簡介：目的1探討酸性氧化電位水、戊二醛、鄰苯二甲醛三種消毒劑對消化內(nèi)鏡細菌的消毒效果為選擇最佳消毒方法提供依據(jù)。2明確乙肝住院患者胃鏡檢查或治療后胃鏡外表和內(nèi)腔HBSAG污染情況。3明確人工清洗對胃鏡外表和內(nèi)腔的清洗效果及不同消毒劑對乙肝病毒的殺滅效果。方法1隨機選擇臨床使用后的胃鏡和腸鏡共210例在人工清洗條件下嚴(yán)格規(guī)范清洗流程分別采用三種消毒劑消毒比較清洗前和消毒后胃腸鏡菌落數(shù)差異比較不同消毒劑的消毒效果。2現(xiàn)況調(diào)查隨機選擇某院2012年69月住院確診為乙型肝炎的所有連續(xù)病例共120例。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA法檢測乙肝患者使用后胃鏡外表和內(nèi)腔污染的HBSAG分別計算HBSAG陽性率采用卡方檢驗比較兩者差異。3通過模擬實驗將高濃度乙肝病毒血清污染胃鏡外表和內(nèi)腔采用熒光定量PCR技術(shù)檢測清洗前、清洗后、消毒后胃鏡外表和內(nèi)腔乙肝病毒含量分別采用配對T檢驗和T檢驗明確人工清洗對胃鏡外表和內(nèi)腔的清洗效果和消毒劑對乙肝病毒的殺滅作用。結(jié)果1對胃鏡、腸鏡內(nèi)腔沖洗液進行細菌培養(yǎng)和菌落計數(shù)。采用KRUSKALWALLIS秩和檢驗分別比較三種消毒劑清洗前、消毒后和殺菌率的差異性。結(jié)果顯示三種消毒劑對胃鏡的殺菌效果差異無統(tǒng)計學(xué)意義P005消毒合格率全部為100％未檢出存活細菌對腸鏡消毒合格率不同從低到高分別是酸性氧化電位水4444、戊二醛5484、鄰苯二甲醛7500三種消毒劑對腸鏡的殺菌效果差異有統(tǒng)計學(xué)意義P2胃鏡外表和內(nèi)腔HBSAG陽性率分別為3637、5833卡方檢驗結(jié)果顯示胃鏡外表與內(nèi)腔HBSAG污染陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義P3人工清洗后胃鏡外表和內(nèi)腔殘留乙肝病毒平均含量差異有統(tǒng)計學(xué)意義P4酸性氧化電位水、鄰苯二甲醛、戊二醛對對胃鏡外表上污染的乙肝病毒的殺滅率依次分別為9126、9296、8676。消毒后內(nèi)腔乙肝病毒含量均為0IUML殺滅率均為100。結(jié)論1根據(jù)胃鏡、腸鏡受不同微生物污染的情況可選用不同消毒劑消毒胃鏡選擇酸性氧化電位水消毒2MIN腸鏡選擇鄰苯二甲醛消毒5MIN。2乙肝患者使用后胃鏡HBSAG污染陽性率內(nèi)腔5833大于外表3637。應(yīng)同樣重視門診和住院乙肝患者及HBEAG陽性患者使用后胃鏡的清潔和消毒。3人工清洗對胃鏡內(nèi)腔污染乙肝病毒血清清洗效果優(yōu)于外表。4胃鏡內(nèi)腔消毒效果優(yōu)于外表。鄰苯二甲醛對乙肝病毒的殺滅率最高。

簡介：本文選用四種不同的培養(yǎng)條件對臍血AC133細胞進行體外誘導(dǎo)分化，發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)液DMEMF12中加入皮生長因子EGF和堿性成纖維生長因子BFGF并聯(lián)用腦源性生長因子BDNF，及全反式維甲酸RA，或者將其與預(yù)先制備并生長在培養(yǎng)板插槽UPCHAMBER半透膜上的胎腦滋養(yǎng)細胞共培養(yǎng)四周，有54±18％到77±24％臍血細胞分化為GFAP星形細胞；而將預(yù)先用BRDU標(biāo)記的臍血AC133細胞直接種在胎腦滋養(yǎng)細胞上培養(yǎng)四周，不僅有78±21％GFAP星形細胞形成，還有23±07％的臍血細胞分化為ΒⅢTUBULIN的神經(jīng)元。上述結(jié)果表明，臍血來源的AC133細胞在適合的條件下具有向神經(jīng)分化的潛能。將上述5105AC133細胞經(jīng)腦室移植有認(rèn)知障礙的轉(zhuǎn)基因小鼠，經(jīng)放射臂水迷宮RAWM測試，從移植后30天至180天，認(rèn)知功能均有改善，90天時改善最明顯；而接受AC133細胞移植的對照組無變化。同時發(fā)現(xiàn)，AC133細胞移植組小鼠的存活時間較對照組平均延長96天平均648天VS552天。免疫組化檢測顯示，標(biāo)記有DIL的移植細胞在宿主腦內(nèi)產(chǎn)生廣泛遷移，主要分布在雙側(cè)頂葉皮質(zhì)及海馬內(nèi)，并分化為GFAP星形細胞和NSE或NF神經(jīng)元。上述結(jié)果首次發(fā)現(xiàn)，經(jīng)腦室移植臍血AC133細胞能改善癡呆小鼠認(rèn)知功能并延長存活時間，提示臍血AC133細胞可能成為移植治療癡呆小鼠的可用的干細胞源。

簡介：分類號UDCR81L密級重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文鐵蛋白基因FTHL慢病毒載體質(zhì)粒構(gòu)建及在腫瘤細胞中論文題目的表達作者姓名高雅麗指導(dǎo)教師姓名職稱、單位名稱蔡金華教授重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院申請學(xué)位級別碩士學(xué)科、專業(yè)名稱影像醫(yī)學(xué)與核醫(yī)學(xué)論文答辯年月2013年5月2013年5月目錄英漢縮略語名詞對照1中文摘要2英文摘要。5論文正文鐵蛋白基因FTHL慢病毒載體質(zhì)粒構(gòu)建及在腫瘤細胞中的表達9前言9月U吾。1材料與方法1L2結(jié)果263討論364結(jié)論37參考文獻38文獻綜述磁共振報告基因成像的研究進展40致謝。47碩士期間發(fā)表論文48

