簡介：點擊查看更多基于金納米顆粒的呼吸道合胞病毒及其細胞膜受體免疫分析新方法研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的構(gòu)建含有人骨形態(tài)發(fā)生蛋白4基因的非復制型腺病毒表達載體ADEHBMP4并檢測目的基因的表達，以期用于骨組織工程基因治療的研究。方法ECI雙酶切質(zhì)粒PCS2HBMP4獲得目的基因片段，將HBMP4基因片段首先克隆至非病毒真核表達載體PCDNA31，后利用該載體上含有的酶切位點KPNI和XBAI，再將HBMP4基因片段定向克隆至腺病毒穿梭質(zhì)粒PSHUTTLECMV，接著用電穿孔法轉(zhuǎn)化至含有骨架質(zhì)粒PADEASY1的ECOLIBJ5183P中進行同源重組，脂質(zhì)體法將腺病毒重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEK293細胞，利用HEK293細胞中表達的腺病毒E1蛋白將重組體包裝成含有HBMP4基因的完整非復制型腺病毒，病毒顆粒感染HEK293和HELA細胞，提取總RNA和總蛋白，進行RTPCR和WESTERNBLOT檢測。結(jié)果獲得了含有目的基因的非病毒真核表達載體PCDNA31HBMP4，經(jīng)酶切、測序構(gòu)建正確，RTPCR和WESTERNBLOT檢測可以表達HBMP4；構(gòu)建成功非復制型腺病毒表達載體ADEHBMP4，酶切提示構(gòu)建正確，RTPCR檢測到HBMP4基因的轉(zhuǎn)錄，WESTERNBLOT檢測到HBMP4蛋白表達。結(jié)論將目的基因HBMP4克隆至非復制型腺病毒表達載體中，為進一步研究其在骨缺損基因治療中的應用奠定基礎(chǔ)。

簡介：該研究成功地獲得重組四片段HVR1融合抗原并對其對血清的交叉性及其抗體的保護性進行了研究為了進一步明確我們研究的F4HVR1是否能有效地作為疫苗免疫原還必須進一步研究F4HVR1AB的交叉保護作用我們發(fā)現(xiàn)抗F4HVR1抗體能捕獲2份丙肝病人血清中的病毒粒子并能阻止這兩份血清中的病毒感染敏感細胞通過RTPCR我們獲得了這兩份血清的HVR1序列測序結(jié)果說明這兩份血清中的HVR1序列與12份HVR1代表序列都不相同證明了我們抗體具有交叉保護作用這一點對HCV疫苗研究是至關(guān)重的綜上所述該研究創(chuàng)新性地運用基因重組的方法將幾條具有相對高交叉性的HVR1串聯(lián)表達大大提高了所獲得的重組HVR1抗原的交叉反應性克服了由于HVR1高變而難以測定HCV感染病人中和性抗體產(chǎn)生情況尤其高交叉免疫原的獲得為進一步預防性疫苗的研究奠定了基礎(chǔ)該研究思路有所創(chuàng)新同時對從事其他高變病毒的疫苗研究來說具有借鑒意義

簡介：腸道病毒71型又稱ENTEROVIRUSE71簡稱EV71，人類感染以后主要引起手足口病，主要癥狀為感染者有發(fā)熱癥狀，手掌或腳掌出現(xiàn)皰疹，口腔黏膜出現(xiàn)散在的皰疹并伴有疼痛的感覺。另外，EV71感染后通常伴有嚴重的神經(jīng)性癥狀，例如無菌性腦膜炎，腦干炎，脊髓灰質(zhì)炎樣麻痹和神經(jīng)性咽峽炎等。嚴重的還會出現(xiàn)肺水腫最終可導致死亡。EV71主要易感人群為五歲以下的幼兒，從1969年加利福尼亞首次發(fā)現(xiàn)至今，已發(fā)生了10多次的大流行，近幾年尤其在亞太地區(qū)流行更加頻繁，因此研究EV71的感染有著重要的意義。EV71屬于小RNA病毒科腸道病毒屬的成員。病毒顆粒是二十面體的立體對稱的球形結(jié)構(gòu)，無包膜和突起，直徑為30NM。基因組為74K的單股正鏈RNA，單一的開放閱讀框，編碼3個前體蛋白P1，P2，P3三個前體蛋白在分別裂解為4個結(jié)構(gòu)蛋白VP1，VP2，VP3，VP4和7個非結(jié)構(gòu)蛋白2A，2B，2C，3A，3B，3C和3D。各個蛋白都有著自己特定的功能。鈣離子是生物體內(nèi)最重要的無機離子之一。鈣離子能調(diào)節(jié)生物體內(nèi)的多種生理活動。