簡介：目的比較慢性阻塞性肺疾病CHRONICOBSTRUCTIVEPULMONARYDISEASECOPD患者與正常人群的肺功能、動脈血氣、血清凝聚素水平以及海馬體積評估COPD患者的認(rèn)知功能以及海馬萎縮狀態(tài)分析與COPD患者認(rèn)知功能相關(guān)的影響因素。方法采用簡易精神智能評定量表MINIMENTALSTATEEXAMINATIONMMSE對25例輕中度COPD患者、30例重度COPD患者及25例健康體檢者進行認(rèn)知功能評定采用人凝聚素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試劑盒ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAYELISA測定血清凝聚素CLUSTERIN濃度采用30T超導(dǎo)磁共振成像系統(tǒng)進行左右雙側(cè)海馬體積的測定同時對所有受試者進行肺功能以及動脈血氣測定。結(jié)果輕中度COPD組、重度COPD組以及對照組的MMSE評分分別為2480±191、2283±278、2752±299左側(cè)海馬體積分別為243±028CM3、231±027CM3、362±040CM3右側(cè)海馬體積分別為256±032CM3、246±034CM3、375±046CM3雙側(cè)海馬總體積分別為498±048CM3、477±058CM3、737±082CM3血清凝聚素濃度分別為14840±1263ΜGML、16770±1924ΜGML、11930±1170ΜGML。與對照組相比輕中度組及重度COPD組患者MMSE評分均顯著減少均P005血清凝聚素濃度顯著升高P結(jié)論COPD患者存在明顯的認(rèn)知功能障礙與左、右側(cè)海馬體積的萎縮COPD患者認(rèn)知障礙程度與病情的嚴(yán)重程度以及血清凝聚素水平相關(guān)PAO2及FEV1是COPD患者認(rèn)知功能受損的重要影響因素。COPD導(dǎo)致的輕度認(rèn)知功能障礙MILDCOGNITIVEIMPAIRMENTMCI亦可能是阿爾茨海默病ALZHEIMER’SDISEASEAD的前期基礎(chǔ)疾病。

簡介：小兒肺炎是兒科的常見病，WHO已將該病列為全球三種重要的兒科疾病之一，我國也將其作為兒科重點防治的四種疾病之一。病毒性肺炎是小兒肺炎的常見類型，約占小兒肺炎總數(shù)的50％。呼吸道合胞病毒（RESPIRATYSYNCYTIALVIRAL，RSV）肺炎是小兒病毒性肺炎中最常見的類型，嚴(yán)重威脅著兒童的身體健康，目前西醫(yī)對于本病尚缺乏理想的治療方法和藥物，而運用中醫(yī)藥防治小兒病毒性肺炎具有較好的療效。導(dǎo)師汪受傳教授既往研究結(jié)果表明小兒病毒性肺炎的中醫(yī)證候分布有明顯差異，痰熱閉肺證最多，占總數(shù)的75％，其次為風(fēng)熱犯肺證（1625％）、肺脾氣虛證（312％）、風(fēng)寒襲肺證（292％）、陰虛肺熱證（271％），其中痰熱閉肺證、風(fēng)熱閉肺證是較為常見的證型，故應(yīng)加強對痰熱閉肺證、風(fēng)熱閉肺證的臨床研究。2005年1月至2007年2月，根據(jù)“‘十五’國家科技攻關(guān)計劃項目中醫(yī)藥療效評價方法研究中醫(yī)藥治療病毒性肺炎療效評價方法研究”課題（任務(wù)書編號2004BA716803）的要求，遵循區(qū)組隨機、平行對照、多中心試驗的原則，在南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院、首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京兒童醫(yī)院、天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院、河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院及廣東省中醫(yī)院，對中醫(yī)藥治療小兒RSV肺炎痰熱閉肺證的有效性和安全性進行了研究，共系統(tǒng)觀察病例297例，其中風(fēng)熱閉肺證91例，痰熱閉肺證206例。目的1客觀評價中醫(yī)藥治療小兒RSV肺炎風(fēng)熱閉肺證、痰熱閉肺證的臨床療效。2比較中、西醫(yī)治療方案在小兒RSV肺炎風(fēng)熱閉肺證、痰熱閉肺證治療中的安全性。3進一步探討疾病療效評價方法，建立新的、更為客觀的，且能顯示中醫(yī)藥治療本病優(yōu)勢和特色的療效評價方法。方法1采用多中心、區(qū)組隨機、平行對照的方法，對297例風(fēng)熱閉肺證、痰熱閉肺證RSV肺炎患兒進行臨床研究，試驗組靜滴清開靈注射液，痰熱閉肺證同時口服兒童清肺口服液、風(fēng)熱閉肺證同時口服小兒咳喘靈口服液；對照組靜滴利巴韋林注射液，同時口服復(fù)方愈創(chuàng)木酚磺酸鉀口服液（傷風(fēng)止咳糖漿），療程均為10天。2觀察主癥（發(fā)熱、咳嗽、痰壅、氣促）、次癥（惡寒、紫紺、心率異常、口渴）、舌象及肺部噦音等治療不同時點、X線全胸片、血氧飽和度、淋巴細(xì)胞亞群（CD3、CD4、CD8、CD1CD8）、RSV病原學(xué)檢測治療前后的變化。對兩組患兒的疾病、證候綜合療效進行評價，對兩組治療前后主癥積分和的差值進行比較，對兩組主癥終點積分和進行比較，對兩組主癥恢復(fù)正常率做生存分析，即對兩組主癥在25％、50％、75％的患兒恢復(fù)正常時所需的天數(shù)進行比較。3采用SAS91軟件、SPSS120軟件對結(jié)果進行統(tǒng)計分析，包括卡方檢驗、T檢驗、秩和檢驗、符號秩檢驗、有序LOGISTIC回歸、混合效應(yīng)模型、生存分析等。結(jié)果1兩組疾病綜合療效評價的結(jié)果顯示風(fēng)熱閉肺證愈顯率試驗組9500％、對照組8431％，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P005）；痰熱閉肺證愈顯率試驗組8889％、對照組8062％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P005）；痰熱閉肺證愈顯率試驗組9167％、對照組6429％，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P005）；痰熱閉肺證試驗組1、2級占7500％、對照組1、2級占4490％，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P0，05）；痰熱閉肺證兩組在發(fā)熱、咳嗽、痰壅、肺部啰音消失的起效時間上比較，試驗組起效時間均顯著早于對照組，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P001）。5兩組安全性評價結(jié)果顯示試驗組明顯優(yōu)于對照組（P001）。6疾病療效評價方法應(yīng)包括基于終點主癥變化情況的療效評價方法、基于終點主癥積分和減少的療效評價方法及新的、基于主癥起效時間的療效評價方法。結(jié)論1中醫(yī)藥治療小兒RSV肺炎療效顯著，尤其表現(xiàn)在痰熱閉肺證上。2清開靈注射液和兒童清肺口服液聯(lián)合應(yīng)用是治療小兒RSV肺炎痰熱閉肺證的有效方案，該方案的確立為指導(dǎo)中醫(yī)藥治療小兒RSV肺炎痰熱閉肺證提供了依據(jù)，可產(chǎn)生可觀的社會和經(jīng)濟效益。3清開靈注射液和小兒咳喘靈口服液聯(lián)合應(yīng)用對風(fēng)熱閉肺證有效，但尚不能確定其為中藥治療本證的最佳方案，應(yīng)進一步加強對風(fēng)熱閉肺證的研究。4以主癥起效時間對疾病療效進行動態(tài)評價即生存分析，可以建立新的更為客觀且能顯示中醫(yī)藥治療本病優(yōu)勢的療效評價方法。