簡介：第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文腺病毒介導(dǎo)的PTENCDNA對子宮內(nèi)膜癌細胞作用的研究姓名楊培麗申請學(xué)位級別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師崔英蔡在龍20040301第二軍醫(yī)人學(xué)縮略詞表碩士研究生畢業(yè)論文PTENPHOSPHASEANDTENSINHOMOLOGY與細胞張力蛋白同源ADAMPRANBDBSACDNACPEDMEMDMSODNTPEDTAFBSKBLBMCSMOIOLIGODTPAGEDELETEDONCHROMOSOMETEN在腫瘤LO號染色體有ADENOVIRUSAMPICILLINKANAMYCINBASEPAIRBOYINSERUMALBUMINCOMPLEMENTARYDNACYTOPATHICEFFECT缺失的磷酸酶基因腺病毒氨芐青霉素卡那霉素堿基對小牛血清白蛋白互補DNA細胞病變效應(yīng)DULBECCO’SMODIFIEDEAGLEMEDIUMDMEM培養(yǎng)基DIMETHYLSUFOXIDE二甲亞砜DEOXYNUCLEOSIDETRIPHOSPHATE脫氧核糖核苷三磷酸ETHYLENEDIAMIRETETRAACETICACID乙二胺四乙酸FETALBOYINESERUMKILOBASELURIABERTAINMULTIPLECLONINGSITE胎牛血清千堿基對LB培養(yǎng)基多克隆位點MULTIPLICITYOFINFECTION感染復(fù)數(shù)OLIGQDEOXYTHYMIDYLICACID寡脫氧胸苷酸POLYACRIYLAMIDEGELELECTROPHORESIS聚丙烯凝膠電泳

簡介：河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動子驅(qū)動重組腺病毒治療人前列腺癌的動物實驗研究姓名齊進春申請學(xué)位級別碩士專業(yè)外科學(xué)指導(dǎo)教師黎瑋20060301中文摘要對裸鼠移植性前列腺癌進行治療，從而將HSUTK基因選擇性地導(dǎo)入前列腺癌細胞，并能把GCV轉(zhuǎn)化為毒性代謝物一～三磷酸丙氧鳥苷，其作為鏈的終止劑，干擾細胞分裂時DNA的合成，最終導(dǎo)致前列腺癌細胞阻抑或死亡而對正常細胞沒有影響。從而體現(xiàn)該治療系統(tǒng)的安全性、有效性以及靶向性。方法于裸鼠右前背部皮下接種5107個／MLLNCAP細胞懸液0．1M1，建立人前列腺癌裸鼠移植瘤模型。待成瘤約50MM3后，將荷瘤裸鼠隨機分為4組，每組10只。分組以及給藥方式如下A組，空白對照，不給藥；B組，ADHTERT_HSV_TK對照組，經(jīng)尾靜脈注射5．O109PFU／ML重組腺病毒ADHTER■HSV_TK0．1ML，第1，5，10天各1次，第2～15天腹腔注射PBS0．1M1；C組，GCV對照組，經(jīng)尾靜脈注射PBSO．1M1，第L，5，10天各1次，第2～15天腹腔注射GCV50M∥K；D組，治療組，經(jīng)尾靜脈注射AD_HTEIMHSVTK同B組，腹腔注射GCV同C組。觀察腫瘤體積、重量、抑制率、體積一時問曲線以及裸鼠生存期。實驗結(jié)束后，取前列腺腫瘤組織制備石蠟切片進行HE染色，應(yīng)用流式細胞學(xué)法、TUNEL法及透射電鏡檢查檢測腫瘤細胞凋亡，免疫組化染色檢測增殖細胞核抗原，測定增殖指數(shù)。結(jié)果在作用底物GCV存在條件下，ADHTERTHSVTK對裸鼠移植瘤具有明顯抑制作用，在整個觀察期內(nèi)，ADHTERTHS、LTL／GCV治療組的腫瘤體積均明顯小于對照組PO．05，對照組各組之間相比無顯著性差異比較切除腫瘤標(biāo)本的重量，可發(fā)現(xiàn)AD．HTER■HSV_T“GCV治療組的移植癰熏量明顯輕于對照組JP0．000137，也明顯輕于

簡介：脊髓損傷SPINALCDINJURY，SCI在世界范圍內(nèi)均被認(rèn)為是主要的公共健康問題，常導(dǎo)致患者嚴(yán)重的神經(jīng)功能損害。SCI后，由于炎癥反應(yīng)，空洞形成，髓磷脂相關(guān)抑制劑以及膠質(zhì)瘢痕的形成均造成軸突再生困難，而且脊髓的內(nèi)源性前體細胞分化為成熟的膠質(zhì)細胞能力有效。因此，使用外源細胞移植治療SCI，成為目前研究的熱點之一。嗅鞘細胞OLFACTYENSHEATHINGCELLS，OECS，以及嗅神經(jīng)成纖維細胞，共同構(gòu)成嗅神經(jīng)的包被部分。OECS伴隨嗅神經(jīng)纖維從鼻腔嗅粘膜直至嗅球神經(jīng)層。動物實驗表明，OECS移植治療有助于SCI后軸突的更新和功能學(xué)恢復(fù)。