包括細胞的生長，基因的調(diào)節(jié)，肌肉的收縮，以及細胞的死亡等等。我們發(fā)現(xiàn)在EV71感染細胞以后會引起細胞質(zhì)內(nèi)鈣離子的升高，對此我們做了深入的探究，發(fā)現(xiàn)是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子的釋放是引起細胞內(nèi)鈣離子升高的重要原因，另外伴隨細胞質(zhì)內(nèi)鈣離子升高的同時，細胞線粒體內(nèi)鈣離子濃度也是升高的。根據(jù)相關(guān)的文獻報道細胞線粒體鈣離子升高與細胞的凋亡情況有著密切的聯(lián)系。因此根據(jù)我們的研究，EV71感染細胞引起的鈣離子變化或許與細胞凋亡有著密切的聯(lián)系。

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簡介：研究背景膝關(guān)節(jié)置換術(shù)（TOTALKNEEARTHROPLASTY，TKA）是嚴重膝骨關(guān)節(jié)病變最有效的治療方法。該手術(shù)創(chuàng)傷較大、術(shù)后疼痛劇烈且患者多為老年，因腰椎退行性病變較多及圍術(shù)期抗凝藥物的常規(guī)使用，全身麻醉已成為重要選擇之一。術(shù)后的劇烈疼痛嚴重影響著患者的功能鍛煉和康復效果，因此TKA術(shù)后良好的鎮(zhèn)痛對患者最終關(guān)節(jié)運動動能的恢復尤為重要。國內(nèi)外大量臨床研究顯示不論是單次還是連續(xù)股神經(jīng)阻滯股神經(jīng)阻滯都能有效改善TKA患者術(shù)后鎮(zhèn)痛的效果、降低圍術(shù)期阿片類藥物用量、加快患者術(shù)后功能鍛煉和恢復、降低不良反應的發(fā)生率等，由于操作簡便、安全性較高等特點，在TKA患者中應用廣泛。但是臨床上實施股神經(jīng)阻滯的時間并不一致，術(shù)前或術(shù)后都有。術(shù)前和術(shù)后不同時間的股神經(jīng)阻滯對TKA患者術(shù)后鎮(zhèn)痛的效果有無影響；如果在術(shù)前應用股神經(jīng)阻滯，對TKA患者是否具有超前鎮(zhèn)痛作用，目前尚不明確。研究指出骨科手術(shù)、術(shù)后疼痛和年齡60歲都是術(shù)后認知功能障礙（POSTOPERATIVECOGNITIVEDYSFUNCTION，POCD）發(fā)生的危險因素之一，因此預防和減少全麻下TKA老年患者POCD的發(fā)生十分必要。炎性反應可能是POCD發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，早年曾有學者提出外周神經(jīng)阻滯技術(shù)可能給炎性反應的治療帶來新的希望，動物實驗和臨床研究已發(fā)現(xiàn)外周神經(jīng)阻滯能更好的改善術(shù)后疼痛和炎性反應。股神經(jīng)阻滯能否通過改善全麻下TKA老年的術(shù)后疼痛和炎性反應從而對術(shù)后早期認知功能產(chǎn)生影響，尚不明確。研究目的通過手術(shù)前后不同時間的股神經(jīng)阻滯對全麻下TKA老年患者術(shù)后鎮(zhèn)痛效果的影響，擬探討股神經(jīng)阻滯是否具有超前鎮(zhèn)痛作用；通過比較股神經(jīng)阻滯、閉孔神經(jīng)阻滯及對照組對全麻下TKA老年患者早期POCD發(fā)生率的影響，擬探討股神經(jīng)阻滯是否能改善全麻下TKA老年患者早期POCD的發(fā)生率；通過比較股神經(jīng)阻滯及對照組對全麻下TKA老年患者術(shù)后早期炎性反應和神經(jīng)損傷的影響，擬探討股神經(jīng)阻滯影響全麻下TKA老年患者術(shù)后早期認知功能的可能機制，為TKA老年患者的疼痛管理和POCD預防提供新的思路。研究方法1采用隨機數(shù)字表法，分為3組對照組（Ⅰ組）不實施股神經(jīng)阻滯；術(shù)前股神經(jīng)阻滯組（Ⅱ組）于麻醉誘導前行超聲引導下單次股神經(jīng)阻滯；術(shù)后股神經(jīng)阻滯（Ⅲ組）于手術(shù)結(jié)束即刻行超聲引導下單次股神經(jīng)阻滯。