHLALFLUIDFROMCHILDRENWILHENTEROVIRALC啊L仃ALNGTVOTBSYSTEMINFECTINNANDCARRYINGOUTTHECORRELATEDENALYSLSWITHTHEA叩把咖LEVELOFNSELNMTMEPATHOGENESISWITHENTEROVIRALCENTRALNERVOUSSYSTEMINFECTIONWILLBEINVESTIGATECLMETHODILLTHE40CHILDPATIENTSWITHENTEROVH鋤CENTRALNETVOUSSYSTEMINFECTIONAND30NORMALCHILDREN，ANDTHECEREBR刪FLUIDCSFIL4，WNY柚DNSEWE犯DD舊咖山NEDBYELISAMETHOD，THERESULTSOF蜘INATIONWE糟ANALYSEDST毗ISTICAIIY。RESULTIFNYANDNSELEVELSINTHEENTEROVIRALEVCENTRALRLERVOUSSYSTEMINFEC￡】IONWEMMARKEDLYELEVMEDCOMPAREDWILHTHOSEOFNORMALCONUOLSP001，BUTM4LEVELDECREASED啦螄位A圩吐Y；THERESULMOFLINEARCORRELATINNSHOWEDTHATTHEREEXISTSAPOSITIVE∞RRELATINNBETWEENIFNYANDNSEFO765，P001ANEGATIVECORRELATIONBETWEENIFNTAND兒_4RO615，P001ADDITIONALLY，M4ACTIVITYWASNEGATIVELYCORRELMEDTONSELEVELR0656P001THECORRELATIONOFIFNY／IL4ANDNSELSLBEBESTR0799PO01CONCLUSION1FNYAND兒4TAKEPARTINTHEIMMUL∞ATTACKOFENTEROVUAL∞刪NGHVOUSSYSTEMINFECTIONTHEREHASACLOSERELATIONSHIPBETWEⅪNIMBALANCEOFLL4，蜊吖ANDM啪刪幽M夠WITHENTEROVIMLRZNTRALLQRVOOSSYSTEMPOSTGRADUATESTUDENTYENLINGXU口甜H硼B(yǎng)DIRECTEDBYPROFZOUGBECHEAKEYWORDSENTEREVIRUSEV；CENTRALNERVOUSSYSTEM；INTERLEUIDN4IL4；7LATCRFERENIFNT；NENRON4PECILIEEUOLASENSE

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多亞甲基藍(lán)-光化學(xué)法對(duì)血漿中水皰性口炎病毒滅活機(jī)制的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：本文旨在以明膠硅氧烷納米粒子GSNPS為基礎(chǔ)對(duì)其進(jìn)行表面修飾并考察其攜帶質(zhì)粒DNA在細(xì)胞和動(dòng)物水平的轉(zhuǎn)染效率。同時(shí)利用變性試劑對(duì)HBV病毒樣核心顆粒在體外條件下進(jìn)行解離與重組考察其作為基因載體的潛力。本文工作主要分為以下三個(gè)方面1適配體AGRO100能夠靶向識(shí)別A549細(xì)胞引入聚乙二醇PEG作為橋聯(lián)劑連接明膠硅氧烷納米粒子與適配體AGRO100并延長(zhǎng)了納米粒子在動(dòng)物體內(nèi)的血液循環(huán)時(shí)間。同時(shí)進(jìn)一步在納米粒子表面連接有助于納米粒子在細(xì)胞內(nèi)逃逸溶酶體的多肽HA2。通過納米粒子修飾前后粒徑和表面電位的變化證實(shí)了聚乙二醇PEG、適配體和HA2成功連接到納米粒子表面。通過靜電力吸附將DNA與GSNPS進(jìn)行復(fù)合然后進(jìn)行上述的表面修飾并通過瓊脂糖凝膠電泳證實(shí)該納米粒子能夠有效載負(fù)質(zhì)粒DNA。2通過MTT實(shí)驗(yàn)對(duì)明膠硅氧烷納米粒子GSNPS、聚乙二醇和適配體修飾的明膠硅氧烷納米粒子GSPEGAPTNPS和聚乙二醇、適配體和多肽HA2修飾的明膠硅氧烷納米粒子GSPEGHA2APTNPS的細(xì)胞生物相容性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。