簡介：點擊查看更多丁苯酞對STZ糖尿病大鼠認知功能障礙及海馬NMDA受體亞基NR2B的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：本文應(yīng)用RNAI技術(shù)抑制乙型肝炎病毒復(fù)制的實驗研究乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUS，HBV是引起病毒性肝炎的主要病原體之一。由HBV所引起的乙型肝炎是一種流行久遠、傳播廣泛、危害嚴重的傳染性疾病。目前全球慢性HBV感染者超過3億5千萬人。慢性HBV感染導(dǎo)致的肝炎肝硬化和肝癌等終末期肝病，已成為嚴重危害我國人民生命健康的主要疾病。乙肝疫苗的推廣使用使乙肝免疫預(yù)防取得重大突破，但治療上仍缺乏理想的抗病毒藥物。目前在我國廣泛應(yīng)用的抗HBV藥物主要有兩類，Α干擾素和核苷類藥物。但療效均不理想，仍需探索新型有效的抗HBV的藥物和方法。本實驗針對HBVS區(qū)、設(shè)計合成了SIRNA克隆入含H1啟動子的轉(zhuǎn)錄載體PSILENCER31H1HYGRO，在HEPG2215細胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生HBV特異性SIRNA，進一步觀察了SIRNA在蛋白和核酸水平上對HBV表達和復(fù)制的抑制作用，為應(yīng)用SIRNA控制HBV感染提供實驗依據(jù)。

簡介：目的應(yīng)用BACTOBAC桿狀病毒表達體系在SF9昆蟲細胞中表達重組CDNF蛋白。方法應(yīng)用TRIZOL法提取小鼠組織總RNARTPCR擴增得到小鼠CDNF基因全長564BP片段將CDNF基因插入至轉(zhuǎn)座載體PFASTBACHTB中構(gòu)建重組質(zhì)粒PFASTBACHTBCDNF然后轉(zhuǎn)化到ECOLIDH5Α感受態(tài)細胞中以LBAMP平板篩選陽性重組子并經(jīng)PCR、酶切及測序驗證以保證重組載體的正確及可靠性將桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體PFASBACHTBCDNF轉(zhuǎn)化到DH10BACECOLI自帶桿粒及輔助質(zhì)粒感受態(tài)細胞中通過轉(zhuǎn)座作用將目的片段整合到桿粒中抗性及藍白斑篩選法篩選出重組桿狀病毒載體BACCDNF使用CDNF特異引物及PUCM13桿粒測序引物對重組桿粒進行驗證參照CELLFECTINⅡ脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染劑操作說明將重組BACCDNF桿粒轉(zhuǎn)染SF9昆蟲細胞并在光學(xué)顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學(xué)變化以判斷轉(zhuǎn)染的成功性轉(zhuǎn)染成功后收集P1代病毒液繼續(xù)感染SF9細胞可獲取P2代和P3代病毒液應(yīng)用P3代病毒誘導(dǎo)重組CDNF蛋白的表達并應(yīng)用WESTERNBLOT對重組蛋白的表達進行驗證。結(jié)果1RTPCR結(jié)果經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳顯示成功獲取564BP大小的CDNF目的基因片段重組質(zhì)粒PFASTBACHTBCDNF經(jīng)PCR、酶切及基因測序驗證均正確無誤2重組轉(zhuǎn)移載體PFASTBACHTBCDNF轉(zhuǎn)化DH10BAC感受態(tài)細胞后陽性BACCDNF重組子經(jīng)CDNF特異引物及PUCM13桿粒測序引物PCR驗證可分別獲取561BP及3000BP大小目的片段均與理論大小相符表明桿粒構(gòu)建成功3重組桿粒通過CELLFECTIN轉(zhuǎn)染劑轉(zhuǎn)染SF9昆蟲細胞轉(zhuǎn)染4872后SF9細胞細胞直徑逐漸增大細胞漸脫離貼壁培養(yǎng)狀態(tài)隨之細胞漸漸腫脹種種跡象均表明桿粒轉(zhuǎn)染成功收獲桿狀病毒液4P3代桿狀病毒液感染SF9細胞誘導(dǎo)重組CDNF蛋白表達經(jīng)WESTERNBLOT驗證目的蛋白成功誘導(dǎo)表達并符合預(yù)計大小21KD。