簡介：南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文EB病毒潛伏膜蛋白2A（LMP2A）重組腺病毒轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞治療小鼠移植瘤模型的研究姓名孫華申請學(xué)位級別碩士專業(yè)微生物指導(dǎo)教師姚堃20040420一一童室墾型叁堂墮主蘭壁堡塞MRNAMESSAGERNA信使RNAM中MACROPHAGE巨噬細(xì)胞NKNATURALKILLING自然殺傷NPCNASOPHARYNGEALCARCINOMA鼻咽癌ODOPTICALDENSITY光密度PBMCPERIPHERALBLOODMONONUCLEARCELL外周血單個核細(xì)胞PBSPHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸緩沖液PCRPOLYMERASECHAINREACTION聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RNASERIBONUCLEASERNA酶RPMROLLSPERMINUTE每RAIN轉(zhuǎn)速RTPCRREVERSETRANSCRIPTPCR逆轉(zhuǎn)錄PCRSISTIMULATIONINDEX刺激指數(shù)TAATUMORASSOCIATEDANTIGEN腫瘤相關(guān)抗原TSATUMORSPECIFICANTIGEN腫瘤特異性抗原TCRTCELLRECEPTORT細(xì)胞抗原受體THHELPTCELL輔助性T細(xì)胞TNFTUMORNECROSISFACTOR腫瘤壞死因子3

簡介：安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文分娩鎮(zhèn)痛認(rèn)知及硬膜外分娩鎮(zhèn)痛對母嬰近期影響研究姓名鄧國支申請學(xué)位級別碩士專業(yè)流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計學(xué)指導(dǎo)教師倪進發(fā)200151窒竺墾壁查堂壁主蘭堡堡查ASTUDYOFKNOWLEDGEOFLABORANALGESIAANDEFFECTONMATERNALANDNEONATALWITHORWITHOUTEPIDURALLABORANALGESIABSTRACTOBJECTIVO①T0INVESTIGATETHEKNOWLEDGEANDDESIREOFLABORANALGESIAANDTHEINFLUENCING觸ORSAMONGPRIMIPARAE螢TOINVESTIGATEPOSSIBLEEFFECTONLABORCOURSEANDNEONATALBEHAVIORALNEUROLOGICALASSESSMENTFNBNAWITHORWITHOUT印IDLLRAIANALGESIAFORPAINRELIEFINLABORILETJYXLS①ASMⅣEYON572PARTURIENTWOMENWITHQUESTIONNAIRESINMAANSHANCITY②APROSPECTIVERANDOMIZEDSTUDYINVOLVING241，TERMNULLIPAROUSWOMENWEREENROLLEDLUMBAREPIDURALANALGESIAWASSTARTEDATCERVICALDILATATION34CMBYUSING012％BUPIVACAINEFENTANYL4UG／M1INJECTIONGIVENACCORDINGTOACQUIREDRESUITS①54720／OFPREGNANTWOMENHAVETHEKNOWLEDGEOFLABORANALGESIAAND4720％HAVETHEDESIREIN572PARTURIENTWOMEN②COMPAREDTHELIGHTBURDENONDELIVERYANDLABORPALMTHEPREGNANTWOMENHAVEAHIGHERPROPORTIONOFDESIREONLABORANALGESIA③INTHESTUDYGROUP，THELENGTHOFTHEFIRSTANDSECONDSTAGEPROLONGED，THERATEOFOX”O(jiān)DNADMINISTRATIONINCREASEDCONSIDERABLYCESAREANANDINSTRUMENTALVAGINALDELIVERYRATES，NEONATALOUTCOMES，WERESIMILARINTWOGROUPS，THESCORESOFACTIVEMUSCLESTONEANDPRIMARYREFLEXESDECR髓SED，WHILEPASSIVEMUSCLETONEANDGENERALASSESSMENTINCREASEDPONEIUSION￡THEOPPORTUNITYMATERNALRECEIVEDEDUCATIONFROMOBSTETRICIANANDMIDWIFEAFFECTEDTHEINCIDENTSINKNOWLEDGEANDDESIREOFLABORANALGESIA；THEOTHERIMPORTANTFACTORISBURDENONDELIVERYPROCESSANDDELIVERYPAIN②THEEPIDURALLABORANALGESIAMETHODOFO12％BUPIVACAINEFENTANYL4UG／MLINJECTIONINTOEPIDURALSPACE2

簡介：目的腺病毒ADEASY系統(tǒng)是一種利用原核細(xì)胞完成重組穿梭質(zhì)粒與腺病毒骨架質(zhì)粒之間的同源重組快速構(gòu)建重組腺病毒的好方法我們將其中的某些步驟進行了改進以獲得一種更加高效、簡便、快速構(gòu)建重組腺病毒的方法方法我們將腺病毒骨架載體PADEASY1通過電穿孔法轉(zhuǎn)化ECOLIBJ5183感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)抗性篩選、酶切鑒定獲得含PADEASY1的ECOLIBJ5183P菌種并鑒定其穩(wěn)定性隨后用CACL法制備ECOLIBJ5183P感受態(tài)細(xì)胞并轉(zhuǎn)化含GFP的腺病毒穿梭質(zhì)粒利用ECOLIBJ5183細(xì)胞內(nèi)同源重組機制獲得重組腺病毒質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定并確定重組的位置與常規(guī)的共轉(zhuǎn)化方法相比較了解這種方法的重組效率將鑒定正確的重組腺病毒質(zhì)粒進一步轉(zhuǎn)化ECOLIDH10B感受態(tài)細(xì)胞獲得高拷貝的重組質(zhì)粒以PACI酶切獲得重組腺病毒DNA分子脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染293細(xì)胞產(chǎn)生基因組結(jié)構(gòu)均一的重組腺病毒感染原代血吸蟲細(xì)胞進行腺病毒嗜性的初步研究結(jié)論改進后的方法構(gòu)建重組腺病毒更加簡便重組效率較原方法提高可在國內(nèi)普通的分子生物學(xué)和病毒學(xué)實驗室內(nèi)完成構(gòu)建工作

