簡(jiǎn)介：分類號(hào)R74ICS學(xué)校代碼10136學(xué)號(hào)201200136委￡≈莖一3家名民慶大學(xué)首發(fā)腦小血管閉塞性卒中患者早期認(rèn)知功能評(píng)價(jià)EVALUATIONOFCOGNITIVEFUNCTIONONPATIENTSWITHFIRSTEPISODEOFSMALLVESSELOCCLUSIVESTROKEINTHEIREARLYSTAGE申請(qǐng)人金花學(xué)科專業(yè)臨床醫(yī)學(xué)研究方向神經(jīng)病學(xué)學(xué)位類別專業(yè)學(xué)位指導(dǎo)教師I張東威論文提交日期二。一五年五月ABSTRACTOBJECTIVETHISPAPERISTOEVALUATECOGNITIVEFUNCTIONOFTHEFIRSTEPISODEOFSMALLVESSELOCCLUSIVESTROKEPATIENTSBYMEANSOFMINIMENTALSTATEEXAMINATIONMMSE】ANDMONTREALCONGITIVEASSESSMENTMOCAALSO，THESENSIBILITYANDSPECIFICITYOFMMSEWERECOMPAREDWITHMOCAFORASSESSINGCOGNITIVEDYSFUNCTIONOFTHEFIRSTEPISODEOFSMALL。VESSELOCCLUSIVESTROKEPATIENTSINTHEIREARLYSTAGEINTHISPAPERTHEBESTCUTOFFPOINTFOREVALUATIONOFTHECOGNITIVEDYSFUNCTIONOFTHEFRRSVEPISODEOFSMALLVESSELOCCLUSIVESTROKEPATIENTSINTHEIREARLYSTAGEISDETERMINEDBYMAXIMUMYOUDENINDEXMETHODATOTAL100CASESOFPATIENTGROUPWHICHWASDIAGNOSEDASTHEFIRSTEPISODEOFSMALLVESSELOCCLUSIVESTROKE。ANDMATCHESTHEINCLUSIONANDEXCLUSIONSTANDARDCOLLECTEDFROMTHEINPATIENTANDOUTPATIENTINNEUROLOGYDEPARTMENTOFAFFILIATEDHOSPITALOFINNERMONGOLIAUNIVERSITYFORNATIONALITIES，DURINGNOVEMBER2013TONOVEMBER2014INTHEMEANTIME，WETAKE100HEALTHYSUBJECTSFROMTHEINPATIENTANDOUTPATIENTWHOMATCHTHECONTROLSTANDARDANDPASSTHEPHYSICALEXAMINATIONTHENWECOLLECTEDTHEIRCLINICALDATAANDWEALSODIDNEUROPSYCHOLOGICALEVALUATIONAMONG2GROUPSRESULTS1THEMOCASCORESWERESIGNIFICANTLYLOWERINPATIMTSGROUP衄THENAMALGROUP2099士422VS27154136菡、砌ASLKMMSE儺2587士321VS27294220THEPATIENTGROUPJSSCORESOFEVERYCOGNITIVEMEASUREINMOCASCALEWERESIGNIFICANTLYLOWERTHANTHATTHECONTROLGROUPESPECIALLYINTHESETHREEASPECTSOFVISUOSPATIALEXECUTIVEFUNCTION，ATTENTIONANDDELAYEDMEMORYRECALL005，ALSOTHEPATIENTGROUP’SSCORESOFEVERYCOGNITIVEMEASUREINMMSESCALEWERESIGNIFICANTLYLOWERTHANTHATTHECONTROLGROUPINTHEMEMORYRECALLP0052THEBESTCLINICALCUTOFFPOINTOFTHEMMSETESTFORTHEFIRSTEPISODEOFSMALLVESSELOCCLUSIVESTROKEPATIENTS‘EARLYCOGNITIVEDYSFUNCTIONWAS25／26，WHICHWASPRIMARILYDETERMINEDBYRECEIVEROPERATINGCHARACTERISTICANDTHEMAXIMUMYOUDENINDEXWITH25／26ASTHECUTOFFPOINTTHESENSIBILITYANDSPECIFICITYOFMOCASCALEISSIGNIFICANTLYHIGHERTHANTHEMMSESCALEWITH26／27ASTHECUTOFFPOINT，THESENSIBILITYIS73％，ANDTHESPECIFICITYIS50％TOEVALUATETHEFIRSTEPISODEOFSMALLVESSELOCCLUSIVESTROKEPATIENTS’EARLCOGNITIVEDYSFUNCTION，THESENSIBILITYIS93％FORMOCATEST，ANDTHESPECIFICITYIS87％3THEMMSEANDMOCASCORESWEREDIFFERFROMPATIENTS’EDUCMIONLEVELSFORTHEPATIENTGROUP，THEMOCAANDMMSESCORESOFTHOSEWHOGOTTHEMIDDLESCHOOLANDTHEABOVEEDUCMIONWERESIGNIFICANTLYHIGHERTHANTHOSEWHORECEIVEDUNDERMIDDLESCHOOLEDUCATIONP005；FORTHECONTROLGROUP，THEMOCASCOREOFTHEWHOGETMIDDLESCHOOLANDTHEABOVEEDUCATIONWEREHIGHERTHANTHOSEWHO

簡(jiǎn)介：浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文杭州地區(qū)腹瀉嬰幼兒諾如病毒感染狀況及危險(xiǎn)因素研究姓名孫晝申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)指導(dǎo)教師陳坤20100401浙江人學(xué)碩上學(xué)位論文中文摘要材料與方法20052007年每年1112月及2008年1月至12月，從浙江省兒童醫(yī)院內(nèi)科門(mén)診采集在杭州持續(xù)居住半年以上，年齡在5歲以下，臨床診斷為病毒性腹瀉的就診患幾糞便標(biāo)本。采用熒光實(shí)時(shí)RTPCR法檢測(cè)標(biāo)本諾如病毒核酸，同時(shí)采用膠體凝集試驗(yàn)法檢測(cè)樣本中的A群輪狀病毒，并開(kāi)展患兒一般情況、臨床表現(xiàn)、感染的危險(xiǎn)因素的專項(xiàng)調(diào)查。選擇同期前往浙江省兒童醫(yī)院外科及呼吸道發(fā)熱門(mén)診就診，近二周內(nèi)未發(fā)生過(guò)腹瀉癥狀的患兒作為對(duì)照組。收集2006年至2008年，杭州地區(qū)發(fā)生的實(shí)驗(yàn)室診斷為諾如病毒暴發(fā)疫情的流行病學(xué)資料，了解疫情的危害及可能的暴發(fā)原因。本研究主要采用SPSSL30統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行，對(duì)正態(tài)分布計(jì)量資料作T檢驗(yàn)，非正態(tài)分布計(jì)量資料采用秩和檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料作卡方檢驗(yàn)，通過(guò)分析篩選出諾如病毒感染有影響的相關(guān)因素。對(duì)單因素分析中顯著性水平小于O25的變量放入回歸模型，通過(guò)逐步回歸方法分別擬合多因素非條件LOGISITC回歸模型，模型中顯著性水平小于005的予以納入，大于O10的予以剔除。結(jié)果1本次研究共完成634例臨床診斷為病毒性腹瀉患兒的調(diào)查與糞便標(biāo)本采集檢測(cè)工作，根據(jù)診斷標(biāo)準(zhǔn)確定78例諾如病毒感染患兒及271例輪狀病毒感染患兒，完成161例對(duì)照人群的調(diào)查工作。經(jīng)檢測(cè)，諾如病毒總陽(yáng)性檢出率為1230％78／634，輪狀病毒總陽(yáng)性檢出率為4274％271／634，未發(fā)現(xiàn)混合感染病例。1月、2月、11月、12月為檢出高峰月。2諾如患兒的主要臨床表現(xiàn)為發(fā)熱，腹瀉、嘔吐等胃腸道癥狀，與輪狀病毒感染的患兒相比，諾如病毒感染的患兒更易出現(xiàn)嘔吐癥狀。3杭州地區(qū)嬰幼兒諾如病毒胃腸炎感染的影響因素包括家庭居住地、流動(dòng)人口、家庭月收入、便后家長(zhǎng)洗手習(xí)慣，定期清洗抹布及母乳喂養(yǎng)等。478株諾如病毒分子分型結(jié)果顯示，GⅡ遺傳組占大多數(shù)，GⅡ／4型基因型是本地區(qū)流行的主要基因型。52006年至2008年，杭州地區(qū)共報(bào)告7起群體性諾如病毒急性胃腸炎暴發(fā)疫III