而且，OECS也可以作為基因的載體治療SCI。血管內(nèi)皮細胞生長因子VULARENDOTHELIALGROWTHFACT，VEGF，最早發(fā)現(xiàn)于1983年，當(dāng)初被命名為腫瘤分泌的血管滲透因子，后在1989年得到純化，并命名為VEGF。VEGF是一種分泌性絲裂原，可與其酪氨酸激酶受體結(jié)合，具有促進血管生成的作用。研究表明，VEGF同樣可以促進神經(jīng)形成，有助于對神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞的保護，刺激軸突生長以及抑制凋亡。動物實驗表明，使用VEGF蛋白或者外源性VEGF基因轉(zhuǎn)染，均可以促進軸突更新，減輕二次損傷以及促進神經(jīng)功能恢復(fù)。目前嗅鞘細胞與VEGF聯(lián)合治療脊髓損傷未見報導(dǎo)。本研究中，我們使用表達VEGF基因的嗅鞘細胞治療脊髓損傷。該研究將是治療脊髓損傷一次非常有價值的嘗試。第一部分OECS的分離、培養(yǎng)和鑒定目的體外分離、培養(yǎng)，鑒定OECS。方法采用差速貼壁法和免疫抑制劑法，從乳鼠嗅球中獲得OECS。觀察其一般形態(tài)，并行免疫熒光鑒定。結(jié)果光鏡觀察見細胞具備典型的OECS形態(tài)學(xué)特征。免疫熒光結(jié)果顯示OECS陽性表達GFAP，P75NFGR，細胞純度大于90％。結(jié)論分離培養(yǎng)出OECS，形態(tài)學(xué)和免疫表型符合OECS標(biāo)準(zhǔn)第二部分慢病毒載體PLVXIRESNEOVEGF165的構(gòu)建及包裝，分泌VEGF的OECS建立。目的構(gòu)建表達VEGF的慢病毒載體，并進行包裝、鑒定、純化及滴度測定。觀察慢病毒感染OECS的效率，檢測目的基因的表達。方法通過PCR獲得VEGF165基因，酶切后鑒定。再通過雙酶切后的連接反應(yīng)，構(gòu)建出慢病毒載體PLVXIRESNEOVEGF165。PLVXIRESNEOVEGF165轉(zhuǎn)染HEK293細胞。病毒液用氯化銫法進行純化，倍比稀釋法測病毒滴度。使用不同感染復(fù)數(shù)MOI感染OECS，熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率。RTPCR檢測VEGF基因表達。VEGF相對表達水平比較采用單因素方差分析ONEWAYANOVA，組間的多重比較采用LSD檢驗。WESTERNBOLT法檢測VEGF蛋白表達。數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±SD）表示。統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS130軟件，P＜005認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果測序證明，慢病毒載體PLVXIRESNEOVEGF165成功構(gòu)建，倍比稀釋法檢測病毒滴度達到108PFUML。RTPCR和WESTERNBOLT法證實OECSVEGF表達VEGF基因和蛋白。結(jié)論利用PCR方法成功獲取了目的基因VEGF165。成功構(gòu)建了重組慢病毒表達載體PLVXIRESNEOVEGF165，并在HEK293細胞完成包裝。感染后的OECS可表達VEGF基因和蛋白。第三部分慢病毒介導(dǎo)VEGF165基因修飾的嗅鞘細胞移植治療大鼠脊髓損傷目的以慢病毒介導(dǎo)的VEGF165基因修飾的嗅鞘細胞移植治療大鼠脊髓半橫斷損傷，觀察其療效。方法構(gòu)建大鼠脊髓半橫斷損傷模型。動物隨機分為PBS移植組，OECS移植組，OECSVEGF移植組。損傷7天后，分別將PBS，OECS以及OECSVEGF移植于脊髓損傷處。細胞組在移植前，行HOECHST33342標(biāo)記。在SCI前及損傷后24H、1W、2W、3W、4W、5W、6W進行BBB評分評價運動功能恢復(fù)情況。移植后7天，酶聯(lián)免疫吸附測定ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAYELISA法檢測各組體內(nèi)VEGF蛋白表達。移植后5W，免疫熒光法檢測移植細胞在體內(nèi)的存活、5HT神經(jīng)纖維數(shù)量，HE染色方法檢測脊髓空洞體積，WESTERBOLT法檢測體內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白表達。體內(nèi)VEGF蛋白水平，5HT神經(jīng)纖維數(shù)量，脊髓空洞體積檢測結(jié)果比較采用單因素方差分析ONEWAYANOVA，組間多重比較采用LSD法。各個時間點的BBB評分比較，采用重復(fù)測量方差分析REPEATMEASUREANOVA，組間多重比較采用LSD法。數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±SD）。