通過激光共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞儀證實(shí)GSNPSGSPEGAPTNPS和GSPEGHA2APTNPS均能夠進(jìn)入A549細(xì)胞但是GSPEGAPTNPS和GSPEGHA2APTNPS進(jìn)入更多量大約為GSNPS的兩倍。同時(shí)通過活體成像技術(shù)觀測(cè)發(fā)現(xiàn)功能化的納米粒子攜帶質(zhì)粒DNA能夠有效靶向到裸鼠的腫瘤部位并能夠在腫瘤部位實(shí)現(xiàn)熒光素酶質(zhì)粒PGL3的有效表達(dá)。3利用變性試劑尿素UREA、鹽酸胍GDNHC1或含EGTA和DTT的其他變性試劑來考察HBV病毒樣核心顆粒在體外解離與重組的性質(zhì)。透射電鏡TEM觀測(cè)顯示HBV病毒樣顆粒在合適濃度的變性試劑作用下能夠?qū)崿F(xiàn)解離且在移除變性試劑后均能很好地實(shí)現(xiàn)病毒樣顆粒的重組且HBV病毒樣核心顆粒和多肽TAT修飾的HBV病毒樣核心顆粒進(jìn)入細(xì)胞后均具有較好的溶酶體逃逸能力。

簡(jiǎn)介：背景和目的盤狀結(jié)構(gòu)域受體（DDRS）是在研究表達(dá)于人類惡性腫瘤的酪氨酸激酶蛋白時(shí)發(fā)現(xiàn)的一種新的受體酪氨酸激酶（RTK）亞家族，其主要作用是感受微環(huán)境中膠原量和構(gòu)型的變化，然后以粘附、遷移、分化、生存、增殖的方式調(diào)節(jié)細(xì)胞反應(yīng)。在哺乳動(dòng)物中包括DDR1和DDR2兩類。研究顯示，DDR2在肝纖維化等病理過程中發(fā)揮重要作用。我們前期研究的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，在酒精性肝纖維化大鼠模型中，隨酒精灌胃進(jìn)行與肝纖維化程度進(jìn)展，DDR2表達(dá)呈時(shí)間依賴性增加，且DDR2與肝組織內(nèi)Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原及血清透明質(zhì)酸、Ⅳ型膠原等均呈正相關(guān)，并且在經(jīng)治療肝纖維化減輕的大鼠中，出現(xiàn)DDR2表達(dá)下調(diào)，表明DDR2表達(dá)與和纖維化程度相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步分析了盤狀結(jié)構(gòu)域受體2（DDR2）和基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP2）表達(dá)在大鼠酒精性肝纖維化發(fā)生中的作用。在以上研究的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)并構(gòu)建大鼠DDR2基因的RNA干擾慢病毒載體，包裝病毒顆粒并篩選有效的RNA干擾病毒。為進(jìn)一步研究DDR2的作用機(jī)制與肝纖維化等相關(guān)疾病的臨床治療提供RNA干擾工具。方法1、免疫組化檢測(cè)DDR2與MMP2在酒精性肝纖維化大鼠中的表達(dá)。成年雄性WISTAR大鼠共16只，正常飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為2組正常對(duì)照組（N組）與模型組（M組）。其中模型組10只，在橄欖油拌平衡飼料喂養(yǎng)大鼠的基礎(chǔ)上，給予每日兩次白酒、吡唑混合液胃內(nèi)灌注，白酒折算成酒精后其量及濃度每?jī)芍苓f增一次，吡唑按25MGKGD溶于灌胃酒精中。正常對(duì)照組（6只）給予等量生理鹽水每日兩次灌胃。模型組與正常對(duì)照組均于16周全部處死。取肝組織標(biāo)本，通過HE染色、MASSON染色觀察肝臟病理學(xué)改變，采用免疫組化染色方法觀察DDR2與MMP2在肝組織中的表達(dá)。2、DDR2基因RNA干擾慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定。