簡(jiǎn)介：目的慢性乙型病毒性肝炎是一種嚴(yán)重危害我國(guó)人民健康的疾病。局部的調(diào)查顯示，國(guó)內(nèi)一般人群HBSAG陽(yáng)性率約為9％。這些乙肝病毒攜帶者中的大部分機(jī)體最終將病毒清除，但是仍有相當(dāng)一部分?jǐn)y帶者轉(zhuǎn)變成為慢性乙型肝炎。同一種病毒感染不同的宿主，產(chǎn)生不同的后果，說(shuō)明慢性乙型病毒性肝炎的發(fā)生，除了病毒感染以外，還與宿主的遺傳易感性有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)擬觀察慢性乙肝病人和健康體檢者中CCR5基因表達(dá)的多態(tài)性情況，以探討CCR5表達(dá)和慢性乙型病毒性肝炎的關(guān)系。方法實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)組病例選自本院肝病專科病房收治的慢性乙型病毒性肝炎病人，診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2000年9月西安第十次全國(guó)傳染病和寄生蟲(chóng)病學(xué)術(shù)會(huì)議制定的病毒性肝炎防治方案中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并排除以下病人①病人重疊有丙型，丁型肝炎的；②病人合并有肝臟惡性腫瘤的。對(duì)照組選白同期在我院進(jìn)行健康體檢的普通人群，并排除體檢結(jié)果中有①HBSAG陽(yáng)性，②肝功能ALT或者GGT大于正常值上限③HBVDNA定量大于500COPIESML的個(gè)體。實(shí)驗(yàn)組病人入院后抽靜脈血，測(cè)定GGT，ALT，測(cè)定乙肝五項(xiàng)，對(duì)照組體檢者測(cè)定GGT，ALT和乙肝五項(xiàng)。同時(shí)留EDTA抗凝血標(biāo)本2ML，先用簡(jiǎn)化鹽析法提取DNA備用。對(duì)于符合入選標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)本，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增后的DNA片段經(jīng)限制性核酸內(nèi)切酶消化。酶切產(chǎn)物經(jīng)20％瓊脂凝膠電泳，最后用紫外線凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)二病例選自本院肝病專科病房收治的慢性乙型病毒性肝炎病人，診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除標(biāo)準(zhǔn)同實(shí)驗(yàn)一，病人入院后抽靜脈血，測(cè)定HBVDNA定量，測(cè)定GGT，ALT，測(cè)定乙肝五項(xiàng)，同時(shí)留EDTA抗凝血標(biāo)本2ML，先用簡(jiǎn)化鹽析法提取DNA備用。對(duì)于符合入選標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)本，后續(xù)實(shí)驗(yàn)步驟同實(shí)驗(yàn)一。結(jié)果用特異性引物擴(kuò)增的DNA片段起始于CCR5基因的97位，終止于53位，片段長(zhǎng)1010BP，BGLⅡ識(shí)別序列AGATCT，當(dāng)503位的堿基是G時(shí)即503位沒(méi)有發(fā)生突變?cè)谒鶖U(kuò)片段中僅有503位符合該識(shí)別序列的酶切位點(diǎn)，所以該產(chǎn)物片段被切成兩個(gè)部分；當(dāng)503位的堿基是T時(shí)即503位發(fā)生了點(diǎn)突變?cè)谒鶖U(kuò)片段中沒(méi)有符合該識(shí)別序列的酶切位點(diǎn)，該產(chǎn)物片段不能被該酶消化。BSTMCI識(shí)別序列CGATCG，當(dāng)999位點(diǎn)堿基是G時(shí)即999位沒(méi)有發(fā)生突變?cè)谒鶖U(kuò)片段中沒(méi)有符合該識(shí)別序列的酶切位點(diǎn)，該產(chǎn)物片段不能被該酶消化；當(dāng)999位的堿基是T時(shí)即999位發(fā)生了點(diǎn)突變，1000位符合該識(shí)別序列中的酶切位點(diǎn)，從而使該片段可以被該酶消化，產(chǎn)物被分為兩個(gè)片段。CCR5基因的503位點(diǎn)，在慢性乙型病毒性肝炎的病人中，表達(dá)G的個(gè)體較多，而在對(duì)照的健康體檢人群中，表達(dá)T的個(gè)體較多，二者相比有顯著性差異P＜0005。同樣的，CCR5基因的999位點(diǎn)，在慢性乙型病毒性肝炎的病人中，表達(dá)G的個(gè)體較多，而在對(duì)照的健康體檢人群中，表達(dá)T的個(gè)體較多，二者相比有顯著性差異P＜005。在慢性乙型病毒性肝炎病人中，CCR5基因的503、999位點(diǎn)同時(shí)發(fā)生變異，或者503、999位點(diǎn)的其中一個(gè)發(fā)生變異的病人和兩個(gè)位點(diǎn)均不發(fā)生變異的個(gè)體之間比較，兩組病人之間的HBVDNA水平有顯著性差異P＜005，而CCR5基因的503、999位點(diǎn)同時(shí)發(fā)生變異，503和999位點(diǎn)其中一個(gè)發(fā)生變異的三組個(gè)體比較，HBVDNA水平無(wú)明顯差異P＞005。結(jié)論當(dāng)CCR5基因503位表達(dá)T時(shí)，和或999位表達(dá)T時(shí)，其產(chǎn)物可能有保護(hù)機(jī)體免受乙型肝炎病毒侵害的作用或者有促進(jìn)機(jī)體清除乙型病毒性肝炎病毒的作用，但尚不能證明二者同時(shí)變異時(shí)有協(xié)同作用。