用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS130對數(shù)據(jù)進行處理，以P＜005認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果SCI后1周以內(nèi)，各組BBB評分無統(tǒng)計學(xué)差異，第2周至第6周，OECSVEGF組與PBS組相比，BBB評分出現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異P＜001第3周至第6周，OECS組與PBS組比較，BBB評分有統(tǒng)計學(xué)差異P＜001第3周至第6周，OECS組和OECSVEGF組相比，BBB評分有統(tǒng)計學(xué)差異P＜001。細胞移植后1周脊髓組織中VEGF含量，PBS組534±166PGMG，OECS組1136±146PGMG，OECSVEGF組10887±2233PGMG。三組間均存在顯著差異P＜0001。LSD法行組問比較發(fā)現(xiàn)，OECSVEGF組VEGF蛋白水平顯著高于另兩組的VEGF蛋白水平。5HT神經(jīng)纖維數(shù)量，PBS組871±035％OECS組1743±066％OECSVEGF組2850±063％F組問275474P00001三組間均存在顯著差異P＜005。LSD法行組間比較發(fā)現(xiàn)，OECSVEGF組VEGF蛋白水平顯著高于另兩組的VEGF蛋白水平P＜005。HE染色檢測脊髓空洞體積，PBS組1818±039OECS組1398±066OECSVEGF組941±061F組問224454P00001三組間均存在顯著差異P＜005。LSD法行組間比較發(fā)現(xiàn)，OECSVEGF組脊髓空洞體積百分比顯著低于另兩組的脊髓空洞體積百分比P＜005。WESTERNBLOT檢測了凋亡相關(guān)蛋白，OECSVEGF組與PBS組，OECS組相比，CASPASE3蛋白表達降低，BCL2蛋白表達升高。結(jié)論以O(shè)ECSVEGF基因工程細胞移植治療SCI，顯著提高了脊髓組織內(nèi)VEGF的表達量，減少脊髓空洞體積百分比，促進了SCI后大鼠的功能學(xué)恢復(fù)。其機制包括表達VEGF的OEC基因工程細胞，促進神經(jīng)軸突的存活，抑制細胞凋亡。

簡介：目的通過調(diào)查研究了解湖南省湖南省感染科和肝病科等相關(guān)醫(yī)務(wù)人員對區(qū)域性慢性肝病數(shù)據(jù)庫的認(rèn)知情況及區(qū)域性慢性肝病數(shù)據(jù)庫在實施中存在的問題，并探討影響湖南省感染科和肝病科的醫(yī)務(wù)人員對慢性肝病數(shù)據(jù)庫了解程度的影響因素，為進行患者信息化管理及加快我國在區(qū)域性慢性肝病數(shù)據(jù)庫的信息化建設(shè)和發(fā)展進程提供科學(xué)的參考依據(jù)。方法本研究以2013年5月2013年9月在湖南省的傳染病學(xué)會年會及湖南省8家三級醫(yī)院和15家二級醫(yī)院選擇感染科和肝病科的醫(yī)務(wù)人員以及該院的相關(guān)領(lǐng)導(dǎo)和其他醫(yī)技人員等作為研究對象，采用自編問卷對湖南省各個地市的二級和三級醫(yī)院感染科和肝病科的醫(yī)務(wù)人員進行問卷調(diào)查。研究內(nèi)容包括湖南省感染科和肝病科的醫(yī)務(wù)人員的社會人口學(xué)特征、慢性肝病數(shù)據(jù)庫的應(yīng)用現(xiàn)狀、醫(yī)務(wù)人員對區(qū)域性慢性肝病數(shù)據(jù)庫的認(rèn)知程度、面臨的困難和需要的支持等情況。結(jié)果本研究調(diào)查的362例醫(yī)務(wù)人員中，只有1例醫(yī)務(wù)人員有接觸過此類?？撇±畔⑾到y(tǒng)，占028％。5912％的醫(yī)務(wù)人員對區(qū)域性慢性肝病數(shù)據(jù)庫有一定程度的了解，從網(wǎng)絡(luò)或者是學(xué)術(shù)會議及學(xué)術(shù)論文是感染科和肝病科的醫(yī)務(wù)人員對區(qū)域性慢性肝病數(shù)據(jù)庫最主要的了解渠道，占514％。三級醫(yī)院和二級醫(yī)院在對區(qū)域性慢性肝病數(shù)據(jù)庫的了解程度，了解渠道，對區(qū)域性慢性肝病數(shù)據(jù)庫需求情況、對臨床工作的幫助、提高工作效率、指導(dǎo)科研和教學(xué)、患者隱私信息的保護、資源共享的意愿方面認(rèn)識的差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。不同年齡組的醫(yī)務(wù)人員對區(qū)域性慢性肝病數(shù)據(jù)庫需求情況、對臨床工作的幫助、指導(dǎo)科研和教學(xué)、患者隱私信息的保護、資源共享的意愿的認(rèn)識方面認(rèn)識的差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。不同學(xué)歷的醫(yī)務(wù)人員對區(qū)域性慢性肝病數(shù)據(jù)庫需求情況、對臨床工作的幫助、指導(dǎo)科研和教學(xué)、患者隱私信息的保護、資源共享的意愿的認(rèn)識方面認(rèn)識的差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。