結(jié)論通過BACTOBAC桿狀病毒表達系統(tǒng)成功誘導(dǎo)CDNF重組蛋白的表達。

簡介：鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文17Β雌二醇對血管性癡呆大鼠認知功能及其腦內(nèi)NGF、BDNF、GDNF表達的影響姓名姜曉蕊申請學(xué)位級別碩士專業(yè)腦血管疾病和腦保護指導(dǎo)教師盧宏20050508鄭州大學(xué)碩士畢業(yè)論文17FLALL醇對血管性癡呆大鼠認知功能廈其腦內(nèi)NGF、BDNF、ODNF表達的影響48只健康老齡雄性WJSTAR大鼠月齡1213月；體重550650克被隨機分為三組。A組為正常對照組16只，B組為模型組16只，C組為雌二醇用藥組16只。采用2VO法建立大鼠VD模型，C組大鼠手術(shù)后當天開始腹腔注射17B一雌二醇LMG／KG，A組和B組大鼠術(shù)后給予等量的花生油溶解雌二醇的溶劑腹腔注射，均為每周2次。60D后，采用“Y”迷宮對各組大鼠進行學(xué)習(xí)和記憶功能的測定，然后每組再隨機分成2小組，其中一組大鼠麻醉后灌注取腦，取視交叉到小腦前的冠狀切面，置4％多聚甲醛中固定24H，流水沖洗24H，石蠟包埋，切片厚46№，分別進行蘇木素一伊紅HE和免疫組化染色。另一組大鼠麻醉后快速處死動物后，取左側(cè)大腦半球，勻漿，離心后取上清，采用NGF，BDNF的ELISA試劑盒，按ELISA法測定大鼠腦內(nèi)的NGF，BDNF的含量。結(jié)果1大鼠學(xué)習(xí)嘗試次數(shù)，記憶測試10次的正確次數(shù)在造模60D后與正常對照組對比差異有顯著性意義P005正常對照組嘗試次數(shù)為441252167，10次正確次數(shù)為83751061模型組上述測試結(jié)果分別為79，8702695，51251126；腹腔注射17B雌二醇組60D后大鼠認知功能顯著改善嘗試次數(shù)為557502605，10次正確次數(shù)為75001069與模型組相比，差異有顯著性意義P005。2顯微鏡下觀察，正常對照組未見明顯的病理變化；模型組皮質(zhì)下及海馬區(qū)有結(jié)構(gòu)較松散的軟化灶，部分神經(jīng)元呈缺血性形態(tài)改變，胞體縮小，胞核固縮，胞漿致密，海馬CAL區(qū)細胞數(shù)減少，胞間距離增大；雌二醇組皮質(zhì)偶見小的軟化灶，細胞數(shù)和形態(tài)接近正常對照組。3造模60天后，模型組大鼠海馬內(nèi)源性NGF，BDNF，GNDF免疫陽性細胞數(shù)較正常對照組增高，P005正常對照組大鼠海馬內(nèi)源性NGF，BDNF，GNDF免疫陽性細胞數(shù)分別為4512542417；642503772；32504928模型組上述結(jié)果分別為602505285；803752659；581224343，雌二醇組比模型組的增高更顯著P005。雌二醇組上述結(jié)果分別為832574340；908104713；77134505514ELISA法測試結(jié)果是正常對照組大鼠腦內(nèi)的NGF，BDNF含量分別為N