術(shù)后三組患者均行PCIA鎮(zhèn)痛。分別記錄兩組患者術(shù)后2H、6H、12H、24H、48H、72H時靜息狀態(tài)VAS評分與術(shù)后12H、24H、48H、72H時運動狀態(tài)VAS評分，及術(shù)后24H內(nèi)PCIA中的舒芬太尼用量、PCIA的有效按壓次數(shù)（D1）和實際按壓次數(shù)（D2），并計算D1D2；記錄術(shù)后24H內(nèi)不良反應發(fā)生情況。2采用隨機數(shù)字表法，分為3組對照組（Ⅰ組）、股神經(jīng)阻滯組（Ⅱ組）和閉孔神經(jīng)阻滯組（Ⅲ組）。Ⅱ和Ⅲ組患者分別于麻醉誘導前行患側(cè)股神經(jīng)和閉孔神經(jīng)阻滯，空白對照組不實施股神經(jīng)阻滯。分別記錄兩組患者術(shù)中的麻醉時間、麻醉藥用量、手術(shù)時間及出血量；并記錄入室、開始手術(shù)及隨后每30MIN患者的MAP及HR至手術(shù)結(jié)束；記錄每組患者術(shù)中血管活性藥使用率；分別測試3組患者在術(shù)前1D和術(shù)后3、7D的MMSE評分并計算術(shù)后3、7D的POCD發(fā)生率。3采用隨機數(shù)字表法，將其分為2組對照組（Ⅰ組）和股神經(jīng)阻滯組（Ⅱ組）。Ⅱ組于麻醉誘導前行患側(cè)股神經(jīng)阻滯。所有患者分別于麻醉開始前、手術(shù)結(jié)束時、術(shù)后2H時抽取動脈血樣1ML行血氣分析記錄PH值、LAC值及血糖值；分別于術(shù)前1DT0、術(shù)后2HT1、術(shù)后6HT2、術(shù)后12HT3、術(shù)后1DT4時采集外周靜脈血5ML，由經(jīng)過培訓且不參與麻醉的同一測試者采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血漿TNFΑ和IL6水平；并于分別于術(shù)前1DT0、術(shù)后1DT4、術(shù)后3DT5和術(shù)后7DT6時采集外周靜脈血5ML，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清AΒ和TAU蛋白濃度。研究結(jié)果1與對照組比較，術(shù)前股神經(jīng)阻滯組和術(shù)后股神經(jīng)阻滯組術(shù)后2H、6H、12H靜息狀態(tài)VAS評分與術(shù)后12H運動狀態(tài)VAS評分降低、術(shù)后24H內(nèi)PCIA的舒芬太尼用量減少、D1D2升高、惡心嘔吐的發(fā)生率也降低（P005）。2與對照組比較，股神經(jīng)阻滯組患者麻醉時間、手術(shù)時間、出血量及術(shù)中丙泊酚的總用量差異無顯著性（P005），但術(shù)中瑞芬太尼的總用量顯著減少（P005）；三組患者從麻醉開始到手術(shù)結(jié)束各時間點的MAP、HR的動態(tài)變化及術(shù)中血管活性藥物使用率比較差異無顯著性（P005）；術(shù)后3D時，與空白對照組比較，股神經(jīng)阻滯組的MMSE評分顯著增高，POCD的發(fā)生率顯著降低，而閉孔神經(jīng)阻滯組的MMSE評分和POCD發(fā)生率差異無顯著性（P005）；術(shù)后7D時，三組的MMSE評分和POCD發(fā)生率比較差異無顯著性（P005）。3與對照組比較，股神經(jīng)阻滯組患者在手術(shù)結(jié)束及術(shù)后2H的血糖值顯著降低（P005）；與術(shù)前T0時刻比較，術(shù)后T1、T2、T3和T4時刻兩組患者的血漿TNFΑ和IL6水平均顯著升高（P005）。研究結(jié)論1股神經(jīng)阻滯能改善全麻下TKA老年患者術(shù)后早期PCIA的鎮(zhèn)痛效果，降低術(shù)中和術(shù)后早期阿片類藥物用量，但是無超前鎮(zhèn)痛作用。2股神經(jīng)阻滯能降低全身麻醉下TKA老年患者術(shù)后早期認知功能障礙的發(fā)生率。3股神經(jīng)阻滯能抑制全麻下TKA老年患者術(shù)后早期炎性反應。4股神經(jīng)阻滯能通過改善全麻下TKA老年患者術(shù)后早期的疼痛和炎性反應，從而減輕神經(jīng)損傷，改善術(shù)后早期的認知功能。