不同職稱的醫(yī)務(wù)人員對區(qū)域性慢性肝病數(shù)據(jù)庫需求情況、對臨床工作的幫助、提高工作效率、指導(dǎo)科研和教學(xué)、患者隱私信息的保護、資源共享的意愿的認(rèn)識方面認(rèn)識的差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。單因素分析結(jié)果顯示，以下因素對醫(yī)務(wù)人員對慢性肝病數(shù)據(jù)庫了解程度的等級構(gòu)成的差異有統(tǒng)計學(xué)意義醫(yī)院的級別年齡崗位類別學(xué)歷職稱從事肝病診療相關(guān)工作的時間P＜005。多因素DINAL回歸分析結(jié)果顯示，影響醫(yī)務(wù)人員對慢性肝病數(shù)據(jù)庫了解程度的因素有學(xué)歷、職稱、從事肝病診療相關(guān)工作的時間。學(xué)歷越高、職稱級別越高以及從事肝病診療相關(guān)工作的時間越長的醫(yī)務(wù)人員對慢性肝病數(shù)據(jù)庫了解程度越高。結(jié)論湖南省尚無區(qū)域性慢性肝病數(shù)據(jù)庫的應(yīng)用，5912％的醫(yī)務(wù)人員對區(qū)域性慢性肝病數(shù)據(jù)庫有一定程度的了解。學(xué)歷越高、職稱級別越高以及從事肝病診療相關(guān)工作的時間越長的醫(yī)務(wù)人員對慢性肝病數(shù)據(jù)庫了解程度越高。

簡介：登革熱是由登革病毒（DENV）引起的一種急性傳染病，是全球熱帶及亞熱帶地區(qū)主要的公共衛(wèi)生問題，對人類健康和公共衛(wèi)生安全構(gòu)成了重要威脅。登革熱需要借助實驗室診斷才能確診，通過RTPCR方法檢測DENVRNA，是一種快速、敏感、特異的實驗室診斷方法，其常用的檢測標(biāo)本為血標(biāo)本，但存在病毒血癥期短，采集血標(biāo)本有創(chuàng)、不方便等缺點，尿液較血標(biāo)本有經(jīng)濟、方便、安全無創(chuàng)等優(yōu)點，尿液中DENVRNA檢測能否用于登革熱的確診國外研究很少，國內(nèi)尚無研究。因此，明確尿液中DENVRNA檢測對登革熱確診的價值，對于提高登革熱的診治水平有重要意義。研究目的本研究擬建立一種通過尿液檢測DENVRNA的實驗室方法，并探討其臨床意義。對象1實驗組2013年811月廣州市第八人民醫(yī)院收治的57例登革熱住院病人，其中登革熱（DF）42例，重癥登革熱（SDF）15例。采集病人73份血漿和病程早中晚期的158份系列尿液標(biāo)本開展實驗研究。1157例登革熱病人平均年齡為375歲（774歲）。男性有35例，女性有22例。1273份血漿對應(yīng)51例登革熱病人（人均12份），在病程早期（發(fā)病15天）、病程中期（發(fā)病69天）和病程晚期（發(fā)病1014天）分別有35份，33份，5份血漿；還有6例病人未采集到血漿。13158份尿液對應(yīng)57例登革熱病人（人均23份），在病程早期、中期和晚期分別有56份、76份和26份尿液。2對照組包括非登革熱病人組和健康人組各10例，每人各有1份尿液標(biāo)本，共20份。非登革熱病人組包括艾滋病病人組5例，乙肝病人組5例。方法1確診登革熱患者查閱病歷資料，對57例登革熱病人的臨床表現(xiàn)及病原學(xué)檢測結(jié)果進行匯總，依據(jù)2009年WHO頒布的登革熱診斷、治療以及防控指南，可判斷57例登革熱病人均達到實驗室確診標(biāo)準(zhǔn)，并可區(qū)分DF患者和SDF患者。2標(biāo)本的收集與保存21采集尿液，每份留取510ML，在2H內(nèi)以2000轉(zhuǎn)分離心10MIN，取上清液分裝至15ML微量離心管中，80℃冰箱中保存，避免反復(fù)凍融；22采集新鮮抗凝血5ML，迅速分離血漿，分裝至15ML微量離心管中，80℃冰箱中保存。3采用ELISA檢測血漿中抗DENVIGM和IGG抗體使用澳大利亞PANBIO公司生產(chǎn)的PANBIODENGUEIGMCAPTUREELISA試劑盒和PANBIODENGUEIGGCAPTUREELISA試劑盒，分別檢測登革熱病人急性期血漿中的抗DENVIGM和IGG抗體。4登革熱病人初次感染和二次感染的判斷若抗DENVIGM陽性同時抗DENVIGG陰性，可判斷為初次感染；若抗DENVIGG陽性，且標(biāo)本采集的時間處于發(fā)熱期，無論抗DENVIGM結(jié)果如何，可判斷為二次感染。5采用RTPCR方法檢測尿液和血漿中DENVRNA將一管尿液標(biāo)本從80℃冰箱取出，室溫溶解后混勻，用1ML移液器取出200UL尿液標(biāo)本至無菌微量離心管中，依照達安核酸提取試劑盒和達安RTPCR試劑盒操作步驟，制備RTPCR反應(yīng)體系，再用7500FASTREALTIMEPCRSYSTEM（美國ABI公司）擴增登革病毒核酸特異片段，依據(jù)擴增曲線和CT值，判定出陰陽性結(jié)果。血漿中DENVRNA檢測需要標(biāo)本量、試劑盒及操作步驟，與尿液中DENVRNA檢測相同。