簡介：登革病毒DENGUERIVUS，DENV屬于黃病毒科FLAVIVIRADE黃病毒屬FLAVIVIRUS，由其感染所引起的疾病包括登革熱DENGUEFEVER，DF，登革出血熱DENGUEHEMRHAGICFEVER，DHF和登革休克綜合癥DENGUESHOCKSYNDROME，DSS。嚴(yán)重的登革出血熱（登革出血熱和登革休克綜合癥），20世紀(jì)50年代在菲律賓和泰國登革熱流行期間被首次確認(rèn)1。截止至2012年11月WHO報告，近幾十年來，世界各地的登革熱發(fā)病率大幅增長。世界上二分之一的人口，非洲，美洲，東地中海，東南亞和西太平洋地區(qū)超過100個國家處于登革熱流行的威脅中，2008年，美洲、東南亞和西太平洋地區(qū)的國家登革熱病毒感染報告病例數(shù)120萬，而到2010年，報告病例數(shù)上升至230萬，最近報告病例仍在持續(xù)增加。登革熱不僅發(fā)病率和病死率呈上升趨勢，而且暴發(fā)疫情的地區(qū)也呈擴大化的趨勢，以前從未發(fā)現(xiàn)過登革熱疫情的國家遭受登革病毒的威脅34。登革熱在2012年被WHO列為傳播速度最快的媒介傳播病毒性疾病，它具有在世界上出現(xiàn)流行的可能性。全世界需要改變應(yīng)對方式，并實施可持續(xù)性預(yù)防措施。登革熱成為全球關(guān)注的熱點。目前控制登革熱的方法主要是用化學(xué)方法控制傳播媒介，這種方法對登革病毒的預(yù)防和控制發(fā)揮了舉足輕重的作用。然而，隨著殺蟲劑等化學(xué)制劑的廣泛應(yīng)用，這種方法亦產(chǎn)生許多的負(fù)面影響蚊蟲產(chǎn)生抗藥基因，破壞環(huán)境化學(xué)制劑殘留于環(huán)境中。同時，由于熱帶和亞熱帶地區(qū)城市化進程加快以及國際間交流的增加導(dǎo)致白紋伊蚊活動范圍擴大57，登革病毒的疫區(qū)產(chǎn)生擴大化趨勢。因而，有學(xué)者指出，應(yīng)對登革病毒傳播需要有效的新策略。如加緊致力于新型有效疫苗的研發(fā)，通過基因修飾或操縱傳播媒介等。通過基因修飾傳播媒介，改變病毒感染的宿主易感性，從而達到媒介中病毒復(fù)制的降低或消除，這種方法稱為源于病原體的抵抗PATHOGENDERIVEDRESISTANCE，DPR89。DPR最早在植物中發(fā)現(xiàn)，合成的煙草花葉病毒外殼蛋白在轉(zhuǎn)基因植物中的表達有效地保護了植物來自同源病毒的攻擊。這種現(xiàn)象后來被命名為RNA干擾效應(yīng)。RNA干擾是指一種分子生物學(xué)上由雙鏈RNA誘發(fā)的基因沉默現(xiàn)象，RNAI被發(fā)現(xiàn)廣泛存在于生物界，從低等原核生物、真菌、無脊椎動物、哺乳動物中也發(fā)現(xiàn)了此種現(xiàn)象。RNAI抗病毒的效應(yīng)已在多種媒介昆蟲中發(fā)現(xiàn)，RONALDPVANRIJ10等發(fā)現(xiàn)，黑腹果蠅中RNAI途徑中關(guān)鍵酶AGO2缺陷株體內(nèi)病毒RNA呈高水平累積VARGAS11等通過敲除RNAI途徑中的AGO2、DCR2和R2D2的表達后，能增加登革Ⅱ型病毒在埃及伊蚊體內(nèi)的復(fù)制。有研究者已開始利用RNAI干擾的技術(shù)修飾或改造媒介，使得媒介減少攜帶或者不攜帶病毒。ANTHONYKG等1214通過引入DSRNA已成功用于抑制西尼羅河病毒W(wǎng)NV、日本腦炎病毒（JEV）和黃熱病毒YFV的復(fù)制FRANZAW等1516經(jīng)短片段RNASHTINTERFERINGRNA，SIRNA改造的轉(zhuǎn)基因蚊有效地阻止病毒的感染和傳播ZHANG等17通過腺病毒載體轉(zhuǎn)染短發(fā)夾RNASHTHAIRPINRNA，SHRNA至哺乳動物細(xì)胞內(nèi)，對DENV2復(fù)制產(chǎn)生干擾效應(yīng)，抑制病毒的復(fù)制。RNAI有望成防控登革病毒感染的新策略。登革病毒的基因組為單股正鏈RNA分子，約含11000個堿基，具有單一的可讀框，編碼三種結(jié)構(gòu)蛋白和七種非結(jié)構(gòu)蛋白，其編碼基因順序為5CPRMENS1NS2ANS2BNS3NS4ANS4BNS53。其中PRM蛋白的切割被認(rèn)為是未成熟病毒顆粒向成熟病毒顆粒轉(zhuǎn)變的關(guān)鍵步驟，與病毒的裝配、成熟和維持病毒的感染性有關(guān)1819。因而，PRM被許多研究者選為觸發(fā)RNAI的效應(yīng)基因。成功介導(dǎo)RNAI還需穩(wěn)定高效的表達系統(tǒng)。質(zhì)粒作為載體導(dǎo)入效應(yīng)基因有以下優(yōu)點可以使用不同的選擇性標(biāo)志通過構(gòu)建可誘導(dǎo)的表達系統(tǒng)，可長期穩(wěn)定進行基因表達進行大規(guī)模基因篩選的成本低20。本研究利用能在多種哺乳動物細(xì)胞中高效表達的真核表達載PCDNA31，把登革Ⅱ型病毒前膜蛋白反向重復(fù)序列克隆到該表達載體，瞬時轉(zhuǎn)染至登革病毒易感性高的BHK21中初步探討干擾病毒復(fù)制的效果，半定量PCR和實時熒光定量PCR分析評價其抑制病毒復(fù)制的效果，為防控登革病毒感染的新策略提供一定的理論基礎(chǔ)。目的1構(gòu)建RNAI表達載體將登革Ⅱ型病毒前膜蛋白反向重復(fù)序列克隆至能在多種哺乳動物細(xì)胞中高效表達的真核表達載體PCDNA31中。2構(gòu)建重組質(zhì)粒PCDNAEGFP，轉(zhuǎn)染BHK21細(xì)胞，測定轉(zhuǎn)染效率。3轉(zhuǎn)染登革Ⅱ型病毒前膜蛋白基因反向重復(fù)序列至BHK21細(xì)胞，半定量PCR和實時熒光定量PCR評價重組質(zhì)粒抑制病毒復(fù)制的效果。方法1乳鼠內(nèi)接種登革Ⅱ型病毒，提取病毒TOTALRNA。2正義和反義引物兩端分別加上XHOⅠ和ECⅠ的識別位點，以提取的TOTALRNA為模板，經(jīng)RTPCR擴增的PRM全長基因片段插入PCDNA31中，形成含有PRM反向序列的重組質(zhì)粒PCDNAASPRM。3于另一對正義和反義引物兩端引入酶切位點NHEⅠ和BGLⅡ，經(jīng)RTPCR擴增PRM全長基因片段插入PMD18TVECT中，形成含有正向序列的重組質(zhì)粒PMD18TPRM。4限制性內(nèi)切酶NHEⅠ和KPNⅠ分別酶切重組質(zhì)粒PMD18TPRM和重組質(zhì)粒PCDNAASPRM，得到片段PRM和線性化載體PCDNAASPRM，連接構(gòu)建成含有PRM反向重復(fù)序列的重組質(zhì)粒PCDNAIRRNA。5擴增增強型熒光蛋白基因片段EGFP，克隆至PCDNA31，構(gòu)建重組質(zhì)粒PCDNAEGFP。6重組質(zhì)粒PCDNAEGFP轉(zhuǎn)染BHK21細(xì)胞，觀察轉(zhuǎn)染效率。7BHK21細(xì)胞繁殖登革Ⅱ型病毒，收集病毒液。8免疫熒光檢測登革病毒感染BHK21細(xì)胞。