簡介：分類號R7801密級單位代碼10422學號0767016◎厶茹辦孑碩士學位論文HANDONGUNIVERSITYMASTERSTHESIS論文題目大學生口腔健康認知與行為的調(diào)查分析RECOGNITIONANDBEHAVIORRELATEDTOORALHEALTHAMONGUNDERGRADUATESTUDENTSOFSHANDONGUNIVERSITY作專導合作導師2010年LO月20日山東大學碩士學位論文目錄一中文摘要3二英文摘要5三符號說明8四論文9前言9日U吞。方法1L結(jié)果12第一部分基本資料12第二部分山東大學1227名本科生口腔健康認知和行為現(xiàn)況12第三部分山東大學1227名本科生口腔健康認知和行為年級差異15第四部分山東大學1227名本科生口腔健康認知及行為性別差異15第五部分山東大學1227名本科生口腔健康認知及行為校區(qū)差異17討論20結(jié)論23參考文獻27五綜述29不同人群的口腔保健概況29六附錄35大學生口腔健康知識問卷調(diào)查表35大學生口腔健康行為及習慣的調(diào)查表37七攻讀碩士學位期間發(fā)表論文38八致謝47

簡介：山東大學碩士學位論文妊娠合并人乳頭瘤病毒感染對母兒影響的探討姓名鄭曉霞申請學位級別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學指導教師王謝桐20081028山東大學碩士學位論文感染率經(jīng)陰分娩組393％，剖宮產(chǎn)分娩組391％；新生兒咽、外陰分泌物HPV感染率經(jīng)陰分娩組314％，剖宮產(chǎn)分娩組371％；新生JIAI陰分泌物HPV感染率經(jīng)陰分娩組3258％，剖宮產(chǎn)分娩組3608％。均P005，無統(tǒng)計學差異。5感染陽性嬰兒HPV轉(zhuǎn)歸情況產(chǎn)后6個月嬰兒咽喉分泌物HPV陽性率1505％28／186，外陰分泌物HPV陽性率為1774％33／186，產(chǎn)后12個月時HPV感染情況咽分泌物5例陽性2688％，外陰分泌物2例陽性1075％。產(chǎn)后兩年復查，均轉(zhuǎn)為陰性。未發(fā)現(xiàn)產(chǎn)時感染陰性而后又有感染者。6乳汁HPV檢測結(jié)果初乳HPV陽性者55例，占2956％，產(chǎn)后6個月復查陽性者10例，陽性率為537％。結(jié)論妊娠期婦女下生殖道HPV感染率高于同期非妊娠婦女，宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變CIN的發(fā)病率與同期非妊娠婦女相比無明顯升高。HPV可經(jīng)垂直傳播途徑引起宮內(nèi)感染，剖宮產(chǎn)不能阻止新生兒HPV感染，選擇性剖宮產(chǎn)較經(jīng)陰分娩對嬰兒也無顯著的保護作用。但嬰幼兒的轉(zhuǎn)陰率極高，未見胎嬰兒生長發(fā)育異常，新生兒呼吸道乳頭瘤發(fā)病率極低。母乳喂養(yǎng)不增加嬰兒HPV感染機率。持續(xù)HPV感染患者可在病毒負荷量低時計劃妊娠。HPV感染不是人工終止妊娠的指征。關(guān)鍵詞人乳頭瘤病毒妊娠感染性疾病傳播垂直傳播聚合酶鏈反應技術(shù)診斷治療母乳喂養(yǎng)2

簡介：第一軍醫(yī)大學碩士學位論文口腔科患者對牙周病認知情況的調(diào)查分析姓名陳中菲申請學位級別碩士專業(yè)口腔內(nèi)科學指導教師劉宏偉20060518碩士學位論文本研究采用自擬問卷調(diào)查表進行調(diào)查，了解在口腔科就診的患者對關(guān)于牙周病方面知識的認識水平及薄弱環(huán)節(jié)，為在工作中對人們采取有針對性的口腔健康教育及治療提供參考依據(jù)。參與問卷調(diào)查的人群選自2005年5月至9月問在武警上?？傟犪t(yī)院口腔科就診的患者，共計185例，其中男93例，女92例，本科以下學歷的88例，本科學歷79例，本科以上學歷18例，干部35例，農(nóng)民37例，工人42例，學生32例，其他職業(yè)39例。