簡(jiǎn)介：中文摘要人乳頭瘤狀病毒HPV感染和MHCI類分子表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生關(guān)系的研究摘要目的人乳頭瘤狀病毒HUMANPAPILLOMAVIRUS，HPV是一種嗜上皮性的球形DNA病毒，能引起皮膚黏膜的鱗狀上皮增生。1978年HARALDZURHANSEN提出HPV可能是性傳播致癌的因素，并證實(shí)宮頸癌的發(fā)生與HPV的直接關(guān)系。之后研究者陸續(xù)發(fā)現(xiàn)HPV可能與直腸癌、食管癌、口腔癌、扁桃體癌等疾病有關(guān)。HPVDNA在宿主細(xì)胞中有二種存在方式，即整合狀態(tài)和游離狀態(tài)染色體外的附加形式，在癌前組織中病毒常位于染色體外，而在癌癥進(jìn)展期，病毒DNA以單拷貝或多拷貝串聯(lián)形式整合到宿主細(xì)胞DNA中，其結(jié)合位點(diǎn)多位于E2基因附近，結(jié)果導(dǎo)致HPVE2基因?qū)6、E7基因啟動(dòng)的負(fù)向調(diào)節(jié)作用缺乏，使E6、E7基因表達(dá)異常，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)失控。主要組織相容性復(fù)合體IMAJORHISTOCOMPATIBILITYCOMPLEXI，MHCI參與內(nèi)源性抗原病毒抗原、腫瘤抗原等加工、處理，其作用是將蛋白抗原處理成抗原肽，呈遞給抗原特異性T淋巴細(xì)胞，進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，清除有害抗原。有研究發(fā)現(xiàn)食管癌、胃癌、大腸癌、肺癌、宮頸癌中MHCI類相關(guān)分子蛋白表達(dá)下調(diào)，本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)DON脫氧雪腐鐮刀菌烯醇可使食管上皮細(xì)胞及人單個(gè)核細(xì)胞中皿AI、CALNEXIN、TAP】、LMP2表達(dá)降低。許多病毒可感染人的皮膚和黏膜組織，干擾MHCI抗原提呈過(guò)程，使其逃避宿主免疫應(yīng)答。惡性腫瘤的發(fā)生是多種因素參與的過(guò)程，除與病毒感染有關(guān)外，機(jī)體免疫狀況也發(fā)揮著重要作用。有研究者發(fā)現(xiàn)食管鱗狀細(xì)胞癌與HPV感染有關(guān)，HPV感染人食管鱗狀上皮后，其E6、E7致癌基因異常表達(dá)，E6可使抑癌基因P53基因失活，而E7則與抑癌基因PRB有關(guān)。在宮頸癌發(fā)病機(jī)制研究中發(fā)現(xiàn)高危型HPV的E5基因可以下調(diào)MHCI類分子蛋白表達(dá)，抑制腫瘤抗原提呈，使其無(wú)法被清除，被認(rèn)為是宮頸癌的致癌機(jī)制之一。但也有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)在宮頸癌形成后，E5基因丟失，而在宮頸癌前病變中如CINI級(jí)中可以檢測(cè)到E5基因，所以有學(xué)者認(rèn)為E5基因只在癌癥發(fā)生前起作用?；谝陨涎芯拷Y(jié)果，本實(shí)驗(yàn)設(shè)想E5基因是否影響HPV感染的食管

簡(jiǎn)介：山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文太原地區(qū)五歲以下腹瀉住院兒童輪狀病毒的分子流行病學(xué)研究姓名蘭蓓申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)指導(dǎo)教師李佩珍20100505PQ醫(yī)科人學(xué)碩I學(xué)何論文MOLECULAREPIDEMIOLOGYOFROTAVIRUSAMONGCHILDRENUNDER5YEARSOLDHOSPITALIZEDFORDIARRHEAINTAIYUANABSTRACTOBJECTIVESTBSTUDYTHEINFECTEDINFORMATION，CLINICALSYMPTOMARLDNNMOLECULAREPIDEMIOLOGICALCHARACTERISTICSOFHRVINFECTION鋤ONGHOSPITALIZEDCHILDRENWITHACUTEDIA玎HEAUNDER5YEARSOLDIN1’AIYUAN，F(xiàn)BM2007TO2008；TOCOREECTTHEBACKGROUNDDATARELATEDWITHVIRALDI礎(chǔ)EA；TOPMVIDEREFERENCESFORPREVENTIONANDTREATOFTHEDISEASEMETHODSATOTALOF346STOOLS、VERECOLLECTEDFROMHOSPITALIZEDCHILDRENWITHACUTEDIARRHEA明DER5YEARSOLDINTAIYUANBET、，EEN2007，LLTO2008，L0，ROTAVIMSPOSITIVESPECIMENSⅥ，EREIDENTIFIEDBYELISAKITG／PTYPINGASSAYSWERECONFIRMEDWITHMULTIPLEXSEMINESTEDFMPCRTHESEPOSITIVEPRODUCTSWEREPURIFIED，EXTRACTEDPLASMID，THENSELECTEDTHESPECIEMESWHICHWERECONFINNEDBYPLASMIDPCRTESTTOBESEQUENCEDTHENUCLEICACIDIDENTIFYTHEGENOTYPEANDGENOGROUPOFAVAILABLESTRAINSRESULITSATOTALOF346STOOLSWERECOLLECTEDFBOMHOSPITALIZEDCHILDRENWITHACUTEDIARRHEAUNDER5YEARSOLDINTAIYUANBET、VEEN2007，1LTO2008，LOOFTHE346SPECIMENS，THEPERCEMAGEOFSAMPLES謝THI沁TAVIMSWAUS408％AMONG14LROTAVIMSPOSITIVESAMPLES，SERO哆PEGL426％WASTHEPREDOMINAILTS仃AINFOLLO、ⅣEDBYG3262％，G9106％ANDMIXEDGINFECTION64％142％OFSTRAINSREMAINEDT0BENONTYPEABLEPGENO帥INGSHOWEDP8】681％WASMOSTCOMMONFOLLOWEDBYP【4】07％，ANDNONTYPEABLE241％THEMOSTCOMMONCOMBINATIONOFGANDP、VASGLP【8】319％，F(xiàn)OIIOV，EDBYG3P8】184％A11DG9P8】71％M0RETHAN957％OFVIRALDIARRHEAPATIENTSUNDERHOSPITALIZATIONOCCURREDAMONGCHILDRENYOUNGERTHAN2YEARSCONCLUSIONSROTAVIMSREMAINSTLLEMOSTSIGNIFICANTVIRALAGENTCAUSINGDIAHHEAHOSPITALIZATIONAMONGCHILDRENUNDERMEAGEOF5YEARSINTAIYUANTHEMOSTCOMMONCHILDRENWITHROTAVIMSINFECTIONSWEREYOUNGERTHAIL2YEARSOLDRVPREVALENCEPEAKEDFROMSEPTEMBERTONOVEMBER7IHEPREDOMINANTSTMINSOFROTAVIRUSWEREG1ANDP8】INTAIYUANCITYINFORMATIONONTHEDIVERSITYANDCOMPLEXITYOFRVSTRAINSCIRCULATINGINTAIYUANPROVIDESUSEFULDATAFORFO硼ULATINGVACCINEPOLICYANDEVALUATINGVACCINEE伍CACYKEYWORDSROTAVIMS；DIALLRHEA；MOLECULAREPIDEMIOLOGYII