9TCID50方法測定收集的病毒液滴度。10篩選的陽性重組質(zhì)粒PCDNAIRRNA和空質(zhì)粒PCDNA31用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染至BHK21細(xì)胞中。11登革Ⅱ型病毒攻擊細(xì)胞，染毒后不同時間收集細(xì)胞TOTALRNA。12半定量PCR檢測NS3基因的表達，以評估病毒復(fù)制水平。13實時熒光定量PCR檢測細(xì)胞內(nèi)病毒載量，評估細(xì)胞內(nèi)病毒復(fù)制水平。14實時熒光定量PCR檢測NS1基因表達，評估病毒復(fù)制水平。結(jié)果1收集接種登革Ⅱ型病毒乳鼠鼠腦病毒液并提取病毒RNA。2RTPCR反應(yīng)擴增前膜蛋白全長基因，擴增產(chǎn)物經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳，可見單一條帶，擴增效果較好，其大小約600BP，與理論值基本相符，測序結(jié)果提交至NCBI進行比對，同源性達97％。3構(gòu)建的重組載體PMD18TPRM，PCDNAASPRM和含有PRM反向重復(fù)序列的重組質(zhì)粒PCDNAIRRNA，經(jīng)限制性內(nèi)切酶進行酶切均可見特異的酶切條帶。4成功擴增增強型熒光蛋白基因EGFP序列，經(jīng)測序證實重組質(zhì)粒PCDNAEGFP中的EGFPCDNA序列與質(zhì)粒PEGFPN質(zhì)粒GENEBLANKACCESSIONU55762中的EGFPCDNA序列一致，成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒PCDNAEGFP。5成功在本室建立登革Ⅱ型病毒感染BHK21細(xì)胞模型，收集病毒液經(jīng)TCID50測得的滴度為10648TCID5001ML。6重組質(zhì)粒PCDNAEGFP轉(zhuǎn)染BHK21后，在細(xì)胞內(nèi)有增強型熒光蛋白表達，并初步測定轉(zhuǎn)染率在24H、48H、72H和96H轉(zhuǎn)染率分別為363％、450％、316％和313％。7在不同時間點收集經(jīng)DENV2攻擊的實驗組、空白對照組和陽性對照組細(xì)胞中的RNA，半定量PCR檢測NS3MRNA的表達。擴增的NS3基因電泳帶存在明顯差異。GLYKOBSCAN分析NS3和內(nèi)參GAPDH灰度的比值，結(jié)果顯示，48HPI和60HPI，實驗組、空白對照組和陽性對照組的NS3MRNA表達量基本相同，在96HPI，實驗組和陽性對照組間MRNA表達量存在差異，實驗對照組的NS3表達水平比陽性對照組降低28％。8建立熒光定量PCR檢測DENV2的方法擴增NS1基因和內(nèi)參GAPDH，陽性擴增曲線整體平行性好，基線平坦，曲線光滑，拐點清楚，呈S形，重復(fù)性好收集的溶解曲線峰型單一，只有一個主峰。表明所采用的反應(yīng)體系和引物的擴增效率、特異性和模板的量都是合適的利用登革Ⅱ型病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白NS1基因，構(gòu)建了檢測登革Ⅱ型病毒的標(biāo)準(zhǔn)品，在標(biāo)準(zhǔn)曲線的基礎(chǔ)上，可以檢測出待測標(biāo)本中病毒的拷貝數(shù)。9在不同時間點收集經(jīng)DENV2攻擊的實驗組和陽性對照組BHK21細(xì)胞中的RNA，應(yīng)用FQPCR檢測細(xì)胞內(nèi)病毒載量的變化。結(jié)果顯示，在48HPI內(nèi)，實驗組和對照組細(xì)胞內(nèi)病毒載量變化不大，在72HPI，兩組細(xì)胞內(nèi)病毒載量達到峰值，但實驗組病毒量與對照組相比，病毒拷貝數(shù)少144倍。在96HPI，實驗組病毒載量比陽性對照組病毒載量降低267％。10在不同時間點收集經(jīng)DENV2攻擊的實驗組和陽性對照組BHK21細(xì)胞中的RNA，應(yīng)用FQPCR檢測細(xì)胞內(nèi)NS1表達水平的差異。歸一化值結(jié)果顯示病毒感染96H后，實驗組中NS1表達量與陽性對照組比較顯著降低P＜005，其余兩個時間點48H、60HNS1表達量的組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。結(jié)論成功克隆登革Ⅱ型病毒前膜蛋白反向重復(fù)序列的重組質(zhì)粒登革Ⅱ型病毒前膜蛋白基因反向重復(fù)序列具有干擾病毒復(fù)制的效果為登革病毒基因疫苗的研究提供理論依據(jù)。

簡介：博士學(xué)位論文中文摘要摘要腺病毒載體目前廣泛應(yīng)用于腫瘤基因治療的基礎(chǔ)研究和臨床試驗。近年來發(fā)展了一些新的載體構(gòu)建策略使其效應(yīng)獲得腫瘤選擇性，引入反向重復(fù)序列便是其中之一。EL基因刪除的腺病毒載體能選擇性地在腫瘤細(xì)胞中復(fù)制病毒DNA，在其目的基因兩側(cè)插入反向重復(fù)序列，當(dāng)病毒DNA在腫瘤細(xì)胞中復(fù)制時介導(dǎo)同源重組，激活目的基因，實現(xiàn)基因轉(zhuǎn)移的腫瘤選擇性。我們研究了根據(jù)這個策略構(gòu)建的載體ADLRBG在原發(fā)性肝癌和結(jié)腸轉(zhuǎn)移性肝癌實驗性治療中的效果。我們首先證實ADLRBG在體外能選擇性地在肝細(xì)胞癌SMMC7721MHCC97和結(jié)腸癌LOVOHT29細(xì)胞中表達報告基因AGAL，而在正常肝細(xì)胞WB中的表達水平極低。不含反向重復(fù)序列的腺病毒載體ADBG表達PGAL沒有選擇性。通過尾靜脈注射，ADLRBG能選擇性地在SMMC7721和LOVO裸鼠肝臟移植瘤內(nèi)表達卜GAL，腫瘤和瘤周肝表達比顯著高于ADBG。使用DNA合成抑制劑羚基脈能抑制ADLRBG感染的腫瘤細(xì)胞內(nèi)病毒DNA的重組及卜GAL的表達，而不影響ADBG的表達。這些結(jié)果說明ADLRBG表達目的基因依賴病毒DNA在腫瘤細(xì)胞內(nèi)復(fù)制和重組，非腫瘤細(xì)胞被其感染后無此過程，目的基因因此不表達，是選擇性表達的機制。我們進一步發(fā)現(xiàn)，ADIRBG還能選擇性在腫瘤細(xì)胞中產(chǎn)生溶瘤效應(yīng)ONCOLYSISAADLRBG感染的SMMC7721和LOVO細(xì)胞發(fā)生明顯的生長抑制和病理形態(tài)變化，利用“再感染”試驗和實時PCR，在其培養(yǎng)液中能檢測到具有感染性的病毒顆粒且數(shù)量呈指數(shù)增長，提示是病毒大量復(fù)制引起溶瘤。ADLRBG局部注射能抑制SNMC7721和LOVO肝臟移植瘤的生長，顯示直接的腫瘤殺傷作用，而ADBG無此作用。盡管ADLRBG感染的WB細(xì)胞內(nèi)也存在病毒DNA復(fù)制，卻檢測不到病毒顆粒，WESTERN印跡在ADLRBG感染的SMMC7721和LOVO細(xì)胞中能檢測到病毒衣殼蛋白，WB細(xì)胞則無。說明腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞對病毒衣殼蛋白合成的激活存在差別，可能是ADIRBG在腫瘤細(xì)胞中選擇性地復(fù)制的原因之一。