簡介：中文摘要流行性感冒簡稱流感是由流感病毒引起的嚴重危害人類健康的一種急性病毒性呼吸道傳染病歷史上流感有過幾次大規(guī)模流行曾給人類帶來深重的災(zāi)難流感帶來的損失不容忽視根據(jù)美國科學(xué)技術(shù)委員會的報告近年來科技發(fā)達的美國每年死于流感的人數(shù)為2萬4萬流感成為致死率較高的病毒性傳染病每年用于預(yù)防流感的費用和流感引起的勞動力損失超過12億美元可見流感至今仍是嚴重危害人類生命和健康的一種傳染病該文首先從流感的流行病學(xué)研究現(xiàn)狀、流感的發(fā)病機理研究進展、西醫(yī)治療流感的研究進展、中醫(yī)對流感的認識及發(fā)展以及中藥抗流感病毒的實驗研究現(xiàn)狀幾方面作了文獻回顧在理論探討部分首先闡明了導(dǎo)師周平安教授對北方地區(qū)流行性感冒的病因病機特點認識的新思路流行性感冒屬中醫(yī)的時行感冒范疇總屬外感熱病中醫(yī)學(xué)在長期發(fā)展過程中對外感熱病的診療積累了豐富的經(jīng)驗有自己的特色和優(yōu)勢中醫(yī)對疾病的認識側(cè)重于宏觀歷來重視天人合一、外因與內(nèi)因的統(tǒng)一強調(diào)因時、因地、因人制宜由于季節(jié)、地理、生活環(huán)境的特點形成了北方地區(qū)流行性感冒獨特的病因病機特征周教授運用中醫(yī)理論結(jié)合多年的經(jīng)驗提出外感寒邪內(nèi)蘊熱毒為其主要病因表寒里熱熱毒郁閉是其基本病機的論點其次闡明了周教授治療北方地區(qū)流感的治法及方藥探討了感冒雙解合劑的組方特點結(jié)合北方地區(qū)流感表寒里熱的證候特點周教授提出了散寒清熱益氣透毒的治療法則并研制了感冒雙解合劑治療北方地區(qū)的流感整方配伍嚴謹用藥得當麻黃等散寒解表之品為邪氣外出開啟透邪之門柴胡、黃芩疏利氣機為邪氣外出疏通透邪之路黃芪益氣托毒以助透邪外出生石膏、銀花清熱解毒使邪氣無暫安之所且諸藥均具辛散之性使邪氣從上焦而出全方體現(xiàn)了以透為主的治療法則也體現(xiàn)了中醫(yī)辨證論治的思想在實驗研究部分針對流感病毒所致的免疫病理狀態(tài)以免疫損傷及抗免疫損傷為切入點觀察了感冒雙解合劑對流感病毒FM1感染小鼠的免疫損傷的影響結(jié)合肺中細胞因子的表達情況肺中細胞因子表達較血清中更顯著似乎提示流感病毒作用小鼠后肺部免疫功能反應(yīng)更強烈盡管血清中細胞因子表達不如肺中顯著但總的趨勢基本一致說明感冒雙解合劑不僅能調(diào)節(jié)肺中炎性細胞因子的失調(diào)而且能調(diào)節(jié)血清中炎性細胞因子的失調(diào)其對病毒感染小鼠的保護作用與其抑制循環(huán)血中及局部組織TNFA、IL6、IFNΓ的升高和提高IL10的表達有著密切關(guān)系從而說明感冒雙解合劑可以調(diào)節(jié)機體的免疫功能對抗病毒感染后機體的炎性損傷綜上所述感冒雙解合劑通過提高NK細胞殺傷功能、巨噬細胞吞噬功能和淋巴細胞增殖來提高流感病毒感染小鼠的免疫功能通過抑制促炎性細胞因子的分泌提高抗炎性細胞因子的分泌來控制炎癥反應(yīng)進而對抗流感病毒造成的免疫損傷

簡介：目的探索冬春季節(jié)蘭州地區(qū)成人急性呼吸道感染患者病毒病原學(xué)。包括流感病毒AFLUA、流感病毒BFLUB、呼吸道合胞病毒RSV、腺病毒ADV、副流感病毒PIV。方法研究對象患急性呼吸道感染者。收集患者痰標本78例，采用單克隆抗體橋聯(lián)酶標法MCABAPAAP檢測病毒抗原，同期健康成人15例做對照研究；收集患者血清標本467例，通過間接酶聯(lián)免疫吸附實驗ELISA檢測血清中病毒特異性IGM抗體，同期健康成人79例做對照研究。結(jié)論①病毒是急性呼吸道感染的重要病原體。其中流感病毒FLUA、FLUB是蘭州地區(qū)成人冬春季節(jié)急性呼吸道感染最重要的病毒病原體，其次為呼吸道合胞病毒RSV。腺病毒ADV和副流感病毒PIV少見。②存在兩種或兩種以上呼吸道病毒感染的現(xiàn)象，也存在同時或繼發(fā)細菌感染的病例。③有基礎(chǔ)疾病者感染呼吸道病毒風(fēng)險增加。