（1）大鼠DDR2基因RNAI慢病毒載體的制備。根據(jù)在GENEBANK中檢索的大鼠DDR2基因序列，設(shè)計(jì)3對(duì)針對(duì)大鼠DDR2基因的SIRNA（SMALLINTERFERENCERNA，SIRNA）序列SIRNA1、SIRNA2、SIRNA3，設(shè)計(jì)合成含有相應(yīng)的短發(fā)夾RNA序列并具有AGEⅠ和ECⅠ酶切粘性末端干擾序列的雙鏈DNAOLIGO；PGCSILGFP慢病毒載體經(jīng)AGEⅠ和ECⅠ雙酶切后與雙鏈DNA連接重組，轉(zhuǎn)入用氯化鈣制備新鮮的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，進(jìn)行陽性克隆篩選、PCR和測(cè)序鑒定，獲得相應(yīng)VSHRNA慢病毒重組載體DDR2LVSHRNA。（2）重組VSHRNA慢病毒顆粒的包裝與滴度測(cè)定。將DDR2LVSHRNA、PHELPER10和PHELPER20三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，包裝擴(kuò)增出相應(yīng)的重組VSHRNA慢病毒顆粒DDR2LENTISHRNA1、DDR2LENTISHRNA2、DDR2LENTISHRNA3，倍比稀釋法在293T細(xì)胞中測(cè)定病毒的滴度。（3）有效DDR2VSHRNA慢病毒的篩選。用DDR2VSHRNA慢病毒感染體外培養(yǎng)NRK52E細(xì)胞。72小時(shí)后在熒光顯微鏡下觀察，根據(jù)細(xì)胞內(nèi)綠色熒光蛋白（GFP）的表達(dá)情況分析感染效率；5天后收集細(xì)胞實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)DDR2MRNA的表達(dá)水平。2△△CT法計(jì)算并比較各組病毒在細(xì)胞中對(duì)DDR2表達(dá)的基因沉默效應(yīng)，篩選有效的DDR2RNA干擾靶點(diǎn)。結(jié)果1、酒精灌胃造模16周后，模型組大鼠肝組織病理檢查呈典型的輕度肝纖維化表現(xiàn)，肝組織內(nèi)膠原纖維較正常對(duì)照組顯著增多（P001）。免疫組化檢測(cè)顯示，模型組DDR2、MMP2表達(dá)較正常對(duì)照組均有顯著性增加（P001），且DDR2在肝組織內(nèi)的分布與膠原纖維分布相一致。2、對(duì)重組陽性克隆的PCR鑒定顯示，連接入VSHRNA片段的陽性克隆PCR片段大小為343BP（從載體中切掉24BP），沒有連接入VSHRNA片段的空載體克隆PCR片段大小為306BP，鑒定結(jié)果和預(yù)期一致。測(cè)序結(jié)果表明合成的各組DDR2VSHRNA核苷酸序列均插入正確。采用慢病毒載體系統(tǒng)在293T細(xì)胞中包裝獲得3組重組慢病毒，病毒滴度達(dá)到2108TUML。分別感染NRK52E細(xì)胞后，熒光顯微鏡下觀察各重組慢病毒的感染效率均達(dá)到80％。RTPCR檢測(cè)分析顯示，DDR2LENTISHRNA1和DDR2LENTISHRNA3對(duì)NRK52E細(xì)胞DDR2MRNA表達(dá)的抑制效率達(dá)到80％以上。結(jié)論1、通過給予橄欖油拌平衡飼料喂養(yǎng)及白酒、吡唑混合液灌胃可以成功建立酒精性肝纖維化大鼠模型。DDR2可能通過MMP2介導(dǎo)膠原與肝星狀細(xì)胞間的相互作用，參與酒精性肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。2、成功構(gòu)建了3組DDR2基因RNA干擾慢病毒載體。RNA干擾慢病毒載體經(jīng)293T細(xì)胞包裝后，可獲得高滴度的重組慢病毒。在NRK52E細(xì)胞中篩選出DDR2LENTISHRNA1和DDR2LENTISHRNA3可高效特異性抑制DDR2基因表達(dá)，為有效靶點(diǎn)病毒。