問卷內(nèi)容涉及牙周病癥狀，可引起牙周病的不良習慣，和牙周病有關(guān)的全身因素及口腔局部因素，菌斑及其控制，刷牙目的及每次刷牙時間，“洗”牙間隔，牙周治療費用的接受能力以及預防牙周病的措旌。調(diào)查結(jié)果顯示，口腔科患者對牙周病癥狀認知程度較高，文化程度越高認知程度越高，不同職業(yè)中農(nóng)民、工人及學生較干部的知曉率略低，女性對牙周病早期癥狀比男性更為敏感?？梢鹧乐懿〉牟涣忌盍晳T較多，患者對夜磨牙、長期用口呼吸少見的習慣知曉率偏低，對一些常見的不良習慣如牙簽剔牙、牙咬硬物、單側(cè)咀嚼，刷牙過重有所了解，但在生活中是否可以真正避免，才是能否避免疾病發(fā)生的關(guān)鍵。牙周病是多因素疾病，全身因素可以增加宿主對細菌及其產(chǎn)物等致病因子的敏感性，降低或改變牙周組織對外界刺激的抵抗力，促進疾病的發(fā)生和發(fā)展。由于近年來糖尿病患者的增多，糖尿病知識的普及引起了人們對牙周病與糖尿病之間關(guān)系的注意，調(diào)查中人們對此知曉率較高，其中以男性和干部居多。社會壓力的增大，使80％的男性，100％本科以上學歷的人及86％的干部意識到精神長期緊張易導致牙周病的發(fā)生或加重。內(nèi)分泌功能的紊亂時期如青春期、妊娠期容易發(fā)生牙周病，在這些特殊時期里人們應該更加注意口腔狀況，但只有小部分人群能有所認識。知道遺傳與牙周病也有一定關(guān)聯(lián)的人僅10％，文化程度越高知道的人越多。吸煙是最為人們所認知的與牙周病有關(guān)的口腔局部因素，97％的人知道，相比之下，能意識到不適合的假牙對牙周組織也有不良影響有25％的人。實際臨床中不良修復體是造成牙齦炎癥和牙周破壞的常見原因?！熬摺笔谴蟛糠秩吮容^陌生的名詞，僅有25％的人聽說

簡介：中山大學碩士學位論文EBNA1穩(wěn)定鼻咽癌細胞內(nèi)EB病毒基因組作用的初步探討姓名何玉文申請學位級別碩士專業(yè)藥理學指導教師黃民杜軍20060501EBNAL穩(wěn)定鼻咽癌細胞內(nèi)EB病毒基因組作用的初步探討4EBNAL真核表達載體的構(gòu)建及WESTERNBLOT檢測PCR擴增EBV的EBNAILRL和LR2一DNA結(jié)合區(qū)兩段功能片斷，先后連于真核表達載體PCDNA31／MYCHISC，完成EBNAL真核表達載體的構(gòu)建，將其命名為PTEBNA。將PTEBNA瞬時轉(zhuǎn)染293細胞，通過WESTERNBLOT檢測EBNAL的表達。5PTEBNA穩(wěn)定EBV基因組的功能鑒定在感染后第九天的CNEB2細胞轉(zhuǎn)染PTEBNA及空載體，通過檢測EBER的轉(zhuǎn)錄持續(xù)期間，驗證PTEBNA具有穩(wěn)定EBV基因組于鼻咽癌細胞內(nèi)的功能。結(jié)果1形態(tài)學觀察發(fā)現(xiàn)CNEBL和CNEB2細胞形態(tài)有所改變，由多邊形變成梭形，一些細胞內(nèi)有許多空泡生成，貼附能力明顯減弱。2對CNEB2細胞的CAJADRBI基因的檢測結(jié)果為陰性，證明抗體激活補體依賴的細胞毒性實驗能有效去除B958細胞。3在DNA水平檢測到了BAMHIW基因，證明CNEB2細胞內(nèi)存在EBV基因，在RNA水平檢測到BZLF一1轉(zhuǎn)錄持續(xù)12天，EBER轉(zhuǎn)錄持續(xù)14天。通過SOUTHERNHYBRIDIZE雜交的方法進一步驗證了BZLF一1的轉(zhuǎn)錄。4成功構(gòu)建了EBNAL真核表達載體PTEBNA，通過WESTERNBLOT檢測到目的基因EBNAL可以在真核細胞中表達。5轉(zhuǎn)染PTEBNA的CNEB2細胞內(nèi)EBV基因持續(xù)時間明顯長于對照組。結(jié)論本研究通過建立EBV陽性的鼻咽癌細胞模型，主要得出以下結(jié)論鼻咽癌細胞與8958細胞接觸共培養(yǎng)的方法是鼻咽癌細胞感染EBV的有效途徑。與CNEL相比CNE2的細胞內(nèi)環(huán)境更適合EBV的潛伏感染?？贵w激活補體依賴的細胞毒性實驗能選擇性地去除B958細胞。CNEB2細胞內(nèi)BZLF1及EBER轉(zhuǎn)錄的檢測結(jié)果揭示了EBV初始感染鼻咽癌后由裂解期到潛伏期轉(zhuǎn)變的規(guī)律。成功構(gòu)建了EBNAL的真核表達載體PTEBNA，并初步證明了EBNAL穩(wěn)定鼻咽癌細胞內(nèi)EBV基因組的作用。Ⅱ

