不同代數(shù)間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠心肌梗死的研究.pdf

1、目的：研究不同傳代數(shù)的MSC治療大鼠急性心肌梗死的治療作用；比較不同傳代的MSC對(duì)大鼠心梗后心功能的影響；比較不同傳代的MSC在體內(nèi)的分布情況；檢測(cè)MSC在缺血缺氧條件下分泌的細(xì)胞因子，分析細(xì)胞因子隨傳代時(shí)間延長(zhǎng)分泌的變化情況，研究旁分泌機(jī)制在MSC治療急性心梗中的作用。
　　 方法：MSC培養(yǎng)及提取上清液：取8周齡左右SD大鼠的股骨及脛骨在無(wú)菌條件下提取骨髓，用全骨髓差異貼壁法分離培養(yǎng)MSC(BoneMesenchymalSt

2、emCells，MSC)，并取第3代及第6代MSC，用終濃度320μg/mLXenoLightDiR標(biāo)記，備用，同時(shí)提取第3代及第6代MSC的培養(yǎng)上清液，用蛋白分析技術(shù)檢測(cè)培養(yǎng)上清液中的細(xì)胞因子含量。建模：用開胸結(jié)扎前降支法建立大鼠急性心肌梗死模型。實(shí)驗(yàn)分組：SD大鼠25只，雌雄不拘，隨機(jī)分為5組，心梗模型建立48小時(shí)后經(jīng)尾靜脈注射：A組：第3代MSC培養(yǎng)上清1ml;B組：第6代MSC培養(yǎng)上清1ml;；C組：第3代MSC5×106/1m

3、l;D組：第6代MSC5×106/1ml;E組：對(duì)照組，生理鹽水1ml;各組于心梗前、心梗后、移植后心臟彩色超聲評(píng)估心功能，并提取血清應(yīng)用ELISA法對(duì)各組的細(xì)胞因子進(jìn)行定性、定量分析。MSC及培養(yǎng)上清液移植后1周行小動(dòng)物活體成像及增強(qiáng)CT檢查觀察MSC體內(nèi)分布及心梗變化情況。
　　 結(jié)果：(1)多普勒超聲心動(dòng)圖檢測(cè)心梗大鼠MSC移植前后的心功能：表明第6代MSC心功能改善優(yōu)于第3代MSC;(2)小動(dòng)物全身成像觀察到第6代MSC

4、各項(xiàng)熒光強(qiáng)度高于第3代MSC，(3)采用蛋白分析技術(shù)檢測(cè)不同傳代的MSC培養(yǎng)上清液細(xì)胞因子變化情況，含量較高的細(xì)胞因子有MCP-1、TIMP-1、LIX。其中第6代MSC培養(yǎng)上清中的MCP-1和TIMP-1含量低于第3代MSC培養(yǎng)上清，LIX的含量高于第3代MSC培養(yǎng)上清。(4)ELISA法檢測(cè)MSC及上清移植后，體內(nèi)的MCP-1、TIMP-1和LIX都發(fā)生了明顯增高，其中第6代MSC組MCP-1和TIMP-1增高量低于第3代MSC組，