6腎損害的評估方法通過國內(nèi)公認(rèn)的結(jié)合患者的性別、年齡、血肌酐、白蛋白、血尿素氮等幾個指標(biāo)，并根據(jù)中國人的飲食校正專用軟件，計算內(nèi)生肌酐清除率，當(dāng)內(nèi)生肌酐清除率小于或等于70MLMIN，可判斷存在腎損害。7統(tǒng)計學(xué)方法SPSS130軟件，PEARSON卡方檢驗，連續(xù)性校正法，F(xiàn)ISHER確切概率法。P值小于005有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)果1血漿中抗DENVIGM和抗DENVIGG檢測結(jié)果抗DENVIGM陽性的有51例，抗DENVIGG陽性的有8例。2初次感染和二次感染的判斷結(jié)果初次感染病人有43例，二次感染病人有8例。余6例病人沒有收集到血漿，無法判斷初次感染和二次感染。3尿液中DENVRNA檢測結(jié)果31尿液中DENVRNA檢測陽性率57例登革熱病人行尿液DENVRNA檢測，40例病人出現(xiàn)陽性，陽性率為702％。對照組20份尿液中DENVRNA檢測結(jié)果均為陰性。32不同發(fā)病天數(shù)尿液中DENVRNA檢測結(jié)果發(fā)病第1天，尿液中DENVRNA檢測陽性率為0（N00）；發(fā)病第2天，尿液中DENVRNA檢測陽性率為0（N00）；發(fā)病第3天，尿液中DENVRNA檢測陽性率為60（N35）；發(fā)病第4天，尿液中DENVRNA檢測陽性率為56（N1018）；發(fā)病第5天，尿液中DENVRNA檢測陽性率為61（N1931）；發(fā)病第6天，尿液中DENVRNA檢測陽性率為50（N1224）；發(fā)病第7天，尿液中DENVRNA檢測陽性率為80（N1620）；發(fā)病第8天，尿液中DENVRNA檢測陽性率為67（N1421）；發(fā)病第9天，尿液中DENVRNA檢測陽性率為45（N511）；發(fā)病第10天，尿液中DENVRNA檢測陽性率為67（N69）；發(fā)病第11天，尿液中DENVRNA檢測陽性率為29（N27）；發(fā)病第12天，尿液中DENVRNA檢測陽性率為67（N46）；發(fā)病第13天，尿液中DENVRNA檢測陽性率為0（N02）；發(fā)病第14天，尿液中DENVRNA檢測陽性率為50（N12）。結(jié)果顯示，最早在發(fā)病第3天能檢測到病毒核酸，最長發(fā)病第14天能檢測到。除了發(fā)病第9天、第11天和第13天外，尿液中DENVRNA檢測陽性率均高于50。其中在發(fā)病第78天尿液中DENVRNA檢測陽性率最高，為732（N3041）。33病程早中晚期尿液中DENVRNA檢測結(jié)果在病程早期、中期和晚期，尿液中DENVRNA檢測陽性率分別為571、618和50。結(jié)果顯示在病程中期尿液中DENVRNA檢測陽性率較高。4尿液與血漿中DENVRNA檢測結(jié)果對比41尿液與血漿中DENVRNA檢測陽性率比較血漿中DENVRNA檢測陽性率為961（N4951），尿液中DENVRNA檢測陽性率為702（N4057），P值等于0000（PEARSON卡方檢驗），統(tǒng)計學(xué)有顯著差異，結(jié)果顯示尿液中DENVRNA檢測陽性率較血漿低。還有6例未采集到血漿標(biāo)本的病人，尿液中DENVRNA檢測均為陽性，結(jié)果顯示尿液中DENVRNA檢測可以作為一種實驗室診斷方法的補充。42不同時段尿液與血漿中DENVRNA檢測結(jié)果比較421血漿與尿液中最長分別在發(fā)病第12天、第14天檢測出DENVRNA。422在病程早期，血漿中DENVRNA檢測陽性率（100）高于尿液（571），兩者比較，P值等于0000（PEARSON卡方檢驗），有統(tǒng)計學(xué)差異。在病程中期，發(fā)病第7天尿液中DENVRNA檢測陽性率高于血漿。在病程晚期，未收集到血漿標(biāo)本的前提下，尿液中DENVRNA檢測可作為確診的手段。43血漿陰性病人尿液中可檢測到DENVRNA有1例血漿中DENVRNA檢測陰性的病人，尿液中DENVRNA檢測陽性。有1例病人在發(fā)病第12天，血漿中DENVRNA檢測陰性，而尿液中DENVRNA檢測陽性。5分析尿液中DENVRNA檢測陽性率的相關(guān)因素51DF和SDF與尿液中DENVRNA檢測陽性率關(guān)系DF和SDF患者，尿液中DENVRNA陽性率分別為762和533，兩者比較，P值等于0183，無統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)果顯示尿液中DENVRNA檢測陽性率與DF和SDF無關(guān)。52初次感染和二次感染與尿液中DENVRNA檢測陽性率的關(guān)系初次感染和二次感染的登革熱患者，尿液中DENVRNA檢測陽性率分別為674，75，兩者比較，P值等于0994，無統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)果顯示尿液中DENVRNA檢測陽性率與初次感染和二次感染無關(guān)。53腎損害與尿液中DENVRNA檢測陽性率的關(guān)系有腎損害的病人只有429出現(xiàn)尿液中DENVRNA檢測陽性，而尿液中DENVRNA檢測陽性的病人只有222存在腎損害。結(jié)果顯示尿液中DENVRNA檢測陽性率與腎損害無關(guān)。結(jié)論1登革熱患者尿液中可檢測出DENVRNA，在病程中期檢測陽性率最高。2用RTPCR方法檢測登革熱病人尿液中DENVRNA，是一種方便、經(jīng)濟、安全的實驗室診斷方法。