引入反向重復(fù)序列的腺病毒載體ADJRBG除選擇性地在肝癌中表達目的基因外，還能在腫瘤細(xì)胞內(nèi)復(fù)制引起溶瘤效應(yīng)而產(chǎn)生直接殺傷作用，這是本研究的新發(fā)現(xiàn)。這種聯(lián)合基因轉(zhuǎn)移和溶瘤效應(yīng)并具有腫瘤選擇性的腺病毒載體可成為肝癌基因治療的新方向。關(guān)鍵詞肝癌，基因治療，腺病毒載體，治療靶向性博士學(xué)位論文中文詳細(xì)摘要中文詳細(xì)摘要肝癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等病理機制在分子和基因水平得到認(rèn)識和闡明，使基因治療成為最具前景的治療方式。各種不同策略的肝癌基因治療方案正在基礎(chǔ)研究和臨床試驗兩個層面展開，腺病毒載體由于其諸多優(yōu)點而成為肝癌基因治療最常用的載體。獲得腫瘤選擇性的治療效應(yīng)是腫瘤治療的一個重要原則。腺病毒載體用于肝癌治療的腫瘤選擇性問題有其特殊性。腺病毒載體能高效率地感染肝臟內(nèi)正常肝細(xì)胞，而肝癌細(xì)胞由于惡性表型丟失細(xì)胞表面CAR表達，攝取載體效率低。這使腺病毒載體難以在肝癌細(xì)胞中獲得高效率的治療效應(yīng)。設(shè)計和使用具有腫瘤選擇性的腺病毒載體成為有效治療的關(guān)鍵。目前使用腫瘤特異性的啟動子如AFP和CEA分別在原發(fā)性和結(jié)腸轉(zhuǎn)移性肝癌組織中獲得選擇性的表達或溶瘤，但表達效率，選擇性仍差。在腺病毒基因組中引入反向重復(fù)序列是獲得腺病毒載體腫瘤選擇性的新策略，被初步證明是有效的。本課題研究了引入反向重復(fù)序列的腺病毒載體在原發(fā)性和結(jié)腸轉(zhuǎn)移性肝癌中能否獲得腫瘤選擇性的治療效應(yīng)，并探討相關(guān)機制。第一部分載體的設(shè)計思路，構(gòu)建、擴增及鑒定引入反向重復(fù)序列使腺病毒載體產(chǎn)生腫瘤選擇性的基因表達，這個設(shè)計基于兩個發(fā)現(xiàn)。一是EIA刪除的腺病毒載體ADEL一能在腫瘤細(xì)胞中復(fù)制其DNA二是在腺病毒基因組中加入反向重復(fù)序列，病毒DNA在被感染細(xì)胞中可發(fā)生同源重組，產(chǎn)生新的雙鏈DNA形式。美國華盛頓大學(xué)的一個研究小組利用這兩個發(fā)現(xiàn)設(shè)計了新載體。以ADE1載體作為基本骨架，將目的基因反向置于啟動子下游并在其兩側(cè)插入反向重復(fù)序列，當(dāng)其在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制DNA時發(fā)生重組，產(chǎn)生的新的病毒DNA形式中目的基因被恢復(fù)為與啟動子同向而被表達。ADE1載體能在腫瘤細(xì)胞內(nèi)復(fù)制DNA，而在正常細(xì)胞中不復(fù)制，目的基因因此也獲得選擇性的表達。ADIRBG是根據(jù)上述設(shè)計思路構(gòu)建的引入反向重復(fù)序列的腺病毒載體。同時構(gòu)建了常規(guī)的ADE1一載體ADBG作為研究對照。兩者以RSV啟動子驅(qū)動目

簡介：Y784018中圖分類號R51262瀘糾壓學(xué)院研究生碩士學(xué)位論文針對HBVP基因的RNA干擾抑制乙型肝炎病毒研究導(dǎo)師姓名丞建堊熬援二OO五年五月可直接用于與制各好的目的基因的連接。將純化的雙鏈DNA片段定向克隆到經(jīng)SALI和XBAI雙酶切的真核表達質(zhì)粒PTZU61的多克隆位點，利用重組DNA技術(shù)構(gòu)建含HBVP區(qū)SIRNA的表達載體PSIHBV／P。以常規(guī)方法制備感受態(tài)宿主菌JML09，并將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)菌。將菌液涂布于含氨芐青霉素終濃度60PG／M1的固體LB培養(yǎng)板上，倒置于37℃溫箱中孵育過夜。連接成功的重組體能在抗性培養(yǎng)板上生成單菌落，隨機挑取生長良好的數(shù)個單菌落于含有適量氨芐青霉素的LB液體培養(yǎng)基3M1中，置于374C搖床中250RPM過夜。以小量質(zhì)粒抽提試劑盒按產(chǎn)品說明書進行提取擴增后的重組質(zhì)粒，即得到目的表達載體PSIHBV／P。經(jīng)SALI、XBAI或HINDⅢECORI酶切鑒定，根據(jù)DNASISST20軟件分析，重組質(zhì)粒PSIHBV／P的SALI酶切位點丟失，故不能被SALI酶切，但可以被XBAI酶切，證明HBV的P基因區(qū)的SIRNA序列已被插入。而空載體PTZU6I可分別被SALI和XBAI酶切形成約31KB的DNA片段。重組質(zhì)粒PSIHBV／P用HINDⅢ和ECORI雙酶切后產(chǎn)生理論值分別為2800BP、395B口的兩個片段，而空載體PTZU61用HINDLLI和ECORI雙酶切后產(chǎn)生理論值分別為2800BP、352BP的兩個片段。篩選出含目的SIRNA的陽性克隆，并進行DNA測序分析加以確定，證實能在體內(nèi)轉(zhuǎn)錄針對曲VP基因轉(zhuǎn)錄體的發(fā)夾狀SIRNA的表達載體PSIHBV／P構(gòu)建成功。采用脂質(zhì)體介導(dǎo)方法將PSIHBV／P與13倍HBV真核表達質(zhì)粒PHBVL3按L1、120的不同比例共轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞。同時設(shè)立感染對照組PHBVL3及與HBV序列無關(guān)的SIRNA綠色熒光蛋白PSIGFP對照組。分別于轉(zhuǎn)染后24H、48H、72H

簡介：新疆醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文電針對改善抑郁癥患者認(rèn)知功能的增效作用姓名趙榮江申請學(xué)位級別碩士專業(yè)精神病與精神衛(wèi)生學(xué)指導(dǎo)教師庫木斯巴雅合買提201004新疆醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文2SYNERGYOFELECTROACUPUNCTURETOIMPROVECOGNITIVEFUNCTIONINPATIENTSWITHDEPRESSIONPOSTGRADUATEZHAORONGJIANGSUPERVISASSOCIATEPROFESSKUMUSBAYAHMETABSTRACTOBJECTIVETOAPPROACHTHEELECTROACUPUNCTURETHERAPYHAVEEFFECTFDEPRESSIONONCOGNITIVEFUNCTIONIMPROVEMENTMETHODS93CASESOFFIRSTEPISODEPATIENTSWITHDEPRESSIONDIAGNOSEDINDEPARTMENTOFPSYCHIATRYINTHEFIRSTAFFILIATEDHOSPITALOFXINJIANGMEDICALUNIVERSITYWEREROMLYDIVIDEDINTOELECTROACUPUNCTUREGROUPOF48CASESRECEIVINGPAROXETINEPLUSELECTROACUPUNCTUREPUREDRUGTREATMENTGROUPOF45CASESDOINGSINGLEPUREPAROXETINECLINICALEFFICACYTHEIMPROVEMENTOFCOGNITIVEFUNCTIONWEREASSESSEDWITHTHEHAMILTONDEPRESSIONSCALEHAMDTHEEVENTRELATEDPOTENTIALSERPSP300BEFETREATMENTATTHEENDOFTHE4THWEEKTREATMENTNANALYSISONZHERESULTSWERECARRIEDOUTBYAPPLYINGSSPS115SOFTWARESTHROUGHTTESTRANKSUMTEST2TESTTOAPPROACHTHEELECTROACUPUNCTURETHERAPYHAVEEFFECTFDEPRESSIONONCOGNITIVEFUNCTIONIMPROVEMENTRESULTSATTHEENDOFTHE4THWEEKEFFECTIVERATESWERERESPECTIVELY896INELECTROACUPUNCTUREGROUPCOMPAREDWITHPUREDRUGTREATMENTGROUPOF80P005THETOTALSCESOFTHEHAMDTHELATENCYOFP300LOWEREDSIGNIFICANTLYATTHEENDOFTHE4THWEEKINTHETWOGROUPSP005THEP300AMPLITUDEWERESIGNIFICANTLYHOISTEDTHANPRETREATMENTINTWOGROUPP005AFTERTREATMENTTHEP300AMPLITUDEOFELECTROACUPUNCTUREGROUPWASSIGNIFICANTLYHIGHERTHANHAVEPUREDRUGTREATMENTGROUPP005THEP300LATENCYOFELECTROACUPUNCTUREGROUPWASSIGNIFICANTLYLOWERTHANPUREDRUGTREATMENTGROUPP005CONCLUSIONELECTROACUPUNCTURETHERAPYHAVESIGNIFICANTSYNERGIESFDEPRESSIONONCOGNITIVEFUNCTIONIMPROVEMENTKEYWDSDEPRESSIONPAROXETINEELECTROACUPUNCTUREEVENTRELATEDPOTENTIAL

簡介：目的電子起搏器的局限性促使人們在緩慢性心律失常的治療中尋找新的途徑和方法，體外重新構(gòu)建具有竇房結(jié)功能的細(xì)胞便是嘗試之一。目前主要以HCN4基因轉(zhuǎn)染干細(xì)胞，其雖能分化成心肌樣細(xì)胞，但由于缺乏竇房結(jié)標(biāo)記基因，功能上與竇房結(jié)細(xì)胞仍有差距。TBX3基因在胚胎發(fā)育成熟晚期存在于竇房結(jié)前體細(xì)胞中使之保留起搏功能并抑制竇房結(jié)前體細(xì)胞向心房肌細(xì)胞分化。同時TBX3與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)乳腺癌、膀胱癌、肝癌等惡性腫瘤都存在TBX3基因的過表達。本研究擬構(gòu)建同時攜帶有人。HCN4基因、TBX3基因及增強型綠色熒光蛋白基因EGFP的慢病毒顆粒，并研究HCN4和TBX3對小鼠胚胎干細(xì)胞EMBRYONICSTEMCELL，ES細(xì)胞生物學(xué)活性的影響，為進一步通過HCN4、TBX3共表達重建竇房結(jié)細(xì)胞功能奠定基礎(chǔ)。方法1、慢病毒包裝及滴度測定用脂質(zhì)體LIPOFECTAMINE2000分別包裹攜帶有目的基因的HHCN4HTBX3EGFP、HHCN4EGFP、HTBX3EGFP、EGFP四種目的質(zhì)粒和輔助質(zhì)粒，共轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞，分別產(chǎn)生含有表達HHCN4HTBX3EGFP、HHCN4EGFP、HTBX3EGFP、EGFP基因的四種慢病毒顆粒，計數(shù)熒光克隆數(shù)目，并計算病毒滴度。2、干細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和篩選將獲得的四種慢病毒顆粒分別轉(zhuǎn)染小鼠ES細(xì)胞，48小時后于熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效果。將轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞進行傳代擴增并進行挑克隆純化，RTPCR進一步檢測目的基因表達情況。3、ES細(xì)胞生物學(xué)活性的評價觀察獲得的四種轉(zhuǎn)基因小鼠ES細(xì)胞的形態(tài)、熒光表達強度。MTT法測定各組ES細(xì)胞OD值，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡率。結(jié)果1、HHCN4HTBX3慢病毒顆粒的構(gòu)建四質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞后，根據(jù)熒光顯微鏡觀察結(jié)果表明成功構(gòu)建HHCN4HTBX3EGFP、HHCN4EGFP、HTBX3EGFP、EGFP四種慢病毒顆粒。病毒滴度測定結(jié)果分別為47107TUML、52107TUML、45107TUML、67107TUML。2、轉(zhuǎn)基因ES細(xì)胞相關(guān)基因的表達檢測四種慢病毒轉(zhuǎn)染后的ES細(xì)胞挑克隆純化后熒光表達正常，RTPCR示目的基因表達良好。3、ES細(xì)胞形態(tài)、凋亡等變化四種轉(zhuǎn)染小鼠ES細(xì)胞中，含HHCN4EGFP及EGFP細(xì)胞形態(tài)良好，熒光率較高，含HTBX3EGFP和HHCN4HTBX3EGFP細(xì)胞狀態(tài)相對差，熒光雖然明顯，但表達不強，培養(yǎng)上清可見漂浮的死細(xì)胞。進一步的MTT和流式細(xì)胞儀ANNEXINVPE檢測示HTBX3EGFP、HHCN4HTBX3兩組細(xì)胞生長速度明顯減慢，凋亡率顯著增高P結(jié)論1成功構(gòu)建出HCN4TBX3基因的慢病毒顆粒。2HCN4及TBX3基因成功在干細(xì)胞中過表達。3TBX3對干細(xì)胞增殖無促進作用。

