簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多呼腸孤病毒科兩種病毒的初步研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)分類號(hào)R741學(xué)校代碼學(xué)校代碼10114密級(jí)學(xué)號(hào)學(xué)號(hào)20070020呂梁地區(qū)農(nóng)村認(rèn)知功能障礙與同型半胱氨酸相關(guān)性研究呂梁地區(qū)農(nóng)村認(rèn)知功能障礙與同型半胱氨酸相關(guān)性研究THERELATIONSHIPBETWEENPLASMAHOMOCYSTEINEWITHMILDCOGNITIVEIMPAIRMENTANDALZHEIMER’SDISEASEINRURALAREAOFLVLIANG研究生生楊洋指導(dǎo)教師牛小媛師牛小媛申請(qǐng)學(xué)位每類級(jí)別醫(yī)學(xué)碩士（專業(yè)學(xué)位）申請(qǐng)學(xué)位每類級(jí)別醫(yī)學(xué)碩士（專業(yè)學(xué)位）專業(yè)名稱神經(jīng)病學(xué)稱神經(jīng)病學(xué)研究方向腦血管病與神經(jīng)變性病向腦血管病與神經(jīng)變性病所在學(xué)院第一臨床醫(yī)學(xué)院院第一臨床醫(yī)學(xué)院中國(guó)中國(guó)山西山西二O一四年五月十三日一四年五月十三日目錄摘要IABSTRACTABSTRACTⅡ前言1研究對(duì)象和方法研究對(duì)象和方法4結(jié)果7討論9結(jié)論1212參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)1313綜述15參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)1919個(gè)人簡(jiǎn)歷個(gè)人簡(jiǎn)歷21致謝22

簡(jiǎn)介：808029甲肝、乙肝病毒基因隨機(jī)肽展示庫(kù)的構(gòu)建及肝細(xì)胞肝癌細(xì)胞受體特異性配體的篩選CONSTRUCTL0NOFHAVANDHBVGENEDERIVEDRANDOMPEPTIDELIBRARYANDSCREENINGFORLIGANDSOFSPECIFICRECEPTORONHUMANLIVERANDHUMANLIVERCANCERCELLS博士后姓名朱以萍流動(dòng)站F一級(jí)學(xué)科名稱復(fù)旦大學(xué)生物學(xué)專業(yè)二級(jí)學(xué)科名稱微生物學(xué)研究工作起始時(shí)間2002年7月4日研究工作期滿時(shí)問2004年7月6日復(fù)旦大學(xué)研究生院上海2004年7月ABSTRACTNISWELLAPPROVEDTHATHEPATITISVIRUSINFECTIONHASPLAYEDACRUCIALROLEINCAUSINGCIRRHOSISANDHCCOFHUMAN．HCCISRANKEDASONEOFTHEFIVELEADINGHUMANCANCERSWORLDWIDE．CAUSINGATLEASTL250000DEATHSANNUALLY．ASCONVENTIONALTREAMAENTOFHCC，SURGERY,RADIOTHERAPYANDCHEMIOTHERAPYWERENOTSOEFFICIENTFORMOSTLATESTAGEOFLEAVERCANCENITCOULDEVENBEHELPLESSANDHARMFULTOTHEPATIENTS，BECAUSEOFTHEIRADLIBITUMMATMER，ASITWOULDKILLNOTONLYTHEILLCELLSBUTALSOTHEHEALTHYCELLS．WITHTHEDEVELOPMENTOFPEPTIDEDISPLAYTECHNIQUEANDEFFICIENTMEASURESOFISOLATINGSPECIFICORGANMADTISSUEHOMINGPEPTIDE，TARGETEDTHERAPYOFHCCCOULDBECOMETRUE．INTHISREPORT,TWORANDOMLIBRARYOFGENEFRAGMENTDERIVEDFROMHAVANDHBVGENOMEWASGENERATEDBYDNASEICLEAVAGEANDCLONEDINTOT7SELE護(hù)PREDIGESTEDARMS．AFTERSEVERALROUNDSOFBIOPANNINGWITHNORMALLEAVERCELLSL02OR／ANDLEAVERCANCERCELLSHEPG2，RESULTEDPHAGESWEREAPPLIEDTONUDEMICETHATBEARINGTUMORWHICHINDUCEDBYINOCULMINGCORRESPONDINGCELLSFORFURTHERENRICHMENTOFL02ORHEPG2SPECIFICBINDINGPHAGES．