簡介：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院博士學位論文腫瘤特異性增殖腺病毒CNHK500治療乳腺癌的實驗研究姓名李月敏申請學位級別博士專業(yè)腫瘤臨床藥理學指導教師宋三泰江澤飛20040520軍事『必學科學院縮略側(cè)表陋L’論文縮寫HIFHREHTERL、ITRKBKDALBMCSMEMMOIMTTPAGEPBSPCRPFUPRPSAODTETRAPWTAD5英文全稱HYPOXIAINDUCIBLEFACTOR中文全稱缺氧誘導凼子HYPOXIARESPONSEELEMENT缺氧反應元件HUAMANTELOMERASEREVERSETRASCRIPTASE人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄哺INVERTEDTERMINALREPEATKILOBASEKILODALTONLURIABERTANIBROTHMULTIPLECLONINGSITE反F∞術(shù)端重復干堿基對千道爾頓LB培養(yǎng)基多克隆位點MINIMALESSENTIALMEDEUMMEM培養(yǎng)液MULTIPLICITYOFINFECTIONVIRES／CELL34，5DIMETHYTHIAZOL一2一Y12，5一DIPHENYLTETRAZOLIUMBROMIDEPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESISPHOSPHATEBUFFEREDSALINEPOLYMERASECHAINREACTIONPLAQUEFORMINGUNITPROGESTERONERECEPTORPROSTATESPECIFICANTIGENOPTICALDENSITY感染復數(shù)聚丙烯凝膠電泳磷酸鹽緩沖液多聚酶鏈式反應空斑形成單位孕激素受體的列腺特異性抗原光吸收度TISSUECUITUREINFECTIOUSDOSE5050％TFTR培養(yǎng)感染劑量1IS／EDL’ATE溶液TELOMERICREPEATAMPLIFICATIONPROCOTOL端粒重復末端擴增協(xié)議WILDTYPEADENOVIRUS5型野生型腺病毒2

簡介：中圖分類號密級TACE聯(lián)合抗病毒治療乙肝相關(guān)性肝癌的療效觀察THECLINICALCURATIVEEFFECTOFTRANSCATHETERARTERIALCHEMOEMBOLIZATIONCOMBINEDWITHANTIVIRALTHERAPYINPATIENTSWITHHEPATITISBVIRUSASSOCIATEDHEPATOCELLULARCARCINOMA計學位論文37頁表插格7個圖3幅指導教師馮繼紅教授申請學位級別碩士學位劉紅玲學科專業(yè)內(nèi)科學培養(yǎng)單位大連醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院完成時間二O一五年三月答辯委員會主席關(guān)于學位論文使用授權(quán)的說明本學位論文作者完全了解學校有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)大連醫(yī)科大學可以將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編本學位論文。本學位論文屬于請在以下相應方框內(nèi)打“4“1保密口，在一年解密后適用本授權(quán)書。2不保密口。作者簽名導師簽名日期年月日日期年月日