簡介：暨南大學(xué)碩士學(xué)位恰久題名‘類疙疹病毒型感染在廣州為匕區(qū)幼少匕居之熱性疾病中的意多仁一作者姓名李志臻指導(dǎo)教師姓名及學(xué)位、職稱張立伐博士、副教授學(xué)科、專業(yè)名稱內(nèi)禾手千專鄉(xiāng)澳夕丙寫冷論文提交日期年月日論文答辯日期年月日答辯委員會主席論文評閱人學(xué)位授予單位和日期暨南大學(xué)碩卜學(xué)位論文人類抱疹病毒型感染在廣州地區(qū)幼兒發(fā)熱性疾病中的念義中文摘要為探討廣州地區(qū)發(fā)熱性疾病幼兒中一的感染率，從而獲知一感染在本地區(qū)此類疾病中的意義，進而提高對幼兒發(fā)熱性疾病在病因上的認(rèn)識。本實驗選用幼兒唾液和血液標(biāo)本，分健康對照組、疾病對照組和發(fā)熱疾病組三組，采用和一方法檢測標(biāo)本中的一，對各組標(biāo)本中的陽性率情況進行研究。同時檢測血漿標(biāo)本中的一抗體，比較兩種相似的病毒對發(fā)熱性疾病的意義。結(jié)果顯示一方法檢測健康對照、疾病對照和發(fā)熱疾病組唾液標(biāo)本的一陽性率分別為、、，三組比較無顯著性差異。三組血漿標(biāo)本中的陽性率分別為、、，發(fā)熱疾病組分別和其余兩組比較均有顯著性差異。血漿中發(fā)熱疾病組和疾病對照組一的陽性率分別為、，兩組對照無顯著性差異。唾液標(biāo)本中一的陽性率隨年齡的增長而增高，而各組性別之間無明顯差異。各組血漿標(biāo)本中一陽性率與年齡、性別均無相關(guān)性。和一方法檢測同一唾液和血漿標(biāo)本一陽性率之間有明顯的差別。本實驗采用無菌棉簽采集幼兒唾液標(biāo)本，檢測得到的唾液中的一陽性率為，與同類實驗相接近。擴增產(chǎn)物測序結(jié)果分析顯示擴增產(chǎn)物序列與公布的序列相一致。結(jié)論實驗證明，采用無菌的棉簽濕潤唾液進行一的檢測是適用的。在廣州地區(qū)，幼兒中一的感染率比較高，唾液中的一陽性率健康組和疾病組對照沒有顯著差異。血漿中一的陽性可以認(rèn)為是原發(fā)的感染或者是潛伏的一被活化的感染，一的急性感染或潛在感染的活化與幼兒非細(xì)菌性發(fā)熱性疾病，尤其是由于上、下呼吸道感染所致的發(fā)熱性疾病的發(fā)生發(fā)展有一定的關(guān)聯(lián)。作為一種普遍感染的病毒，可能并不是此類發(fā)熱性疾病中的主要致病原。廣州地區(qū)幼兒中感染的一讀碼框的序列與

簡介：點擊查看更多異氟烷預(yù)處理對體外循環(huán)手術(shù)腦損傷及認(rèn)知功能的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：艾滋病在我國的流行經(jīng)歷了傳入期1985～1988、播散期1989～1994年和增長期1995年至今。從1999年起，報告感染人數(shù)每年以30％的速度增加。艾滋病疫情對個人、家庭和社會造成的影響已經(jīng)逐漸顯現(xiàn)。隨著2003年底國家“四免一關(guān)懷”政策的出臺，為艾滋病病人提供免費治療被正式列為各級政府的責(zé)任和常規(guī)工作，并在全國范圍內(nèi)開展。但對抗病毒藥物耐藥的出現(xiàn)，使抗病毒藥物治療效果以及持久力受到威脅。發(fā)達國家因治療時間較長，開展了多項有關(guān)HW感染者對抗病毒藥物耐藥毒株的流行情況及其對AIDS發(fā)病以及死亡影響的研究。我國由于大規(guī)?？共《局委熼_始較晚，以及經(jīng)濟和技術(shù)等方面的原因，開展有關(guān)HW感染者抗病毒治療后耐藥的調(diào)查和研究較少。本次研究試通過調(diào)查了解我國開展抗病毒治療后耐藥毒株的流行及其對接受抗病毒治療的HIV感染者臨床癥狀及生存的影響情況，為指導(dǎo)我國抗病毒治療提供科學(xué)依據(jù)。目的1了解接受抗病毒治療的HIV感染人群臨床癥狀及影響因素2了解接受抗病毒治療的HIV感染人群死亡情況及影響因素研究方法1橫斷面研究于2006年8月2007年3月在全國除貴州、寧夏和西藏以外的28個省市、自治區(qū)開展橫斷面調(diào)查，對符合標(biāo)準(zhǔn)的接受抗病毒治療的調(diào)查對象現(xiàn)場采集流行病學(xué)資料和血清學(xué)樣本，實驗室檢測免疫學(xué)指標(biāo)CD4、病毒學(xué)指標(biāo)病毒載量和基因型測定耐藥性指標(biāo)。采用統(tǒng)一問卷進行問卷調(diào)查，調(diào)查內(nèi)容為患者的一般情況、近一個月臨床表現(xiàn)、治療情況、服藥意愿和服用情況。采用Χ2檢驗和多因素LOGISTIC回歸模型，以近一個月是否出現(xiàn)因AIDS導(dǎo)致生活不能自理、持續(xù)反復(fù)發(fā)熱2周及以上、持續(xù)反復(fù)1周及以上的腹瀉每天≥3次13種臨床癥狀為應(yīng)變量，出現(xiàn)以上13種臨床癥狀則應(yīng)變量Y1，以上3種臨床癥狀均未出現(xiàn)則應(yīng)變量Y0。分析近一個月臨床癥狀的發(fā)生情況以及影響因素。2前瞻性隊列研究在我國HW抗病毒治療庫中，病人在開始抗病毒治療后隨訪時間為05個月、1個月、2個月、3個月，3個月以后則每3個月隨訪一次，并填寫隨訪表，死亡病人填寫治療終止表。本研究將2006年8月2007年3月調(diào)查的2227名對象的HIV耐藥橫斷面調(diào)查數(shù)據(jù)庫同我國抗病毒治療庫利用抗病毒治療號連結(jié)，獲得死亡數(shù)據(jù)截止到2008年3月31日，有16人因抗病毒治療號碼缺失而未納入分析，故共調(diào)查2211人。采用COX比例風(fēng)險回歸模型進行影響死亡的單因素以及多因素分析；根據(jù)多因素分析結(jié)果繪制初始使用一線治療方案人群死亡的KAPLANMEIER生存曲線。結(jié)果1調(diào)查的2227人中，初始接受早期一線方案治療占477％10622227，初始接受后期一線方案占523％11652227；早期一線方案治療人群，近一個月內(nèi)出現(xiàn)因AIDS導(dǎo)致生活不能自理的占14％151062，出現(xiàn)持續(xù)反復(fù)發(fā)熱2周及以上的占77％821062，出現(xiàn)持續(xù)反復(fù)1周及以上的腹瀉每天≥3次的占78％831062，出現(xiàn)以上13種臨床癥狀的占132％1401062；后期一線方案治療人群，近一個月內(nèi)出現(xiàn)因AIDS導(dǎo)致生活不能自理的占35％411165，出現(xiàn)持續(xù)反復(fù)發(fā)熱2周及以上的占50％581165，出現(xiàn)持續(xù)反復(fù)1周及以上的腹瀉每天≥3次以上的占46％541165，出現(xiàn)以上13種臨床癥狀的占106％1241165。2多因素LOGISTIC回歸分析結(jié)果顯示初始使用早期一線方案治療人群，①近3天內(nèi)漏服285，95CI％111～733，P00296，②直接發(fā)放藥物的機構(gòu)，在縣級疾控中心或者醫(yī)院領(lǐng)取藥物041，95％CI023～073，P00025，③CD4細(xì)胞計數(shù)小于200個毫升170，95％CI115～252，P00078，④耐藥情況以病毒載量小于1000拷貝微升均不耐藥作對照，病毒載量大于或等于1000拷貝微升且耐藥的155，95％CI101～237，P00464與應(yīng)變量“是否出現(xiàn)因AIDS導(dǎo)致生活不能自理、持續(xù)反復(fù)發(fā)熱2周及以上、持續(xù)反復(fù)1周及以上的腹瀉每天≥3次中13種臨床癥狀”有統(tǒng)計學(xué)意義；初始使用后期一線方案治療人群，①停止治療570，95％CI153～2124，P00095，②近3天內(nèi)漏服310，95％C，138～696，P00060，③CD4細(xì)胞計數(shù)小于200個毫升166，95％CI113～243，P00096與應(yīng)變量“是否出現(xiàn)因MDS導(dǎo)致生活不能自理、持續(xù)反復(fù)發(fā)熱2周及以上、持續(xù)反復(fù)1周及以上的腹瀉每天≥3次中13種臨床癥狀”有統(tǒng)計學(xué)意義。3截止到2008年3月31日，研究的2211人中，共死亡70人，觀察總?cè)四隇?91394，死亡率為240100人年95％CI184～297。