簡介：慢性乙型肝炎是全球主要的公共安全問題之一，我國慢性感染者占人群的10％左右。由于疾病的慢性化進程，大部分患者在相當長時間內(nèi)，肝臟的炎癥反應(yīng)并不顯著，臨床也無特殊的表現(xiàn)，工作生活與常人無異。在患其他疾病的情況下，也有使用藥物進行治療的需要。由于大部分藥物都要經(jīng)過肝臟進行代謝，此時該特定人群的用藥安全問題受到臨床醫(yī)生的關(guān)注。肝細胞微粒體中的細胞色素酶P450CYTOCHROMEP450，CYP是最重要的藥物代謝酶。既往研究表明乙型肝炎病毒HBV對CYP的表達有影響，但未能明確說明HBV與CYP各主要亞家族酶活力的關(guān)系。本課題研究HBV慢性感染時，肝臟藥物代謝酶CYP主要亞家族酶的質(zhì)功能與量表達是否發(fā)生變化和發(fā)生怎樣的變化。CYP亞家族中的3A4占肝臟中CYP總含量的50％左右，參與50％以上的藥物的催化代謝。故我們選取CYP3A4作為研究目標，檢測慢性HBV感染肝臟和正常肝臟中該酶的代謝能力，并檢測該酶在蛋白水平的變化。同時在細胞水平和分子水平對臨床研究結(jié)果進行機制探討。

簡介：點擊查看更多型肝炎病毒（HBV）x基因瞬時表達對人肝癌細胞HepG2的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：第一部分顱腦創(chuàng)傷后炎性反應(yīng)對大鼠認知功能的影響及其機制的初步研究目的顱腦創(chuàng)傷在各部位的創(chuàng)傷造成的死殘中居第1位。在我國顱腦創(chuàng)傷每年大概發(fā)生超過100萬人次其中死亡和嚴重殘疾患者超過10萬人其中長期昏迷和植物生存就超過1萬人造成的直接及間接經(jīng)濟損失達數(shù)百億元。顱腦創(chuàng)傷后的認知障礙被認為是最嚴重、持續(xù)時間最長的癥狀之一經(jīng)常體現(xiàn)為注意力及記憶力的改變?nèi)欢鴮τ陲B腦創(chuàng)傷后認知障礙的確切機制仍不清楚。顱腦創(chuàng)傷后的炎性反應(yīng)在繼發(fā)性腦損傷中起重要的作用。本實驗的目的在于觀察顱腦創(chuàng)傷后大鼠認知功能的改變并初步探討炎性反應(yīng)在對認知功能產(chǎn)生影響中的可能機制。方法采用皮層可控性打擊CONTROLLEDCTICALIMPACTCCI裝置建立大鼠中度顱腦損傷模型隨機將實驗動物分為假手術(shù)組和損傷組利用18分的CHEN評分法評價打擊后的大鼠神經(jīng)功能缺損程度NEUROLOGICALDEFICITSCENSS利用磁共振成像MRI監(jiān)測打擊側(cè)腦組織的損傷體積MRIS水迷宮用于測定實驗大鼠的認知功能利用酶聯(lián)免疫吸附劑測定法測定腫瘤壞死因子ΑTUMNECROSISFACTΑTNFΑ和白介素6INTERLEUKIN6IL6采用同樣的方法對腦源性神經(jīng)生長因子BRAINDERIVEDNEUROPHICFACTBDNF進行測定并采用方差分析方法進行統(tǒng)計學(xué)分析P結(jié)果成功建立大鼠的中度皮層可控性打擊損傷模型NSS顯示顱腦創(chuàng)傷后大鼠的神經(jīng)功能和假手術(shù)組相比較缺損明顯MRI的T2加權(quán)像顯示打擊側(cè)的腦組織損傷明顯MRIS水迷宮顯示顱腦創(chuàng)傷后大鼠的認知功能和假手術(shù)組相比較下降明顯具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義P結(jié)論本實驗初步證實炎性反應(yīng)參與顱腦創(chuàng)傷后大鼠認知功能改變的發(fā)生過程同時與認知功能密切相關(guān)的BDNF可能參與其中。