簡(jiǎn)介：人巨細(xì)胞病毒HCMV含有約2025種蛋白質(zhì)其中在介導(dǎo)HCMV感染和病毒復(fù)制中有3種蛋白作用最為重要即由FUL82編碼的磷蛋白PP71、FUL83編碼的PP65蛋白和FUL69編碼的PUL69蛋白上述3種蛋白共同的特點(diǎn)是啟動(dòng)HCMV對(duì)宿主細(xì)胞的感染和病毒的復(fù)制同時(shí)在逃逸T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用中也具有重要作用新近的研究表明在這3種間層蛋白中以FUL82編碼的蛋白PP71的作用最為顯著該P(yáng)P71蛋白單獨(dú)存在時(shí)是一種較強(qiáng)的抗原蛋白可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體有助于清除病毒在器官移植者HCMV的感染后PP71蛋白的產(chǎn)生可以明顯增強(qiáng)細(xì)胞間黏附分子1ICAM1的表達(dá)從而引起移植物血管病變和排斥反應(yīng)在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤PP71蛋白的產(chǎn)生可以引起腫瘤蛋白P105P107P130等的衰變PP71蛋白可以誘導(dǎo)靜止的細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期并使他們停在G1晚期而這段時(shí)期對(duì)病毒復(fù)制最為有利所以它能夠增加病毒繁殖加快病毒在細(xì)胞間傳遞體外將HCMV轉(zhuǎn)染人纖維母細(xì)胞后病毒DNA復(fù)制效率在共轉(zhuǎn)染FUL82PP71蛋白條件下感染及復(fù)制效率增加了80倍研究證實(shí)PP71不僅對(duì)HCMV的IE1和IE2基因表達(dá)有促進(jìn)作用而且對(duì)晚期基因的表達(dá)以及病毒向正常宿主細(xì)胞的傳播具有促進(jìn)和加強(qiáng)作用因此BALDICK指出FUL82PP71蛋白可作為抗CMV病毒藥物設(shè)計(jì)的有效靶點(diǎn)為了進(jìn)一步研究PP71蛋白基因在大腸桿菌ECOLI中的表達(dá)為下一步蛋白的大量表達(dá)純化和基因工程抗體庫(kù)的篩選奠定基礎(chǔ)該研究進(jìn)行了以下工作1人巨細(xì)胞病毒的培養(yǎng)在傳代培養(yǎng)的人包皮成纖維細(xì)胞HFF中接種人巨細(xì)胞病毒并在含2﹪小牛血清的DMEM維持液中繼續(xù)培養(yǎng)至絕大多數(shù)的細(xì)胞都出現(xiàn)了明顯的細(xì)胞病變效應(yīng)CPE時(shí)凍融法收獲細(xì)胞保存在70℃免疫組化方法檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞中的PP65抗原顯示絕大多數(shù)的細(xì)胞已經(jīng)成功感染了巨細(xì)胞病毒2人巨細(xì)胞病毒PP71基因的克隆及PGEXPP71重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建1利用蛋白酶K法提取HCMVDNA2設(shè)計(jì)引物、PCR擴(kuò)增PP71基因目的片段3BAMHI和ECI內(nèi)切酶雙酶切目的片段和質(zhì)粒PGEX4T1并將PP71基因目的片段連接到PGEX4T1上利用氯化鈣法將重組質(zhì)粒PGEXPP71轉(zhuǎn)入DH5A大腸桿菌內(nèi)4提取重組質(zhì)粒PGEXPP71以BAMHI和ECI雙酶切方法和PCR方法初步鑒定重組質(zhì)粒然后測(cè)序?qū)P71基因DNA片段的測(cè)序結(jié)果與基因庫(kù)中的標(biāo)準(zhǔn)序列比較同源性約為996﹪說明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功3PGEXPP71重組質(zhì)粒在大腸桿菌中的表達(dá)及其表達(dá)條件的優(yōu)化當(dāng)?shù)鞍妆磉_(dá)條件為誘導(dǎo)溫度為37℃、誘導(dǎo)時(shí)間4H、IPTG濃度0405MMML能高效地表達(dá)出分子量約為71KD的目的蛋白與理論分子量一致占菌體總蛋白的30﹪左右