簡介：本文目的是建立一種應(yīng)用于臨床的風(fēng)疹病毒定量檢測方法；準(zhǔn)確反映體內(nèi)病毒復(fù)制情況，為探討病毒感染量與致病性關(guān)系，以及為臨床治療提供科學(xué)依據(jù)。方法利用RTPCR方法擴增并回收RVBR1株包膜糖蛋白E1的基因片段，將其與PMD18T載體連接，經(jīng)氨芐青霉素篩選、酶切鑒定，以獲得RVE1蛋白基因的克隆質(zhì)粒。將此質(zhì)粒用752分光光度儀定量，做對數(shù)關(guān)系稀釋；以FAM作為熒光指示劑，進行實時定量聚合酶鏈反應(yīng)REALTIMEPCR。以不同對數(shù)關(guān)系的稀釋濃度和相應(yīng)的閾值循環(huán)數(shù)CT為相應(yīng)的X、Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后用我們所建立的方法檢測19例從臨床收集到的懷疑為風(fēng)疹病毒感染的患者血清標(biāo)本，并將檢測結(jié)果與經(jīng)典的ELISA方法進行比較。結(jié)果指出本課題所建立的REALTIMEPCR方法能較好地檢測出血清中風(fēng)疹病毒的載量，代表了臨床基因檢測技術(shù)的最新發(fā)展趨勢，具有較強的敏感性和特異性，且由電腦分析數(shù)據(jù)，結(jié)果客觀，易于判斷，因此有望取代血清學(xué)技術(shù)，成為風(fēng)疹病毒定量檢測的標(biāo)準(zhǔn)方法。

簡介：南華大學(xué)碩士學(xué)位論文SURVIVIN與高危人乳頭瘤病毒DNA在喉癌組織中的表達及相關(guān)性研究姓名楊念念申請學(xué)位級別碩士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師王繼華20070501III二者在喉鱗癌中的表達有協(xié)同關(guān)系。結(jié)論結(jié)論一、SURVIVIN蛋白在喉的表達上調(diào)對于喉鱗癌的發(fā)生發(fā)展可能起著重要作用；二、HPV1618與喉鱗癌的發(fā)生密切相關(guān)但對腫瘤的生物學(xué)行為可能不起主要作用；三、在喉鱗癌中，HPV1618DNA與SURVIVIN表達呈正相關(guān)，存在協(xié)同作用。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞SURVIVIN高危型人乳頭瘤病毒喉鱗癌免疫組織化學(xué)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)

簡介：點擊查看更多含人極低密度脂蛋白受體基因的重組腺相關(guān)病毒的構(gòu)建.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的探討甲型流感病毒H3N2感染的子宮內(nèi)膜腺癌細胞系JEC的凋亡情況及機制；觀察干擾素Α2AIFNΑ2A在H3N2誘導(dǎo)JEC凋亡過程中對細胞增殖的影響。方法用不同濃度32、64、128、256UML的H3N2感染JEC，經(jīng)HE染色、瓊脂糖凝膠電泳以及流式細胞術(shù)等方法檢測細胞凋亡情況；采用四甲基偶氮唑藍MTT比色法觀察不同濃度001、01、1、10、100UM1IFNΑ2A在H3N2誘導(dǎo)JEC0H、1H和4H后對細胞增殖的影響同時以狗腎上皮細胞系MDCK作為陽性細胞對照；免疫細胞化學(xué)法檢測H3N2對JEC細胞FAS、FASL及TGFΒ表達的影響。結(jié)論甲型流感病毒H3N2能夠誘導(dǎo)JEC細胞發(fā)生凋亡，此作用與病毒濃度及感染時間有一定關(guān)系，其機制可能與FAS和TGFΒ的表達有關(guān)IFNΑ2A除了可抑制JEC和MDCK生長之外，還能促進H3N2感染初期JEC和MDCK的增殖。

簡介：中山大學(xué)碩士學(xué)位論文人乳頭瘤病毒16型L1E7CTL重組桿狀病毒載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染昆蟲細胞姓名胡榮欣申請學(xué)位級別碩士專業(yè)皮膚病與性病學(xué)指導(dǎo)教師高謙20060528人乳頭瘤病毒16型L1／E7CTL重組桿狀病毒載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染昆蟲細胞胞凋亡殺傷被感染的細胞，進而在清除病毒和阻止感染慢性化中起關(guān)鍵作用。研究發(fā)現(xiàn)，慢性HPV感染者外周血或局部組織中存在特異性CTL，這些CTL可以識別HPV編碼蛋白中一個或多個表位?；蛑亟M或人工合成的HPV蛋白多肽，可在體外刺激CTL，增強其溶解HPV感染的靶細胞。更重要的是，CTL可識別細胞內(nèi)表達的HPV抗原，并對這些表達抗原的細胞有溶解作用。因此，CTL在清除HPV感染中起重要作用。