簡介：目的探討HBX基因?qū)θ烁伟┘毎鸋EPG2凋亡及凋亡相關(guān)基因表達的影響。方法用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將HBX基因真核表達載體PCDNA31X轉(zhuǎn)入人肝癌細胞HEPG2中，建立瞬時轉(zhuǎn)染細胞模型HEPG2HBXT；G418篩選陽性克隆，反復傳代，并且至少凍存1次，建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞模型HEPG2HBXS。通過RTPCR、免疫熒光和免疫印跡檢測鑒定HBX基因在瞬時轉(zhuǎn)染及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞中的表達。以轉(zhuǎn)染空載體PCDNA31的HEPG2HEPG2PCDNA31細胞和未轉(zhuǎn)染的HEPG2細胞為對照，取瞬時轉(zhuǎn)染后24H、48H、72H、96H細胞及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞，作以下處理行流式細胞術(shù)分析肝細胞凋亡率的變化；分別取細胞標本抽提RNA并以ΒACTIN為內(nèi)參，半定量RTPCR法檢測HBXMRNA和凋亡相關(guān)基因FASMRNA、BAXMRNA、BCL2MRNA表達量的變化。結(jié)果1瞬時轉(zhuǎn)染及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染均成功地將HBX基因轉(zhuǎn)至HEPG2細胞中，經(jīng)RTPCR、免疫熒光和免疫印跡法證實了瞬時轉(zhuǎn)染及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞中均有HBX基因的表達。2瞬時轉(zhuǎn)染后于24H、48H、72H、96H，HEPG2HBXT與HEPG2PCDNA31T細胞相比，細胞凋亡率、FASMRNA表達量、BAXMRNA表達量均增高，而BCL2MRNA表達量均減少，差別均有統(tǒng)計學意義P005。3瞬時轉(zhuǎn)染時HEPG2HBXT細胞HBXMRNA表達量隨時間延長而逐漸增高P005；而HEPG2HBXS細胞中BCL2MRNA表達量較HEPG2PCDNA31S及HEPG2細胞均增高，差別均有統(tǒng)計學意義P005。結(jié)論1本實驗成功建立了瞬時及穩(wěn)定表達HBX的HEPG2HBX細胞模型。2瞬時轉(zhuǎn)染時HBX基因可通過上調(diào)FAS、BAX，下調(diào)BCL2的表達，促進HEPG2細胞凋亡。且隨著HBXMRNA表達量逐漸增高，對FAS、BAX、BCL2基因的調(diào)節(jié)作用越明顯，其促凋亡效應也越明顯。3穩(wěn)定轉(zhuǎn)染時HBX基因?qū)EPG2細胞FASMRNA、BAXMRNA的表達影響不明顯，但能上調(diào)BCL2MRNA的表達；提示穩(wěn)定轉(zhuǎn)染時HBX基因促凋亡能力相對減弱，利于細胞增殖。4HBXMRNA的表達量不同時，其對HEPG2細胞凋亡及凋亡相關(guān)基因的調(diào)節(jié)作用也不同，表明HBX表達量與細胞凋亡密切相關(guān)。

簡介：研究生導師及課題小組成員簡介指導老師史偉云，男，1959年4月生，眼科學教授、主任醫(yī)師、博士生導師?，F(xiàn)任山東省眼科研究所黨委書記、副所長、山東省眼科醫(yī)院院長，兼任中華醫(yī)學會眼科學分會角膜病學組副組長，是中華醫(yī)學會眼科學分會專家委員、“泰山學者“特聘專家、省有突出貢獻的中青年專家和山東省首屆醫(yī)學領(lǐng)軍人才，中華眼科雜志等編委。主要從事眼科角膜病、白內(nèi)障、眼免疫學等的臨床及應用基礎(chǔ)研究。作為課題首位人員承擔國家863重大和重點課題、國家自然科學基金和山東省自然科學基金及省攻關(guān)課題等各類課題11項，發(fā)表SCI及國家核心期刊專業(yè)論文145篇，為首獲省科技進步一等獎L項。合作出版我國首部角膜病學專著，參編了角膜移植學等書籍。共帶教博、碩士研究生34名。課題組成員高華，男，1978年生，副主任醫(yī)師，山東省眼科醫(yī)院副院長。王婷，女，1980年生，主治醫(yī)師，山東省眼科醫(yī)院醫(yī)務部T任。李素霞，女，1980年生，主治醫(yī)師，山東省眼科醫(yī)院角膜病科。一目錄中文摘要II英文摘要V主要縮略詞表VIII前言1日罱1臨床資料與方法3一臨床資料3二裂隙燈檢查3三共焦顯微鏡檢查3四眼前段OCT檢查4五藥物治療4結(jié)果6一裂隙燈下HSK內(nèi)皮型患者的觀察6二共焦顯微鏡下HGK內(nèi)皮型患者的角膜表現(xiàn)LO三ASOCT下HSK內(nèi)皮型患者的角膜表現(xiàn)18討論21結(jié)論26參考文獻27綜I苤28參考文獻35攻讀碩士學位期間的研究成果38致謝39