簡(jiǎn)介：目的觀察攜帶骨形態(tài)發(fā)生蛋白2的TETON慢病毒載體對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染表達(dá)及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后成骨的影響。方法取第3代人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分組培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)組穩(wěn)定轉(zhuǎn)染攜帶骨形態(tài)發(fā)生蛋白2的TETON慢病毒載體并加入10MGL強(qiáng)力霉素未加強(qiáng)力霉素組同實(shí)驗(yàn)組但不加強(qiáng)力霉素空病毒組轉(zhuǎn)染攜帶綠色熒光蛋白的慢病毒載體空白對(duì)照組未進(jìn)行任何處理。結(jié)果①骨形態(tài)發(fā)生蛋白2表達(dá)實(shí)驗(yàn)組、未加強(qiáng)力霉素組均有表達(dá)且實(shí)驗(yàn)組表達(dá)量高于未加強(qiáng)力霉素組P＜005空病毒組、空白對(duì)照組未見表達(dá)。②堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)組可見細(xì)胞胞漿中出現(xiàn)大量紅色或紅棕色顆粒未加強(qiáng)力霉素組可見少量紅色顆粒實(shí)驗(yàn)組堿性磷酸酶活性高于未加強(qiáng)力霉素組P＜005空病毒組、空白對(duì)照組未見明顯紅色顆粒。⑨茜素紅染色實(shí)驗(yàn)組、未加強(qiáng)力霉素組均可見鈣結(jié)節(jié)形成實(shí)驗(yàn)組較未加強(qiáng)力霉素組礦化結(jié)節(jié)數(shù)量多面積更大空病毒組、空白對(duì)照組未見明顯礦化結(jié)節(jié)形成。結(jié)論攜帶HBMP2的TETON慢病毒載體成功轉(zhuǎn)染人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞并可獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HUCMSCS。強(qiáng)力霉素可使穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HUCMSCS的HBMP2表達(dá)量顯著升高成骨能力顯著增強(qiáng)為進(jìn)一步研究HBMP2誘導(dǎo)HUCMSCS成骨分化治療骨壞死和骨缺損奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：我們的面前有一個(gè)世界，它一方面是科學(xué)的、認(rèn)知的，同時(shí)，它也是藝術(shù)的、審美的。我們總是在企圖通過各種途徑來接觸和理解這個(gè)世界。我們面前的世界，無論它有多么復(fù)雜，都可以用幾何圖形進(jìn)行概括。幾何，我們有理由相信，它是一種方法，在理解科學(xué)世界與藝術(shù)世界的過程中，它最為行之有效。幾何代表了人們對(duì)世界的一種基本假設(shè)，這種基本假設(shè)同時(shí)具有認(rèn)知與審美兩種性格。這就形成了兩種不同的切近自然的方式或者說是與自然相處的兩種不同方式，一種方式是認(rèn)知的，基于一種科學(xué)性的理解；另外一種則是審美的，基于一種藝術(shù)性的體驗(yàn)。這兩種性格又來源于同一個(gè)母體，觀念的幾何圖形或者是我們面前這個(gè)真實(shí)的世界。幾何自身的兩面性給予了它自身對(duì)世界的兩面性的理解和把握的能力，藝術(shù)正是依靠了幾何的這種兩面性、它的兩種品質(zhì)來展示面前的這個(gè)世界。在藝術(shù)中認(rèn)知與審美是一對(duì)矛盾，這兩種矛盾的品質(zhì)成就了藝術(shù)，又在斗爭(zhēng)中解構(gòu)了藝術(shù)。藝術(shù)的認(rèn)知功能逐漸遁去，藝術(shù)從它自身兩面性的斗爭(zhēng)中走向終結(jié)，同時(shí)又走向新的開始。我們很難說是幾何認(rèn)知功能的遁去瓦解了藝術(shù)，還是藝術(shù)拋棄了幾何的認(rèn)知功能，總之，藝術(shù)中的認(rèn)知的成分卻被體驗(yàn)的，審美的取代了。