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多護(hù)理專業(yè)大學(xué)生生活事件、認(rèn)知情緒調(diào)節(jié)與心理韌性的關(guān)系研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：甲肝病毒HEPATITISAVIRUS，HAV和戊肝病毒是腸道傳播的肝炎病毒。兩種都是無(wú)包膜的正鏈小RNA病毒。HAV主要感染兒童，但隨著年齡增加，一旦感染，肝炎癥狀會(huì)更嚴(yán)重。戊肝暴發(fā)主要發(fā)生在許多發(fā)展中國(guó)家，導(dǎo)致數(shù)萬(wàn)人感染。在孕婦患者中，戊肝致死率較高，可達(dá)20％。此外，HAV和HEV從流行病學(xué)到臨床癥狀都很相似，主要依靠實(shí)驗(yàn)室檢查進(jìn)行鑒別。已有文獻(xiàn)報(bào)道因飲用了被HAV和HEV污染的水而同時(shí)感染甲肝和戊肝的病例。本論文主要研究了HAVVP1和HEVF2編碼的抗原片斷形成嵌合類病毒顆粒的免疫原性。將HAVVP1AA24～171與HEVF2AA431～615N端相連，形成重組抗原AEAG342或與F2C端相連，形成EAAG342重組抗原。將上訴兩種嵌合抗原基因插入表達(dá)載體PBV220，在大腸桿菌BL21中獲得了高效表達(dá)。但只有重組蛋白EAAG342能形成直徑10～20MM的VLP顆粒。SDSPAGE顯示該抗原能形成部分二聚體結(jié)果，WESTERNBLOT顯示該二聚體能與人抗HAV和HEV陽(yáng)性血清反應(yīng)。本研究評(píng)價(jià)了重組蛋白AEAG342和EAAG342誘導(dǎo)的特異體液免疫反應(yīng)。兩組昆明鼠，每組5只，分別注射一種重組抗原10ΜG弗氏佐劑，3周后再注射一次，同時(shí)設(shè)一組空白對(duì)照組。于第一次免疫后2，4，6，8和10周采血測(cè)特異性抗HAV和HEVIGG滴度。結(jié)果顯示EAAG342誘導(dǎo)的抗體滴度在第8周達(dá)到了180000，顯著高于AEAG342組。同時(shí)，EAAG342組的抗HAV抗體滴度達(dá)到了17000，也高于AEAG342組。本研究的結(jié)果說(shuō)明了嵌合VLPEAAG342可以誘導(dǎo)良好的抗HAV和HEV免疫反應(yīng)。此外，嵌入的HAVP1片斷可以增強(qiáng)VLP的免疫原性，同時(shí)VLP也賦予了HAVVP1良好免疫原性。

簡(jiǎn)介：目的應(yīng)用RNAIRNAINTERFERENCE技術(shù)探討靶向Α13半乳糖基轉(zhuǎn)移酶Α13GT的SHRNA重組慢病毒載體抑制小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞Α13GT和Α13半乳糖殘基GALΑ13GAL表達(dá)的可行性。方法采用組織植塊法體外培養(yǎng)小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞；經(jīng)體外設(shè)計(jì)合成針對(duì)Α13GTMRNA的序列特異性SHRNA并構(gòu)建攜帶Α13GTSHRNA的重組慢病毒載體，以慢病毒感染小鼠血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞系EOMA；熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后Α13GTMRNA表達(dá)水平的變化，免疫熒光檢測(cè)異種抗原GALΑ13GAL表達(dá)水平的變化；使用SPSS130FWINDOWS進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果體外組織植塊培養(yǎng)可獲得純度較高的小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞；成功構(gòu)建了重組慢病毒載體質(zhì)粒。經(jīng)病毒包裝后，得到了攜帶Α13GTSHRNA的成熟的重組慢病毒顆粒；熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)顯示構(gòu)建的重組慢病毒轉(zhuǎn)染EOMA，能抑制Α13GT的表達(dá)，抑制率約為88％P005；免疫熒光檢測(cè)顯示Α13GTSHRNA重組慢病毒轉(zhuǎn)染后細(xì)胞GALΑ13GAL抗原水平較對(duì)照組明顯降低P005。結(jié)論通過(guò)組織植塊法可實(shí)現(xiàn)小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)并傳代，但傳代的次數(shù)有限；本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了靶向Α13GT基因的重組慢病毒載體，并利用該慢病毒載體成功地將Α13GTSHRNA表達(dá)框架轉(zhuǎn)導(dǎo)入EOMA細(xì)胞，使其持續(xù)表達(dá)，實(shí)現(xiàn)了靶向Α13GT基因的RNA干擾。重組慢病毒載體有效地抑制了Α13GTMRNA，并且抑制了其所催化的蛋白GALΑ13GAL的表達(dá)。通過(guò)實(shí)驗(yàn)，初步說(shuō)明慢病毒載體介導(dǎo)的RNAI技術(shù)對(duì)沉默Α13GT基因從而下調(diào)異種抗原GALΑ13GAL表達(dá)的策略是可行的。從而為進(jìn)一步研究利用RNAI技術(shù)減輕異種移植超急性排斥反應(yīng)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

簡(jiǎn)介：溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文皮膚惡性黑素瘤與人乳頭瘤病毒感染的相關(guān)性研究姓名高宇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)皮膚性病學(xué)指導(dǎo)教師吳式琇20080501溫州醫(yī)學(xué)院碩上學(xué)位論文超過(guò)3年者26例，3年內(nèi)病死者39例，HPV表達(dá)陽(yáng)性率分別為28．21％11／39和7．69％2／26經(jīng)X2檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義PO．05。以生存時(shí)間分類變量為應(yīng)變量，以年齡、性別、病灶直徑、CLARK病理分級(jí)、病程進(jìn)展?fàn)顩r為協(xié)變量作LOGISTIC回歸分析，P病程進(jìn)展?fàn)顩r0．06，P咿VO．04，B咿、R2．24，B病程進(jìn)展概O．997，皮膚惡性黑素瘤細(xì)胞HPV表達(dá)有減少患者長(zhǎng)期生存的危險(xiǎn)，病程進(jìn)展?fàn)顩r有影響患者長(zhǎng)期生存的趨勢(shì)。結(jié)論HPV感染可能與皮膚惡性黑素瘤的發(fā)病有一定關(guān)系，且HPV陽(yáng)性者可能影響皮膚惡性黑素瘤患者長(zhǎng)期生存。關(guān)鍵詞惡性黑素瘤人乳頭瘤病毒預(yù)后

簡(jiǎn)介：目的艾滋病是一種嚴(yán)重危害人類生命健康的致死性慢性傳染病，雖然至今還沒(méi)有有效的疫苗，但大量研究證實(shí)CD8T細(xì)胞介導(dǎo)的CTL應(yīng)答在疾病的控制過(guò)程中起了重要作用。急性期CTL應(yīng)答的出現(xiàn)伴隨著病毒載量的明顯下降，并在很大程度上決定著病毒調(diào)定點(diǎn)水平的高低。近年來(lái)，男男同性MENWHOHAVESEXWITHMEN，MSM傳播方式增長(zhǎng)迅速，同時(shí)基于人群水平的分子流行病學(xué)研究表明，在中國(guó)MSM感染者中CRF01AE亞型已經(jīng)成為主要流行亞型。雖然關(guān)于歐美及高加索人群中流行的B、C亞型病毒的CTL應(yīng)答已經(jīng)有了廣泛而深入的研究，但不同病毒亞型及不同感染人群CTL應(yīng)答特征及控制疾病的方式不盡相同，中國(guó)男同人群中CRF01AE亞型CTL應(yīng)答特征及控制疾病的方式尚不清楚，針對(duì)我國(guó)男同人群CTL疫苗的研究仍缺乏基礎(chǔ)資料的支持，因此急需對(duì)這部分人群進(jìn)行急性期CTL應(yīng)答的研究，以明確中國(guó)男同人群中CRF01AE亞型CTL應(yīng)答特征，同時(shí)探索與疾病控制相關(guān)的因素。我們?cè)谇捌谘芯康幕A(chǔ)上設(shè)計(jì)合成了CRF01_AE亞型傳播簇特異性的GAG、POL、NEF區(qū)段的重疊肽段及部分HLA型別限制的最佳表位，對(duì)15例CRF01AE亞型HIV1急性感染者進(jìn)行動(dòng)態(tài)CTL應(yīng)答的研究，同時(shí)獲得了動(dòng)態(tài)GAG克隆序列，我們發(fā)現(xiàn)在CRF01AE亞型的MSM感染者中，針對(duì)GAG區(qū)段表位產(chǎn)生持續(xù)的免疫顯性應(yīng)答可以有效控制病毒，為基于中國(guó)CRF01AE亞型MSM患者的疫苗設(shè)計(jì)提供了理論基礎(chǔ)。