簡介：目的干擾素刺激基因20（ISG20）是一種由I型（IFNΑΒ）或II型干擾素（IFNΓ）誘導產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，具有特異的單鏈RNA或DNA的核酸外切酶活性，對于多種RNA病毒和部分DNA病毒均有抑制作用。細胞內(nèi)定位分析發(fā)現(xiàn)ISG20主要位于核小體和CAJAL小體，鑒于核小體是RRNA和核糖體生成的主要場所，CAJAL小體是SNRNA和SNNA生成的主要場所，進一步提示ISG20可能通過其核酸外切酶作用影響SNRNA和RRNA的成熟，從而抑制蛋白合成進而發(fā)揮抗病毒作用。因此，ISG20的表達差異及核酸外切酶活性對于不同病毒感染性疾病的發(fā)病、Α干擾素治療的療效及預后可能具有重要影響。本研究從臨床試驗和體外實驗兩方面觀察ISG20在Α干擾素治療應答組及無應答組慢乙肝患者肝臟組織標本中的表達差異與Α干擾素療效的相關(guān)性，并對其所參與的Α干擾素抗乙肝病毒機制進行初步研究。方法本研究首先選取接受Α干擾素治療的慢乙肝患者24人，給予聚乙二醇干擾素Α2A（PEGINTERFERONALPHA2A，派羅欣）抗乙肝病毒治療48周，共隨訪72周，依隨訪結(jié)果分為治療應答組及無應答組。對其治療前肝穿標本行免疫組化檢測觀察ISG20蛋白在各組肝臟組織中的差異表達并以QRTPCR加以驗證。在體外實驗中，我們選擇在HBVDNA全基因重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肝癌細胞株HEPG2形成的HEPG2215細胞系上進行研究，后者是體外研究乙肝病毒對肝細胞影響的經(jīng)典模型。通過構(gòu)建ISG20過表達慢病毒載體感染HEPG2215細胞，觀察ISG20差異表達對乙肝病毒活性的影響，驗證ISG20的抗乙肝病毒作用通過點突變方法構(gòu)建ISG20去核酸外切酶活性的慢病毒載體，探討ISG20發(fā)揮抗乙肝病毒作用的機制是否依賴外切酶活性。分別用QRTPCR及化學發(fā)光法檢測細胞上清液中HBVDNA及乙肝表面抗原HBSAG及E抗原（HBEAG）評價其抗乙肝病毒活性。結(jié)果免疫組化染色結(jié)果顯示Α干擾素治療應答組患者治療前肝組織中ISG20蛋白較無應答組及對照組顯著升高且在應答組ISG20主要表現(xiàn)為細胞核高表達，明顯區(qū)別于無應答組及對照組。在體外實驗中，加入Α干擾素處理后，ISG20隨著Α干擾素濃度的增加逐漸升高。野生型ISG20過表達組可以顯著抑制乙肝病毒，這一結(jié)果與Α干擾素干預組的結(jié)果相似，并且ISG20過表達慢病毒與Α干擾素聯(lián)合干預HEPG2215細胞后其抑制乙肝病毒作用顯著增強；而突變型ISG20的外切酶活性失活后，ISG20對乙肝病毒的抑制作用消失。此外，行免疫熒光檢測，可見ISG20蛋白高表達于細胞核，這一結(jié)果與肝活檢的免疫組化染色結(jié)果相一致，進一步證實ISG20抗乙肝病毒作用主要依賴于其核酸外切酶活性。結(jié)論本研究發(fā)現(xiàn)在Α干擾素治療慢乙肝應答組及無應答組中，ISG20蛋白的表達水平及細胞內(nèi)分布存在顯著差異，提示肝組織內(nèi)ISG20蛋白的差異表達與Α干擾素治療慢乙肝的療效相關(guān)。體外實驗證實，ISG20作為干擾素刺激基因，可由Α干擾素誘導產(chǎn)生，ISG20的表達差異與Α干擾素抗乙肝病毒作用差異存在顯著的相關(guān)性，并發(fā)現(xiàn)其抗乙肝病毒作用主要依賴于其核酸外切酶活性。