因?yàn)橛幸惶欤覀儼l(fā)現(xiàn)對(duì)于面前的這個(gè)世界我們根本無法確證，于是想方設(shè)法讓世界自身展示出它自己來。所以，我們要區(qū)分藝術(shù)與現(xiàn)代藝術(shù)。在現(xiàn)代藝術(shù)中，幾何仍舊是一個(gè)重要角色，即便是在梵高印象主義的作品中我們也還能找出幾何的痕跡。但是在其中我們已經(jīng)看不出科學(xué)的、認(rèn)知的成分，更多的是審美的，和體驗(yàn)的，和表現(xiàn)的，這才是藝術(shù)專屬、獨(dú)立的品質(zhì)。從形式上看來現(xiàn)代藝術(shù)有走向原始、回到最初的傾向，但是，這卻是一個(gè)經(jīng)過思辨后新的開始。

簡(jiǎn)介：中山大學(xué)博士學(xué)位論文通過CD123分子靶向白血病干細(xì)胞治療急性髓性白血病的病毒基因治療策略及研究姓名譚麗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師黃文林20090526【L山人學(xué)博I學(xué)位論文譚暇白血病的治療，不僅可以清除LSC而且還不會(huì)對(duì)造血于細(xì)胞HEMATOPOIETICSTEMCELL，HSC造成損傷，是AML治療的有效方案。白血病的基因靶向治療是一種值得探索的方案。有效的基因治療依賴于外源基因高效、穩(wěn)定的表達(dá)，病毒載體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移以其高轉(zhuǎn)染效率和良好的靶向性而成為基因治療中應(yīng)用最廣泛的技術(shù)手段?；蛑委熒婕鞍谢?、靶基因載體和靶基因的表達(dá)調(diào)控。在本課題的研究中我TFJ汞用CDL23分子作為靶，運(yùn)用分子生物學(xué)的技術(shù)和手段對(duì)病毒載體進(jìn)行修飾或加工使其能夠充分地靶向白血病母細(xì)胞群及白血病干細(xì)胞，以期達(dá)到治療白血病的目的。本研究分三部分L、靶基因的選擇首先我們通過體外的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)確定了對(duì)細(xì)胞有明顯毒性作用的靶基因即長(zhǎng)臂猿白血病病毒的融合基因包膜糖蛋白GIBBONAPELEUKEMIAVIRUS，GALVFMG，研究結(jié)果顯示GALVFMG在AML細(xì)胞株HL60細(xì)胞中的表達(dá)可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)牛融合，形成多核合胞體，融合指數(shù)在轉(zhuǎn)染后的96H達(dá)至1153257％，和空載體轉(zhuǎn)染組及空白組相比有顯著的差別P005。多核合胞體的形成可引起伴隨ATP消耗的線粒體失能，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生壞死性死亡，PI染色發(fā)現(xiàn)死亡的多核合胞體在第5天達(dá)到總合胞體的約70％，而乳酸脫氫酶的活性在同樣的時(shí)間里也達(dá)到了約80％。說明多核合胞體的不斷形成導(dǎo)致了細(xì)胞死亡的不斷發(fā)牛。我們通過AO／EB染色也發(fā)現(xiàn)GALVFMG轉(zhuǎn)染組的HL60細(xì)胞表現(xiàn)為大量的壞死。GALVFMG的表達(dá)引起細(xì)胞發(fā)生死亡的機(jī)制與HSP70的表達(dá)增加有關(guān)，我們的研究發(fā)現(xiàn)GALVFMG的表達(dá)不僅可以誘導(dǎo)HSPT0的表達(dá)增高，而且還可以通過阻斷IRBA的降解來抑制NF出活性和核轉(zhuǎn)位，而NFKB的抑制被發(fā)現(xiàn)又可以負(fù)調(diào)控HSP70的表達(dá)。因此GALVFMG可通過抑制NFRD3對(duì)HSP70的表達(dá)產(chǎn)生正反饋的作用。根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果就選定了GALVFMG基因作為進(jìn)行自血病基因治療的靶基因。2、重組辛德畢斯病毒載體的構(gòu)建及研究GALV包膜糖蛋白含有表面單位SU和轉(zhuǎn)膜元件TM二個(gè)部分。腫瘤基因治療的一個(gè)很重要的目標(biāo)就是發(fā)現(xiàn)新的靶向性的細(xì)胞毒基因。由于IL3的A受體即II