第二部分柴胡皂苷A對顱腦創(chuàng)傷后大鼠認知功能的保護作用目的顱腦創(chuàng)傷在各部位的創(chuàng)傷造成的死殘中居第1位。在我國顱腦創(chuàng)傷每年大概發(fā)生超過100萬人次其中死亡和嚴重殘疾患者超過10萬人其中長期昏迷和植物生存就超過1萬人造成的直接及間接經(jīng)濟損失達數(shù)百億元。顱腦創(chuàng)傷后的認知障礙被認為是最嚴重、持續(xù)時間最長的癥狀之一經(jīng)常體現(xiàn)為注意力及記憶力的改變?nèi)欢鴮τ陲B腦創(chuàng)傷后認知障礙的確切機制仍不清楚。顱腦創(chuàng)傷后的炎性反應(yīng)在繼發(fā)性腦損傷中起重要的作用。顱腦創(chuàng)傷后的炎性反應(yīng)參與了與認知相關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)的調(diào)節(jié)。炎性反應(yīng)被認為是顱腦創(chuàng)傷后認知障礙中的重要機制。近年來人們發(fā)現(xiàn)柴胡皂苷ASAIKOSAPONINASSA具有極強的抗炎作用。本實驗的目的在于觀察柴胡皂苷A對顱腦創(chuàng)傷后大鼠認知功能的保護作用。方法采用皮層可控性打擊CONTROLLEDCTICALIMPACTCCI裝置建立大鼠中度顱腦損傷模型隨機將實驗動物分為假手術(shù)組損傷生理鹽水組和損傷柴胡皂苷A組利用18分的CHEN評分法評價打擊后的大鼠神經(jīng)功能缺損程度NEUROLOGICALDEFICITSCENSS利用磁共振成像MRI監(jiān)測打擊側(cè)腦組織的損傷體積MRIS水迷宮用于測定實驗大鼠的認知功能利用酶聯(lián)免疫吸附劑測定法測定腫瘤壞死因子ΑTUMNECROSISFACTΑTNFΑ和白介素6INTERLEUKIN6IL6采用同樣的方法對腦源性神經(jīng)生長因子BRAINDERIVEDNEUROPHICFACTBDNF和環(huán)磷酸腺苷CYCLICAMPCAMP進行測定采用WESTERNBLOT方法分別測定打擊側(cè)海馬組織中與認知相關(guān)蛋白的水平包括磷酸化的環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白PHOSPHYLATIONCAMPRESPONSEELEMENTBINDINGPROTEINPCREB環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白CAMPRESPONSEELEMENTBINDINGPROTEINCREB并采用方差分析方法進行統(tǒng)計學(xué)分析P結(jié)果成功建立大鼠的中度皮層可控性打擊損傷模型NSS顯示顱腦創(chuàng)傷后大鼠的神經(jīng)功能和假手術(shù)組相比較缺損明顯MRI的T2加權(quán)像顯示打擊側(cè)的腦組織損傷明顯MRIS水迷宮顯示顱腦創(chuàng)傷后大鼠的認知功能和假手術(shù)組相比較下降明顯具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義P結(jié)論腹腔內(nèi)注射柴胡皂苷A能夠通過抑制炎性反應(yīng)提升機體抗炎能力改善顱腦創(chuàng)傷后大鼠的神經(jīng)功能和認知功能同時可提高與認知相關(guān)的蛋白水平。柴胡皂苷A可以改善顱腦創(chuàng)傷后的認知功能障礙。柴胡皂苷A是一種安全可靠的中藥成分將來可能在顱腦創(chuàng)傷的臨床工作中得到應(yīng)用。