刺激產(chǎn)生CTL的方法很多，其中最常用的是誘導(dǎo)抗原呈遞細胞APC表達病毒抗原并與主要組織相容性復(fù)合物一同刺激OILS。大部分HPV相關(guān)的腫瘤僅表達E6年DE7，因此治療性疫苗的大部分工作都直接針對E6DE7抗原。但是以往的很多研究都是針對E7或E6的全基因片段進行的，但這必然會造成一些變異或可溶性的抗原多肽與CTL的表面受體結(jié)合，阻止CTL與被感染的HPV靶細胞發(fā)生反應(yīng)，或者與表位競爭結(jié)合靶細胞表面的MITCI類分子，使CTL不能最大程度地發(fā)揮殺傷功能。因此，如何解決這一問題，成為研制更加有效的治療性疫苗的關(guān)鍵。本實驗對如何產(chǎn)生更加有效的預(yù)防和治療性疫苗進行了探索性的研究。首先在以往研究的基礎(chǔ)上，利用LL蛋白在C端缺失數(shù)十個氨基酸仍可自行組裝這一特性，選取其M1一Q471的基因片段為目的基因一。目的基因的模板來源于HPVL6標(biāo)準(zhǔn)病毒株P(guān)HPVL6，采用分段PCR的方法擴增出LL序列的兩部分LLA和LIB，分別以限制性內(nèi)切酶SALI，BAMH年HXBAT，BAMHI雙酶切后逐一插入克隆載體PUTL9中，構(gòu)建出包含LL的克隆質(zhì)粒PHPVL6LL。同時選取能最為有效激活特異性CTL反應(yīng)的單一表位E74””的基因片段為目的基因二，并將其連接到片段一的下游區(qū)域，構(gòu)建融合基因。E7957的氨基酸序列為RAHYNIVTF，通過人工合成相應(yīng)的編碼核苷酸序列，并引入合適的酶切位點和翻譯終止信號。將目的基因二與克隆載體PUCL9連接后通過藍白斑篩選和測序鑒定確定陽性重組克隆PUCL9E7CTL。再將用SAL【和XBAI雙酶切獲得的LL序列克隆入PUCL9E7CTL中，獲得包含融合基因的重組質(zhì)粒PHPVL6L1／E7CTL，并通過酶切鑒定和測序確定融合基因的核酸序列與GENEBANK中的標(biāo)準(zhǔn)序列相比準(zhǔn)確無誤。其次，本實驗選用了利用轉(zhuǎn)座原理構(gòu)建的BACMID桿狀病毒一昆蟲細胞真核表達系統(tǒng)，這一系統(tǒng)具有操作簡便，費用低廉以及表達準(zhǔn)確等優(yōu)點。用SALI平NKPNI雙酶切后將上一步驟所得的融合基因LI／E7CTL再一次通過亞克隆的方法插入轉(zhuǎn)運質(zhì)粒PFASTBAC1中，獲得重組PFAST

簡介：分類號UDC密級編號中南大學(xué)CENTRALSOUTHUNIⅦRSITY碩士學(xué)位論文論文題目學(xué)科、專業(yè)研究生導(dǎo)師姓名及其專業(yè)技術(shù)職稱柯薩奇病毒B3對HELA細胞MTOR／P70S6K表達的調(diào)控作用兒科學(xué)成亮陳淳嬡教授中南大學(xué)二O一一年五月分類號UDC碩士學(xué)位論文II1LLIIIRLILLRLRRRILLLIT；Y1916623密級編碼柯薩奇病毒B3對HELA細胞MTOR／P70S6K表達的調(diào)控作用REGULATIONEFFECTSOFCVB3ONHELACELLMTOR／70S6KSIGNALPATHWAYEXPRESSION作者姓名成亮學(xué)科專業(yè)兒科學(xué)學(xué)院系、所中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院指導(dǎo)教師陳淳嬡教授敝答辯日期型答懶會主席華中南大學(xué)二O一一年五月

簡介：聚氨基酸材料由于可生物降解性低毒性等特點而被廣泛的作為非病毒性基因載體材料的研究其中研究較多的有聚賴氨酸聚天冬氨酸聚鳥氨酸聚谷氨酸等聚賴氨酸和聚鳥氨酸在生理條件下帶有正電荷可以通過靜電吸引結(jié)合DNA聚天冬氨酸具有酰亞胺環(huán)狀結(jié)構(gòu)可被堿性試劑開環(huán)而引入結(jié)合DNA的功能性側(cè)鏈根據(jù)共聚氨基酸酶識別位點多降解速度快的優(yōu)點通過磷酸催化的熱共聚反應(yīng)合成了一類新的以天冬氨酸和賴氨酸的共聚物為骨架的基因載體材料在這方面的同類研究目前還比較少DL天冬氨酸和L賴氨酸通過不同的比例在不同的條件下合成了一系列的聚DL天冬氨酸COL賴氨酸POLYDLASPARTICACIDCOLLYSINEPAL經(jīng)過HNMR、FTIR、XRAY、TGA方法確認(rèn)了結(jié)構(gòu)通過毛細管黏度法測量各個PAL聚合物的特性黏度PAL在堿性的氨基丙醇和乙二胺開環(huán)下合成ΑΒ聚N羥丙基氨乙基DL天冬酰胺COL賴氨酸ΑΒPOLYNHYDROXYPROPYLAMINOETHYLDLASPARTAECOLLYSINEPHAALPHAAL在磷酸緩沖液PH74001M和酶木瓜蛋白酶胰蛋白酶溶液中溫度在37±01℃條件下降解經(jīng)過GPC分析具有良好的降解能力在磷酸溶液中水解4天PHAAL的平均分子量降為原來的70﹪在木瓜蛋白酶溶液1MGML中降解12小時PHAAL的平均分子量下降了32﹪24小時內(nèi)完全降解而在胰蛋白酶溶液1MGML中12小時內(nèi)就完全降解了利用MTT方法測PHAAL在HELAECV304BCAP37細胞中的細胞毒性