簡(jiǎn)介：第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文編碼鼠CD20腺病毒載體感染的樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)抗小鼠淋巴瘤免疫姓名王友臣申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師譚曉華20080501第三軍醫(yī)火學(xué)碩士學(xué)位論文MCD20／EGFP細(xì)胞作為靶細(xì)胞，免疫后小鼠脾細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞，用3個(gè)效靶比ET1001、501和25L，用乳酸脫氫酶釋放實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CTL殺傷率。3體內(nèi)荷瘤實(shí)驗(yàn)取C57BL／6小鼠20只，46周182G，雌性，隨機(jī)分為兩組，實(shí)驗(yàn)組AD5／35MCD20感染DCS免疫1次，10只，對(duì)照組DL70一3感染DCS免疫1次，10只。具體免疫方法同細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)。免疫1周后，以生理鹽水調(diào)整B16F10MCD2研EGFP細(xì)胞濃度為2105個(gè)／200“1，按每只小鼠2105B16FLOMCD20／EGFP細(xì)胞小鼠右后腿上部背側(cè)皮下接種。接種后前14天隔日觀察，14天后每日觀察小鼠成瘤情況，此時(shí)尚未成瘤的小鼠繼續(xù)觀察至兩個(gè)月。結(jié)果1用G418篩選及流式細(xì)胞儀分選技術(shù)相結(jié)合的方法可獲得穩(wěn)定表達(dá)MCD20的B16F10MCD20／EGFP腫瘤細(xì)胞株，流式細(xì)胞儀檢測(cè)991％的細(xì)胞表達(dá)EGFP，997％表達(dá)MCD20。2體外細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)在效靶比為1001、501和251情況下，實(shí)驗(yàn)組的殺傷率分別為6383772％，T1533，PO01、477053L％T1423，PO01和2273311％T874，P001，對(duì)照組的殺傷率分別為1537O80％、1283284％和11101OL％。實(shí)驗(yàn)結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3荷瘤實(shí)驗(yàn)對(duì)照組小鼠在接種2105細(xì)胞的B16F10MCD20／EGFP細(xì)胞后16至18D內(nèi)全部有腫瘤生長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)組僅于18D1只、20D2只、24D1只共有4只小鼠成瘤，且腫瘤體積小于對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組其余小鼠繼續(xù)觀察至2個(gè)月，仍未見腫瘤生長(zhǎng)。對(duì)照組成瘤率為L(zhǎng)OO％，實(shí)驗(yàn)組為40％，兩組間成瘤率有顯著性差異X2857，PO01。提示AD5／35MCD20能產(chǎn)生抗小鼠淋巴瘤的特異性免疫，對(duì)CD20的淋巴瘤小鼠有免疫保護(hù)作用。結(jié)論AD5／35MCD20免疫小鼠能誘導(dǎo)特異性的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞CTL的產(chǎn)生，其CTL殺傷率與效靶比有關(guān)；AD5／35MCD20能產(chǎn)生抗小鼠淋巴瘤的特異性免疫，對(duì)CD20的淋巴瘤小鼠有免疫保護(hù)作用。關(guān)鍵詞樹突狀細(xì)胞；腺病毒載體；CD20；淋巴瘤；免疫治療6