簡介：全世界大約有3億5千萬乙型肝炎病毒攜帶者這種感染者集中分布于東南亞、東亞及非洲的撒哈拉地區(qū)HBV的持續(xù)存在?？蓪?dǎo)致肝硬化以及肝癌而且對于已感染者免疫療法通常無效乙型肝炎病毒是一小的DNA病毒其復(fù)制過程需要經(jīng)過RNA的生物合成階段HBVC基因表達的C蛋白HBEAGHBCAG參與病毒核衣殼的裝配是免疫攻擊的靶抗原因此剪切C區(qū)基因MRNA既可抑制HBV的復(fù)制又可阻斷HBCAG的表達由于錘頭型核酶具有分子小可序列特異性地切割靶RNA的特點所以可用它切割HBVC基因的RNA阻斷HBV基因的復(fù)制和表達該文研究用多位點核酶觀察其對細胞內(nèi)及荷瘤裸鼠中HBV的MRNA的切割作用

簡介：目的研究聯(lián)合免疫后乙肝病毒母嬰傳播的相關(guān)因素。方法對100例乙肝病毒攜帶孕婦在妊娠28、32、36周注射乙肝免疫球蛋白HBIG，分娩后檢查臍血、初乳乙肝二對半及初乳乙肝病毒脫氧核糖核酸HBVDNA。嬰兒出生后24小時內(nèi)及第4周注射HBIG，并按0、1、6的程序全程接種乙肝疫苗，出生2個月取靜脈血測乙肝二對半，未獲得保護性抗體HBSAB者出生后8個月復(fù)查乙肝二對半。結(jié)果100例嬰兒中僅1例HBSAG陽性，免疫成功率9900％99100。92例獲得保護性抗體HBSAB，保護率9200％92100。孕婦血清前S1抗原PRES1陽性與陰性者相比較前者乳汁HBSAG、HBEAG、HBVDNA陽性率明顯升高分別P＜001，P＜0001，P＜0001，嬰兒保護率明顯降低7879％9851％，P＜005。血清HBEAG陽性與陰性者相比較前者乳汁HBSAG、HBEAG、HBVDNA陽性率、臍血HBEAG陽性率明顯升高均為P＜0001，嬰兒保護率明顯降低7727％9615％，P＜005。陰道分娩與剖宮產(chǎn)、母乳喂養(yǎng)與人工喂養(yǎng)組嬰兒免疫成功率、保護率差異無顯著性P＞005。結(jié)論聯(lián)合免疫有助于減少母嬰垂直傳播，提高嬰兒的免疫成功率。血清PRES1、HBEAG陽性孕婦的嬰兒保護率低。聯(lián)合免疫后陰道分娩、母乳喂養(yǎng)不增加嬰兒感染乙肝病毒的危險性。

簡介：學(xué)校代碼10530學(xué)號T20100602分類號H059密級碩士學(xué)位論文只爭朝夕的認知文體分析只爭朝夕的認知文體分析學(xué)位申請人丁剛指導(dǎo)教師文衛(wèi)平教授學(xué)院名稱外國語學(xué)院學(xué)科專業(yè)英語語言文學(xué)研究方向認知語言學(xué)二零一零年六月三日湘潭大學(xué)湘潭大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨立進行研究所取得的研究成果。除了文中特別加以標注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的成果作品。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。作者簽名日期年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)湘潭大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。涉密論文按學(xué)校規(guī)定處理。作者簽名日期年月日導(dǎo)師簽名日期年月日