死亡人群中男性占614％4370，女性占386％2770；平均年齡409歲X±S409±88歲；主要死亡原因為艾滋病占886％6270，意外死亡和自殺各1人，分別占14％，其他原因6人占86％。4在單因素COX回歸分析中，文化程度、直接發(fā)放藥物機構(gòu)、近一個月按時服藥比例、領(lǐng)藥間隔、CD4細(xì)胞計數(shù)、耐藥情況和是否停止治療與死亡的關(guān)系有統(tǒng)計學(xué)意義。對單因素分析中P010的變量以逐步回歸法納入多因素COX比例風(fēng)險回歸模型分析，SLS005，SLE005，最終進入模型的變量為①停止治療HR221，95％CI106～460，P00350；②CD4細(xì)胞計數(shù)以≥350個微升為對照，200～350個微升的HR263，95％CI101～685、P00477，100～200個微升的HR452，95％CI176～1156，P00017，小于100個微升的HR1773，95％CI732～293，P00001；③耐藥情況以病毒載量小于1000拷貝微升均不耐藥為對照，病毒載量大于且等于1000拷貝微升且耐藥的HR212，95％CI121～371，P00087。結(jié)論1初始使用早期線方案治療人群，近3天內(nèi)漏服，CD4細(xì)胞計數(shù)小于200個毫升，病毒載量大于或等于1000拷貝微升且耐藥是近一個月內(nèi)出現(xiàn)因AIDS導(dǎo)致生活不能自理、持續(xù)反復(fù)發(fā)熱2周及以上、持續(xù)反復(fù)1周及以上的腹瀉每天≥3次中13種臨床癥狀的危險因素，從縣級疾控中心或醫(yī)院領(lǐng)取藥物為保護因素；初始使用后期一線方案治療人群，停止治療，近3天內(nèi)漏服，CD4細(xì)胞計數(shù)小于200個毫升是近一個月內(nèi)出現(xiàn)因AIDS導(dǎo)致生活不能自理、持續(xù)反復(fù)發(fā)熱2周及以上、持續(xù)反復(fù)1周及以上的腹瀉每天≥3次中13種臨床癥狀的危險因素。2初始使用一線方案治療人群，停止治療，低CD4細(xì)胞計數(shù)，病毒載量大于或等于1000拷貝微升且耐藥是患者死亡的危險因素。

簡介：第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文兒童細(xì)小病毒B19感染診斷方法及臨床特征的研究姓名曹玉紅申請學(xué)位級別碩士專業(yè)兒科學(xué)指導(dǎo)教師張國成200061第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文法對80例懷疑B19感染的各種疾病患者及30例健康兒童外周血進行B19一IGM、IGG、DNA檢測；用IFCC及巢式PCR法檢測2L例急性再障患者AAA骨髓B19抗原及DNA；并對B19感染患兒進行臨床分析，對部分患者進行隨訪及預(yù)后觀察。儲果發(fā)現(xiàn)1本文建立的ELISA法檢測B19抗體、IFCC法檢測B19抗原技術(shù)，均具有高度的特異性，與其它病毒抗體或抗原之間無交叉反應(yīng)，ELISA法可檢測到20IU／ML的B19IGM及30IU／ML的B19IGG。2病例組80例，血清B19DNA、IGM、IGG陽性率分別為325％26／80，2125％17／80，2625％21／8021例AAA患者骨髓B19一DNA、IGM、抗原陽性率分別為3333％7／21、1905％4／21、1429％3／21；與巢式PCR法檢測結(jié)果相比，ELISA法的靈敏度為6154％，特異度為9815％，陽性符合率為20％，陰性符合率為6625％，總符合率為8625％，陽性預(yù)告值為PV為9412％，陰性預(yù)告值PV為8413％IFCC法的靈敏度為4286％，特異度為100％，陽性符合率為1429％，陰性符合率為6667％，總符合率為8095％，PV為100％，PV為7778％。說明ELISA及IFCC法診斷B19感染的敏感性均低于巢式PCR，單純抗原或抗體檢測將導(dǎo)致部分B19感染患者漏診。診斷B19感染時最好同時檢測B19DHLA和抗體或抗原。3病例組80例，3375％27／80存在B19感染，臨床診斷為AAA7例，RRP5例，自血病患者的慢性貧血、溶血性貧血合并再障危象、過敏性紫癜、淋巴結(jié)炎各2例，骨髓增生異常綜合征、皮肌炎、關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、川畸病、傳染性單核細(xì)胞增多癥、上感各1例，其中AAA及ITP患者B19感染率與對照組

簡介：目的構(gòu)建人FCΓRⅡB慢病毒誘導(dǎo)表達載體，檢測人FCΓRⅡB慢病毒誘導(dǎo)表達載體在HT1080細(xì)胞表面可調(diào)控的穩(wěn)定表達，并初步研究其對B細(xì)胞功能的影響。方法以人MRNA為模版逆轉(zhuǎn)錄獲得FCΓRⅡB基因片段，并將其克隆入慢病毒表達質(zhì)粒TRE，構(gòu)建TREFCΓRⅡB慢病毒表達重組質(zhì)粒。將慢病毒表達重組質(zhì)粒TREFCΓRⅡB、慢病毒調(diào)節(jié)質(zhì)粒TET分別與慢病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，分別包裝表達病毒和調(diào)節(jié)病毒，分別測定表達病毒和調(diào)節(jié)病毒感染滴度。表達病毒和調(diào)節(jié)病毒共感染HT1080細(xì)胞，經(jīng)梯度濃度強力霉素（DOX）誘導(dǎo)，免疫熒光染色檢測HT1080細(xì)胞表達FCΓRⅡB，實時定量PCR檢測FCΓRⅡBMRNA表達，WESTERNBLOT法檢測FCΓRⅡB蛋白表達。表達病毒和調(diào)節(jié)病毒共感染RAMOS細(xì)胞，經(jīng)1000NGML強力霉素（DOX）誘導(dǎo)，免疫熒光檢測FCΓRⅡB的表達和FCΓRⅡB與SLE患者血清免疫復(fù)合物（IC）中IGGFC端的結(jié)合能力。LPS刺激感染后的RAMOS細(xì)胞，ELISA法檢測過表達FCΓRⅡB對RAMOS細(xì)胞分泌IGM抗體的影響。結(jié)果重組質(zhì)粒經(jīng)PCR、酶切及測序鑒定，測序結(jié)果顯示插入片段堿基序列與GENBANK提供FCΓRⅡB基因序列同源性100％。表達病毒滴度達106TUML，調(diào)節(jié)病毒滴度達105TUML，感染性良好。HT1080細(xì)胞被病毒感染后經(jīng)DOX誘導(dǎo)表達FCΓRⅡB，免疫熒光染色結(jié)果顯示FCΓRⅡB能夠在HT1080細(xì)胞表達；實時熒光定量PCR和WESTERNBLOT法結(jié)果顯示FCΓRⅡB表達水平與誘導(dǎo)劑濃度正相關(guān)。免疫熒光結(jié)果顯示病毒感染后，RAMOS細(xì)胞過表達FCΓRⅡB且與IC中IGGFC端有較好的結(jié)合能力。ELISA結(jié)果顯示過表達FCΓRⅡB會下調(diào)RAMOS細(xì)胞的IGM分泌水平。結(jié)論成功構(gòu)建了FCΓRⅡB慢病毒誘導(dǎo)表達載體。經(jīng)該慢病毒感染后RAMOS細(xì)胞過表達FCΓRⅡB且能下調(diào)該細(xì)胞分泌IGM型抗體的水平。