材料和方法1、研究對(duì)象從2008年開(kāi)始對(duì)遼寧大規(guī)模MSM高危人群隊(duì)列進(jìn)行定期隨訪并進(jìn)行血清學(xué)ELISA篩查實(shí)驗(yàn)和WESTERNBLOT確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，對(duì)血清學(xué)陰性者進(jìn)行集合核酸檢測(cè)，滿足以下一項(xiàng)或多項(xiàng)者1）在3個(gè)月內(nèi)HIV抗體開(kāi)始變陽(yáng)性者2）HIV抗體陰性但HIVRNA陽(yáng)性者3）HIV抗體弱陽(yáng)性但在兩周之內(nèi)可以重復(fù)并OD值較前次升高者4）WB抗體檢測(cè)少于4條蛋白條帶者，認(rèn)定為新發(fā)感染者。HIV新發(fā)感染者感染時(shí)間的估計(jì)方法為患者核酸檢測(cè)陽(yáng)性前14天作為HIV感染時(shí)間，初篩陽(yáng)性患者以此次陽(yáng)性與末次陰性的中間時(shí)間作為HIV感染時(shí)間，有可靠高危性行為史的患者結(jié)合高危行為史判定。本研究共對(duì)15例新發(fā)感染者感染3個(gè)月點(diǎn)和1年點(diǎn)PBMC和血漿樣本進(jìn)行縱向研究。2、肽段合成根據(jù)前期獲得的50余條遼寧新發(fā)CRF01_AE亞型第二簇的全長(zhǎng)序列，利用BIOEDIT軟件合成共享氨基酸序列，然后用HIVDATABASE中PEPTGENPEPTIDEGENERAT軟件生成長(zhǎng)度為1718MER，10個(gè)氨基酸OVERLAP的GAG、POL、NEF的重疊肽段，合成CRF01AE亞型第二簇肽段（SIGMAALDRICH，美國(guó)）。同時(shí)合成了中國(guó)人群中較為常見(jiàn)的HLAⅠ類等位基因A02、A11、A24、B13、B40、B51限制的已發(fā)表的最佳表位，及具有明確保護(hù)性作用的B27限制的KK10表位，所有表位均按照CRF01AE亞型中序列進(jìn)行合成。3、ELISPOT肽庫(kù)篩查及單肽確認(rèn)采用1416的二維矩陣肽庫(kù)對(duì)GAG、POL、NEF區(qū)段肽段進(jìn)行篩查，肽段反應(yīng)終濃度為5ΜGML，每孔加入01MILLION細(xì)胞。陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)為大于50SFC106PBMC同時(shí)大于3倍陰性對(duì)照平均值。同時(shí)將篩查的肽庫(kù)進(jìn)行拆解，進(jìn)行單肽確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)操作同上述ELISPOT篩查實(shí)驗(yàn)。反應(yīng)結(jié)果的計(jì)算及陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)也與篩查實(shí)驗(yàn)相同。4、ELISPOT最佳表位實(shí)驗(yàn)對(duì)具有HLAⅠ類等位基因A02、A11、A24、B13、B27、B40、B51的個(gè)體，將相應(yīng)HLA型別限制的最佳表位進(jìn)行ELISPOT實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)操作同上述篩查實(shí)驗(yàn)。反應(yīng)結(jié)果的計(jì)算及陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)也與篩查實(shí)驗(yàn)相同。5、DNA提取外周血DNA的提取，使用1MLEDTA抗凝外周靜脈血，采用QIAAMPDNAMINI試劑盒，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)標(biāo)準(zhǔn)方法快速提取全基因組DNA200ΜL。將純化后的DNA置20℃保存?zhèn)溆谩?、HLA等位基因分型檢測(cè)HLA分型采用PCRSSP方法，采用ONELAMDA公司的MICROSSPTM試劑盒。7、GAG克隆1HIV1基因組RNA提取病毒基因組RNA使用QIAAMPVIRALRNAMINIKITQIAGEN，GERMAN按操作說(shuō)明從血漿標(biāo)本提取基因組RNA，80℃保存?zhèn)溆谩?NESTEDPCRGAG基因擴(kuò)增及TA克隆測(cè)序采用TAKARAONESTEPRNAPCRKITAMV擴(kuò)增GAG全長(zhǎng)。第一輪外側(cè)引物172A5ATCTCTAGCAGTGGCGCCCGAACAG3628648NTOFHIV1HXB2和GAG65TAATGCTTTTATTTTYTCTTCTGTCAATGGC326512621NTOFHIV1HXB2，第二輪內(nèi)側(cè)GAG7635TGACTAGCGGAGGCTAGAAGG3763783NTOFHIV1HXB2和GAG55TTCCYCCTATCATTTTTGGTTTCC323772400NTOFHIV1HXB2。擴(kuò)增條件第一輪50℃，30MIN94℃變性5MIN94℃30S，50℃30S，72℃2MIN3個(gè)循環(huán)94℃30S，55℃30S，72℃2MIN32個(gè)循環(huán)72℃延伸10MIN4℃保溫。第二輪94℃變性5MIN94℃30S，55℃30S，72℃2MIN30個(gè)循環(huán)72℃延伸10MIN4℃保溫。1％瓊脂糖凝膠電泳后，對(duì)比MARKER切下1600BP陽(yáng)性片段，QIAGEN膠純化試劑盒按照操作說(shuō)明純化回收目的基因片段。純化產(chǎn)物以40UL去離子水洗脫。將其連接入TOPO載體克隆后獲得每一個(gè)患者的GAG序列，并進(jìn)行測(cè)序分析。8、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS170進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用應(yīng)用MANNWHITNEYUTEST檢驗(yàn)對(duì)CD4計(jì)數(shù)、病毒載量、SETPOINT進(jìn)行分析，P＜005認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果1、15例樣本基本臨床信息本研究共納入15例新發(fā)感染者，均為MSM感染者，且均為CRF01_AE亞型第二簇。在感染1年點(diǎn)時(shí)平均CD4計(jì)數(shù)和病毒載量較3個(gè)月點(diǎn)時(shí)均有所下降，但均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P＞005。15例患者中A02、B15、B13、C03等位基因頻率較高。2、3個(gè)月點(diǎn)和1年點(diǎn)CTL應(yīng)答的特征通過(guò)分析15例患者感染3個(gè)月點(diǎn)和1年點(diǎn)不同蛋白的應(yīng)答頻率發(fā)現(xiàn)，各區(qū)段蛋白在3個(gè)月點(diǎn)的應(yīng)答頻率整體低于1年點(diǎn)時(shí)的應(yīng)答頻率，其中P17、P24、RT和NEF區(qū)在3個(gè)月點(diǎn)和1年點(diǎn)應(yīng)答頻率均較高，在3個(gè)月點(diǎn)這4個(gè)區(qū)段應(yīng)答頻率均大于40％，在1年點(diǎn)應(yīng)答頻率均大于65％，而P15、GPTF、PR和IN區(qū)應(yīng)答頻率相對(duì)較低，在3個(gè)月點(diǎn)及1年點(diǎn)應(yīng)答頻率均小于30％。