簡介：據(jù)世界衛(wèi)生組織調(diào)查，大約有15的人腺病毒感染是由7型腺病毒ADENOVIRUSTYPE7，AD7引起的，7型腺病毒屬于BI亞屬腺病毒。它感染力和致病性較其它型腺病毒嚴重，可引起致死性肺炎。青年人腺病毒肺炎的病死率為8％～10％，多由腺病毒7型引起。目前對AD7研究的甚少，病毒感染致病機理尚未清楚。AD7所導(dǎo)致的致死性肺炎與肺泡Ⅱ型上皮細胞A549細胞的免疫炎性反應(yīng)可能有某種聯(lián)系。為此，了解AD7對肺泡Ⅱ型上皮細胞免疫分子基因轉(zhuǎn)錄的影響，這對了解AD7感染致病機制的研究有一定的幫助?；蛐酒夹g(shù)是一種具有高通量、高效率、低消耗的分子生物學(xué)技術(shù)，它能夠在同一時間內(nèi)，通過少量標本，實現(xiàn)生物基因信息的大規(guī)模檢測，通過比較正常和疾病狀態(tài)下的基因轉(zhuǎn)錄及其表達的差異，尋找和發(fā)現(xiàn)與該疾病相關(guān)的候選基因，有可能揭示疾病發(fā)生過程中的多個作用環(huán)節(jié)，同時也能為疾病的診斷和治療提供分子生物學(xué)方面的證據(jù)。為此，本論文以AD7感染A549細胞24H后，先用基因芯片篩選出病毒感染宿主細胞后與對照組比較差異表達的基因，再從差異表達顯著的基因中選出部分基因，用RTPCR技術(shù)對基因芯片結(jié)果進行驗證。最后發(fā)現(xiàn)CXCL1在病毒感染12H、24H后基因轉(zhuǎn)錄下調(diào)，之后對該基因轉(zhuǎn)錄的下調(diào)進行作用機制的研究，從而為AD7感染致病機制提供新的思路和線索。目的通過基因芯片技術(shù)和RTPCR技術(shù)，篩選出AD7感染A549細胞后基因轉(zhuǎn)錄差異表達的基因，之后對篩選出來的差異轉(zhuǎn)錄基因CXCL1轉(zhuǎn)錄的下調(diào)進行機制研究，為研究AD7感染致病的分子機制提供新的思路和線索。方法1、基因芯片初篩通過SUPERARRAY基因芯片技術(shù)，使用含260個基因的人抗原呈遞細胞基因芯片初步篩選AD7感染A549細胞24H后與正常A549細胞相比差異表達的基因。方法應(yīng)用TRIZOL法分別提取正常（A組）、病毒感染（B組）總RNA紫外吸收測定法進行RNA質(zhì)量檢測RUELABELINGAMPTM線性RNA擴增試劑盒進行CRNA標記與合成芯片雜交化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒進行化學(xué)發(fā)光檢測最后是圖象采集和數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。2、RT驗證從芯片實驗結(jié)果選擇轉(zhuǎn)錄上調(diào)基因CCL11、CCL16、HLAG轉(zhuǎn)錄下調(diào)基因CXCL1、CXCL2、HLAA，設(shè)計好相對應(yīng)的RTPCR引物，選擇病毒感染細胞4H、12H、24H這三個時間點，另設(shè)立對照組。用TRIZOL進行總RNA的提取，通過RTPCR對基因芯片的結(jié)果進行驗證，進一步更準確的篩選出AD7感染A549細胞后差異表達的基因。3、機制研究1機制一AD7的E1A基因通過細胞脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將構(gòu)建好的能在真核細胞高表達EIA的重組PIRESNEOAD7E1A質(zhì)粒即E1A質(zhì)粒，對照組EGFP質(zhì)粒即E1A質(zhì)粒轉(zhuǎn)染A549細胞48H后于熒光顯微鏡下觀察綠色熒光表達量，之后用TRIZOL進行總RNA的提取，RTPCR技術(shù)檢測兩組細胞CXCL1MRNA相對表達情況，觀察AD7EIA基因?qū)XCL1基因轉(zhuǎn)錄的影響。2機制二核轉(zhuǎn)運因子NFΚBAD7感染A549細胞4H、24H，設(shè)立對照組，用染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)檢測細胞NFΚB與CXCL1啟動子結(jié)合程度。