通過(guò)強(qiáng)度分析發(fā)現(xiàn)，各區(qū)段蛋白在3個(gè)月點(diǎn)的平均應(yīng)答強(qiáng)度同樣整體弱于1年點(diǎn)時(shí)的平均應(yīng)答強(qiáng)度，P24、RT和NEF區(qū)在3個(gè)月點(diǎn)和1年點(diǎn)平均應(yīng)答強(qiáng)度均較強(qiáng)，在3個(gè)月點(diǎn)這3個(gè)蛋白區(qū)段平均應(yīng)答強(qiáng)度均大于600SFU106PBMC，在1年點(diǎn)平均應(yīng)答強(qiáng)度均大于1200SFU106PBMC，而P15、GPTF、PR和IN區(qū)應(yīng)答強(qiáng)度相對(duì)較弱，在3個(gè)月點(diǎn)和1年點(diǎn)平均應(yīng)答強(qiáng)度均小于200SFU106PBMC。3、不同個(gè)體呈現(xiàn)不同的免疫顯性應(yīng)答模式結(jié)合單肽確認(rèn)信息、最佳表位反應(yīng)信息、GAG克隆序列對(duì)3個(gè)月點(diǎn)和1年點(diǎn)樣本進(jìn)行縱向分析，發(fā)現(xiàn)不同患者呈現(xiàn)不同的免疫顯性應(yīng)答模式。按照不同的免疫顯性應(yīng)答模式，15例患者可以分成2個(gè)組。第一個(gè)組為在3個(gè)月點(diǎn)和1年點(diǎn)均針對(duì)同一區(qū)段表位產(chǎn)生免疫顯性應(yīng)答的患者，其中320009、320669、320016和3250204例患者均呈現(xiàn)持續(xù)的GAG區(qū)段表位的免疫顯性應(yīng)答，這4例患者SETPOINT均較低＜36COPIESML，320353和4401052例患者均呈現(xiàn)持續(xù)的POL區(qū)表位的免疫顯性應(yīng)答，這2例患者的SETPOINT分別為430COPIESML和461COPIESML，320088、320018、440020、3209754例患者均呈現(xiàn)持續(xù)的NEF區(qū)段表位的免疫顯性應(yīng)答，這4例患者SETPOINT較高＞44COPIESML，其中320018、440020、3209753例患者SETPOINT均＞5COPIESML。第二組為在3個(gè)月點(diǎn)和1年點(diǎn)針對(duì)不同區(qū)段表位呈現(xiàn)免疫顯性應(yīng)答的患者，其中320135和3211372例患者均在3個(gè)月點(diǎn)針對(duì)GAG區(qū)段表位呈現(xiàn)免疫顯性應(yīng)答，在1年點(diǎn)時(shí)GAG區(qū)段表位應(yīng)答強(qiáng)度下降，同時(shí)產(chǎn)生針對(duì)NEF區(qū)段表位免疫顯性應(yīng)答。320842和3004302例患者均在3個(gè)月點(diǎn)針對(duì)POL區(qū)表位呈現(xiàn)免疫顯性應(yīng)答，而在1年點(diǎn)時(shí)均針對(duì)GAG區(qū)段表位產(chǎn)生免疫顯性應(yīng)答。320019患者在3個(gè)月點(diǎn)針對(duì)NEF區(qū)段表位產(chǎn)生免疫顯性應(yīng)答，在1年點(diǎn)時(shí)針對(duì)NEF區(qū)段表位應(yīng)答強(qiáng)度下降，同時(shí)產(chǎn)生針對(duì)GAG區(qū)段表位免疫顯性應(yīng)答。在這5例患者中，320135患者SETPOINT為375COPIESML，其余4例患者SETPOINT在429462COPIESML之間。4、持續(xù)的GAG區(qū)段表位的免疫顯性應(yīng)答可以有效控制病毒通過(guò)對(duì)不同個(gè)體免疫顯性應(yīng)答模式及動(dòng)態(tài)變化分析發(fā)現(xiàn)，有持續(xù)GAG區(qū)段免疫顯性應(yīng)答的個(gè)體其SETPOINT要顯著低于無(wú)持續(xù)GAG區(qū)段免疫顯性應(yīng)答的個(gè)體P0001，有持續(xù)NEF區(qū)段免疫顯性應(yīng)答的個(gè)體其SETPOINT要顯著高于無(wú)持續(xù)NEF區(qū)段免疫顯性應(yīng)答的個(gè)體P0018，而有無(wú)持續(xù)POL區(qū)段免疫顯性應(yīng)答的個(gè)體其SETPOINT無(wú)顯著差異P08。5、GAG區(qū)段表位免疫顯性應(yīng)答驅(qū)動(dòng)病毒變異通過(guò)分析6例在3個(gè)月點(diǎn)針對(duì)GAG區(qū)段表位產(chǎn)生免疫顯性應(yīng)答的患者其免疫顯性表位序列縱向的變異情況發(fā)現(xiàn)，6例患者在3個(gè)月點(diǎn)均針對(duì)不同的GAG區(qū)段表位產(chǎn)生免疫顯性應(yīng)答，其中僅有320669患者針對(duì)的B27限制的KRWIILGLNKKK10GAG263272表位在1年點(diǎn)時(shí)仍呈現(xiàn)免疫顯性應(yīng)答，其余5例患者在3個(gè)月點(diǎn)時(shí)呈現(xiàn)免疫顯性應(yīng)答的表位在1年點(diǎn)時(shí)雖仍有應(yīng)答但均不是免疫顯性應(yīng)答。序列分析發(fā)現(xiàn)，僅有320669患者針對(duì)的B27限制的KRWIILGLNKKK10GAG263272表位和320135患者針對(duì)的B13限制的GQMREPRGSDIGI11GAG226236表位序列未發(fā)生變異，其余4例患者在1年點(diǎn)時(shí)免疫顯性表位序列均發(fā)生了較大程度的變異≥50％。同時(shí)320135患者針對(duì)的B13限制的GQMREPRGSDIGI11GAG226236表位序列雖未發(fā)生變異，但表位側(cè)區(qū)序列在1年點(diǎn)時(shí)發(fā)生了V210A的變異，提示GAG區(qū)段表位免疫顯性應(yīng)答會(huì)對(duì)病毒造成較強(qiáng)的免疫壓力。結(jié)論1、在CRF01_AE亞型中GAG、POL、NEF區(qū)段蛋白在3個(gè)月點(diǎn)的應(yīng)答頻率和應(yīng)答強(qiáng)度整體均低于1年點(diǎn)時(shí)的應(yīng)答頻率和應(yīng)答強(qiáng)度。P24、RT和NEF區(qū)在3個(gè)月點(diǎn)和1年點(diǎn)應(yīng)答頻率和強(qiáng)度均較高。2、CRF01_AE亞型MSM人群中持續(xù)的GAG區(qū)段表位免疫顯性應(yīng)答與低SETPOINT相關(guān)，可以較好控制病毒持續(xù)的NEF區(qū)段表位免疫顯性應(yīng)答與高SETPOINT相關(guān)，不能控制病毒復(fù)制。

簡(jiǎn)介：東南大學(xué)碩士學(xué)位論文女性性激素、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子與認(rèn)知功能的關(guān)系姓名王艷申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師任慕蘭20090602東南大學(xué)碩士學(xué)位論文無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義FFO05。⑤相關(guān)性分析62例圍絕經(jīng)期及絕經(jīng)后女性中，血清BDNF水平與血清E2水平有相關(guān)性RO303，PO017，而與血清T水平無(wú)相關(guān)性RO154，0232，與血清FSH水平無(wú)相關(guān)性嚴(yán)0138，盧0286；生育年齡對(duì)照組16例中，血清BDNF水平與血清E2水平有相關(guān)性RO527，PO036，而與血清T水平無(wú)相關(guān)性RO312P0240，與血清FSH水平無(wú)相關(guān)性嚴(yán)一0312，盧0240；絕經(jīng)后組女性中，血清BDNF與絕經(jīng)年限無(wú)明顯相關(guān)性產(chǎn)0004，尸0978。2與認(rèn)知功能正常組比較，認(rèn)知功能障礙組女性血清E2，T水平明顯下降P依次為0025，0038，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而FSH、BDNF差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義尸005。結(jié)論1①圍絕經(jīng)期女性卵巢功能下降，在圍絕經(jīng)期血清T水平的變化早于E2水平的變化，血清T水平的變化有望作為預(yù)測(cè)卵巢功能下降的早期指標(biāo)之一。②女性體內(nèi)BDNF水平與內(nèi)源性E2水平密切相關(guān)。⑨圍絕經(jīng)期及絕經(jīng)后女性體內(nèi)BDNF水平顯著下降，而B(niǎo)DNF水平與絕經(jīng)年限無(wú)關(guān)，提示對(duì)于認(rèn)知功能的保護(hù)，性激素治療的最佳時(shí)機(jī)選擇似乎應(yīng)該在絕經(jīng)過(guò)渡期或更早。2絕經(jīng)后女性認(rèn)知功能的下降可能與內(nèi)源性E2、T水平下降有關(guān)。關(guān)鍵詞性激素；腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子；認(rèn)知功能；絕經(jīng)；圍絕經(jīng)期Ⅱ

簡(jiǎn)介：乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUS，HBV感染可引起慢性肝炎、肝硬化、甚至肝癌嚴(yán)重危害人類健康，是醫(yī)學(xué)界多年來(lái)致力攻關(guān)的一個(gè)難題。Α干擾素INTERFERONALPHA，IFNΑ是目前少數(shù)臨床治療乙型肝炎有效的藥物之一，但對(duì)其抗病毒機(jī)制尚未完全明了。本室前期研究結(jié)果表明，IFNΑ誘生的髓樣細(xì)胞分化蛋白MYD88可發(fā)揮抗HBV復(fù)制的作用，可導(dǎo)致細(xì)胞總成分和胞漿中的HBVRNA水平顯著下調(diào)，提示在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控HBV的復(fù)制。目前已知，MYD88蛋白是TOLL樣受體、白介素1受體、白介素18受體介導(dǎo)的信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子，可通過(guò)信號(hào)級(jí)聯(lián)最終引起核因子KAPPABNUCLEARFACTKAPPAB，NFΚB依賴性信號(hào)通路的活化。已有研究表明，部分細(xì)胞因子以及干擾素誘生的抗病毒蛋白可在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控HBV的基因復(fù)制和表達(dá)，機(jī)理涉及對(duì)HBVRNA核外運(yùn)輸以及穩(wěn)定性調(diào)節(jié)等環(huán)節(jié)，但尚不清楚IFNΑ誘生的MYD88蛋白是否以同類機(jī)制在轉(zhuǎn)錄后水平抑制HBV的基因復(fù)制。本課題擬從細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以及轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控兩方面探討MYD88蛋白抑制HBV復(fù)制的分子機(jī)制。為探討MYD88蛋白介導(dǎo)的NFΚB信號(hào)系統(tǒng)活化在抗HBV效應(yīng)中的作用，首先構(gòu)建了MYD88的截短突變體，然后與HBV復(fù)制型質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HUH7細(xì)胞，研究它們對(duì)HBV復(fù)制的影響。結(jié)果證實(shí)，MYD88全長(zhǎng)蛋白、及其兩個(gè)截短突變體M1151、M151296活化NFΚB的程度不同，并與抑制HBV蛋白以及復(fù)制中間體DNA合成的水平相一致，提示MYD88蛋白抑制HBV復(fù)制的效應(yīng)與MYD88激活NFΚB信號(hào)通路相關(guān)。進(jìn)一步以NFΚB的超抑制劑SUPERREPRESSIKBASR抑制NFΚB信號(hào)通路，研究NFΚB信號(hào)通路在MYD88拮抗HBV效應(yīng)中的作用。結(jié)果顯示，與空載相比，單獨(dú)轉(zhuǎn)染MYD88和HBV的細(xì)胞中HBVCE蛋白的合成顯著降低；而當(dāng)加入IΚBΑSR共同瞬轉(zhuǎn)后細(xì)胞中CE蛋白的表達(dá)量顯著增加。檢測(cè)HBEAG和HBSAG以及HBV復(fù)制中間體DNA，得到相似結(jié)果，上述結(jié)果提示MYD88蛋白抑制HBV復(fù)制的效應(yīng)依賴于NFΚB信號(hào)通路的活化。進(jìn)一步將HBV的復(fù)制型質(zhì)粒與NFΚB信號(hào)通路激活劑IKKΑIKKΒ表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HUH7細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)IKKΑIKKΒ在細(xì)胞內(nèi)過(guò)表達(dá)后可顯著降低細(xì)胞培養(yǎng)上清中HBEAG和HBSAG和復(fù)制中間體DNA的合成，并呈劑量依賴關(guān)系。同時(shí)將HBV復(fù)制型質(zhì)粒和IKKΑIKKΒ、MYD88、IΚBΑSR分別或共同轉(zhuǎn)染后檢測(cè)HBVRNA的水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染IKKΑIKKΒ或MYD88均可抑制HBV在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄；而IΚBΑSR轉(zhuǎn)染細(xì)胞中HBVRNA轉(zhuǎn)錄體水平則上調(diào)。以上結(jié)果提示，NFΚB信號(hào)通路的活化在MYD88蛋白抑制HBV復(fù)制中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。此外，為排除P38MAPK或ERK12活化在MYD88蛋白抑制HBV復(fù)制中的作用，在MYD88與HBV復(fù)制型質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HUH7細(xì)胞時(shí)加入SB20538或PD98059以抑制P38MAPK或ERK12的活化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MYD88蛋白抑制HBV的效應(yīng)在抑制劑處理組與非處理組間無(wú)顯著差異，提示MYD88蛋白調(diào)控HBV復(fù)制不依賴P38和ERK12信號(hào)通路的活化。為進(jìn)一步探討MYD88蛋白在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控HBV復(fù)制的機(jī)理。首先采用HBV啟動(dòng)子控制下的報(bào)告基因，檢測(cè)MYD88蛋白對(duì)HBV啟動(dòng)子的活性的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MYD88蛋白對(duì)HBV啟動(dòng)子活性無(wú)顯著影響，排除了MYD88蛋白通過(guò)調(diào)節(jié)乙肝病毒啟動(dòng)子活性抑制HBV轉(zhuǎn)錄激活的可能性。進(jìn)一步在HUH7細(xì)胞中瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HBV復(fù)制型質(zhì)粒和MYD88表達(dá)質(zhì)粒，分離細(xì)胞核與細(xì)胞漿中的HBVRNA，用RNASLOT和REALTIMEPCR分析HBVRNA在兩者中的分布。