結(jié)果1、選取AD7感染A549細胞24H后與正常A549細胞，進行抗原呈遞細胞基因芯片檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)AD7感染A549細胞24H后較正常細胞基因轉(zhuǎn)錄上調(diào)2倍以上的基因有5個，基因轉(zhuǎn)錄下調(diào)2倍以上的基因有12個。2、RTPCR的結(jié)果表明是在AD7感染A549細胞12H、24H后與對照組的A549細胞相比，CXCL1基因轉(zhuǎn)錄下調(diào)，具有統(tǒng)計學(xué)意義3、機制一AD7的E1A基因兩質(zhì)粒轉(zhuǎn)染A549細胞48H后于熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白表達量為70％，轉(zhuǎn)然效率已達到了實驗要求，即成功的構(gòu)建了E1AA549細胞和E1AA549細胞。之后的RTPCR結(jié)果表明E1AA549細胞比E1AA549細胞CXCL1基因MRNA水平表達明顯下調(diào)，具有顯著性差異。4、機制二NFΚBAD7感染A549細胞24H后與對照組細胞相比，NFΚB與CXCL1基因啟動子結(jié)合明顯減少，具有顯著性差異，而感染4H與對照組相比，沒有顯著性差異。實驗結(jié)論本實驗揭示出AD7感染A549細胞12H、24H后，CXCL1基因轉(zhuǎn)錄下調(diào)。E1A轉(zhuǎn)染實驗顯示E1A轉(zhuǎn)染的細胞比E1A未轉(zhuǎn)染的細胞CXCL1基因轉(zhuǎn)錄下調(diào)CHIP實驗表明病毒感染細胞24H后，NFΚB與CXCL1基因啟動子結(jié)合顯著性減少。

簡介：以SPF級BALBC小鼠為實驗動物檢測協(xié)同刺激分子CD40L、CD28以及細胞因子IL12、IL6和IL8能否作為流感病毒表面抗原HADNA疫苗佐劑增強其抗流感病毒攻擊的能力分別用電擊的方法將它們與HADNA共免疫小鼠免疫兩次間隔三周加強免疫后一周用致死量APR834H1N140LD50病毒滴鼻攻擊小鼠從免疫應(yīng)答水平、動物的體重變化及保護率等幾個方面檢測其免疫佐劑效果同時我們將多拷貝的CD40L與HA進行融合衡量它的免疫效果結(jié)果發(fā)現(xiàn)協(xié)同刺激分子CD40L和細胞因子IL12及IL8作為HADNA疫苗佐劑的效果較好而CD28、IL6則沒有效果或效果不明顯多拷貝的CD40L與HA進行融合反而起到了抑制作用

簡介：目的探討病毒性腦炎患兒腦脊液中基質(zhì)金屬蛋白酶9、鈣、鎂、鐵水平的變化及臨床意義探討病毒性腦炎患兒腦脊液中基質(zhì)金屬蛋白酶9、鈣、鎂、鐵水平之間相關(guān)性。方法采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測30例病毒性腦炎患兒和10例非病毒性腦炎患兒血清及腦脊液中基質(zhì)金屬蛋白酶9水平采用ROCHEMODULARP800生化分析儀測定30例病毒性腦炎患兒和10例非病毒性腦炎患兒血清中鈣水平及腦脊液中鈣、鎂、鐵水平。結(jié)果1病毒性腦炎輕型組血清及腦脊液中基質(zhì)金屬蛋白酶9水平均高于對照組P005病毒性腦炎組腦脊液中鈣水平低于對照組P均005。結(jié)論病毒性腦炎患兒腦脊液中基質(zhì)金屬蛋白酶9、鐵水平增高鈣、鎂水平降低提示基質(zhì)金屬蛋白酶9、鈣離子、鎂離子及鐵離子可能參與了病毒性腦炎的病理生理過程病毒性腦炎患兒腦脊液中基質(zhì)金屬蛋白酶9、鐵水平增高、鎂水平降低可能導(dǎo)致神經(jīng)細胞內(nèi)鈣離子超載病毒性腦炎患兒腦脊液中基質(zhì)金屬蛋白酶9、鐵水平增高可能直接損害神經(jīng)細胞病毒性腦炎患兒腦脊液中基質(zhì)金屬蛋白酶9、鈣水平與疾病的嚴重程度相關(guān)。