結(jié)果顯示，表達(dá)MYD88蛋白可同時(shí)下調(diào)細(xì)胞核與細(xì)胞漿中HBVMRNA的水平，但HBVRNA的核漿比值增加了了2～3倍，提示MYD88蛋白有可能通過(guò)改變HBVRNA的核、漿分布比例從而影響HBV的基因復(fù)制。進(jìn)一步利用轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)元件PREPOSTTRANIONALREGULATEELEMENT調(diào)控下的氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶CAT報(bào)道系統(tǒng)分析MYD88蛋白將HBVRNA滯留于細(xì)胞核內(nèi)的可能機(jī)理。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MYD88穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株中報(bào)道基因CAT的表達(dá)水平顯著降低；在HUH7細(xì)胞中采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方式也證明MYD88蛋白可特異性地抑制報(bào)道基因的表達(dá)，提示MYD88蛋白影響PRE序列介導(dǎo)的HBVMRNA的核外運(yùn)輸過(guò)程。另外，進(jìn)一步對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染MYD88后HBVRNA的半衰期檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，MYD88蛋白可降低HBVRNA的穩(wěn)定性。以上研究結(jié)果提示，MYD88蛋白可能通過(guò)影響PRE序列介導(dǎo)的HBVMRNA的核外運(yùn)輸過(guò)程、降低HBVRNA的穩(wěn)定性來(lái)調(diào)控HBV的復(fù)制。綜上所述，在本室前期研究發(fā)現(xiàn)IFNΑ誘生的髓樣細(xì)胞分化蛋白MYD88可發(fā)揮抗HBV復(fù)制作用的基礎(chǔ)上，本研究進(jìn)一步證實(shí)NFΚB信號(hào)通路的活化在MYD88蛋白抑制HBV復(fù)制中發(fā)揮了關(guān)鍵作用，而MYD88蛋白可能通過(guò)影響PRE序列介導(dǎo)的HBVMRNA的核外運(yùn)輸過(guò)程、降低HBVRNA的穩(wěn)定性來(lái)調(diào)控HBV的復(fù)制。以上發(fā)現(xiàn)豐富了對(duì)干擾素誘生的MYD88蛋白抑制HBV復(fù)制機(jī)理的認(rèn)識(shí)。從多角度深入探討MYD88蛋白調(diào)控HBV復(fù)制的分子機(jī)制，可有利于加深對(duì)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制以及細(xì)胞基因功能等的認(rèn)識(shí)，揭示病毒和宿主細(xì)胞相互作用的分子機(jī)理，并可為臨床治療及研制新型抗HBV藥物提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼10023學(xué)號(hào)2012007005小鼠羊膜干細(xì)胞改善APPSWE／PSIAE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠認(rèn)知功能的研究所院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所姓名曲春輝指導(dǎo)教師秦川導(dǎo)師小組秦川張連峰魏強(qiáng)學(xué)科專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)研究方向神經(jīng)退行性疾病機(jī)制的研究完成日期二零一五年四月中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文14主要抗體3315主要試劑配制方法342實(shí)驗(yàn)方法3721轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的鑒定3722ADSCS移植3923行為學(xué)檢測(cè)4024小鼠腦組織取材4125腦組織海馬蛋白提取、濃度鑒定4126免疫組織化學(xué)及硫黃素S熒光染色4227ELISA檢測(cè)AB含量4428WESTERNBLOTTING實(shí)驗(yàn)步驟4429統(tǒng)計(jì)方法46結(jié)果471APPSWE／PSL△E9小鼠基因型的鑒定472BDNF在6月齡AD模型小鼠和WT小鼠海馬內(nèi)分泌情況473ADSCS移植并在腦內(nèi)存活484，行為學(xué)檢測(cè)小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力和自主活動(dòng)及焦慮狀態(tài)情況495檢測(cè)腦組織海馬內(nèi)膠質(zhì)細(xì)胞激活情況5L6腦組織海馬內(nèi)BDNF、SYNAPTOPHYSIN蛋白水平變化537腦組織內(nèi)APP、A42、A阻0及PTAUTHR231蛋白水平變化548ADSCS移植后小鼠腦內(nèi)APPSWE伊SL△E9小鼠腦內(nèi)老年斑沉積情況559ADSCS移植后對(duì)小鼠腦形態(tài)和結(jié)構(gòu)的影響5510ADSCS移植后對(duì)小鼠腦內(nèi)神經(jīng)元的影響56討J滄58小結(jié)63全文總結(jié)64參考文獻(xiàn)65縮略詞語(yǔ)72個(gè)人簡(jiǎn)介及發(fā)表文章一742

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多認(rèn)知性情緒調(diào)節(jié)問(wèn)卷中文版（CERQ-C）的信效度研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：第一部分PLB基因反義RNA腺相關(guān)病毒載體的構(gòu)建及其對(duì)培養(yǎng)的大鼠心肌細(xì)胞的作用結(jié)論1利用AAVHELPERFREESYSTEM成功構(gòu)建重組腺相關(guān)病毒RAAVASPLB和RAAVLACZ2重組腺相關(guān)病毒不影響細(xì)胞活力能安全有效地感染培養(yǎng)的心肌細(xì)胞3RAAVASPLB對(duì)培養(yǎng)的大鼠心肌細(xì)胞PLBMRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)具有抑制作用增強(qiáng)肌漿網(wǎng)CAATPASE活性降低靜息狀態(tài)的CAI增加異丙腎上腺素刺激后CAI的變化幅度第二部分RAAVASPLB改善糖尿病大鼠心肌肌漿網(wǎng)CAATPASE活性和左心功能結(jié)論1、腹腔注射STZ能夠誘導(dǎo)出糖尿病大鼠模型糖尿病組和鹽水組的糖尿病大鼠較正常大鼠心功能降低PLBMRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平升高肌漿網(wǎng)CAATPASE活性降低2、心肌注射RAAVASPLB后治療組大鼠的心功能雖然在靜息時(shí)未能恢復(fù)正常但是較糖尿病組和鹽水組明顯升高并且對(duì)異丙腎上腺素的刺激反應(yīng)提高心臟儲(chǔ)務(wù)增加心功能得到改善3、心肌注射RAAVASPLB后隨著心功能的改善治療組大鼠心肌的PLBMRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平降低肌漿網(wǎng)CAATPASE活性提高4、RAAVASPLB用作糖尿病心肌病所致心力衰竭基因治療有一定的效果但是仍需要進(jìn)一步研究