FROMLASTPOOLOFPHAGES，SINGLEPLAQUEORIGINATEDPHAGEDNAWASPURIFIEDANDWASEMPLOYEDASPCRTEMPLATEFORSEQUENCEANALYSISOFINSERTFRAGMENT．ASARESULT，ONEINSERTSEQUENCEANDIT’SDEDUCEDPEPTIDESTRUCTUREWASPRESENTED，BUTMORERESEAMHDATAWASNEEDEDFORFURTHERINVESTIGATIONINTOTHEMATTER．KEYWORDSHEPATITISVIRUS，RANDOMPEPTIDELIBRARY,TARGETEDTUMORTHERAPY

簡(jiǎn)介：目的應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)FLUOGENICQUANTITIVEREVERSETRANIONPOLYMERIZECHAINREACTIONFQRTPCR方法，檢測(cè)經(jīng)人巨細(xì)胞病毒HUMANCYTOMEGALOVIRUS，HCMV感染和或全反式維甲酸ALLTRANSRETINOICACID，ATRA和或三氧化二砷ARSENICTRIOXIDE，ATO，AS2O3處理的人臍血造血紅系祖細(xì)胞COLONYFMINGUNITERYTHROID，CFUE；BRUSTFMINGUNITERYTHROID，BFUE的HOXB6HOMEOBOXB6GENE基因的MRNA定量表達(dá)情況，在基因水平探討HCMV感染導(dǎo)致造血紅系祖細(xì)胞損害的機(jī)制。方法13例臍血標(biāo)本由本院產(chǎn)房提供，取自正常足月順產(chǎn)新生兒斷臍后的胎盤段臍血。采用造血祖細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)，以HCMV持續(xù)感染和或ATRA和或AS2O3處理人臍血紅系祖細(xì)胞，觀察HCMV感染后和或ATRA和或AS2O3處理后的CFUE，BFUE集落形態(tài)及峰期。2實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)分成6組①空白對(duì)照組在正常培養(yǎng)體系中，不加任何的處理因素。②HCMV組按100TCID50HCMVAD169病毒液01ML感染正常的培養(yǎng)體系。③ATRA組在正常培養(yǎng)體系中加入維甲酸，終濃度為106MOLL。④HCMVATRA組在上述同樣的人巨細(xì)胞病毒組中加入維甲酸，終濃度同上。⑤AS2O3組在正常培養(yǎng)體系中加入三氧化二砷，終濃度為106MOLL。⑥HCMVAS2O3組在上述同樣的人巨細(xì)胞病毒組中加入三氧化二砷，終濃度同上。3采用原位聯(lián)苯胺染色法鑒定紅系祖細(xì)胞。4不同時(shí)間點(diǎn)即第3天，第7天，第10天分別提取各組細(xì)胞RNA，用1％甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA分子的完整性。5利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RTPCR技術(shù)和隨機(jī)引物將總RNA逆轉(zhuǎn)錄成CDNA，設(shè)計(jì)基因特異引物在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行體外擴(kuò)增。將HOXB6基因CDNA和人磷酸甘油醛脫氫酶GLUCERALDEHYDEPHOSPHATEDEHYDROGENASEGAPDH基因陽性產(chǎn)物CDNA梯度稀釋制作各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)各個(gè)樣本循環(huán)指數(shù)增長(zhǎng)期的起始點(diǎn)即循環(huán)域值CYCLETHRESHOLDCT和標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率值計(jì)算各樣本起始CDNA模板量倍數(shù)值，以GAPDH基因作為內(nèi)參照進(jìn)行標(biāo)化，統(tǒng)計(jì)并分析各組樣本的HOXB6基因表達(dá)的MRNA是否存在差異。統(tǒng)計(jì)方法結(jié)果用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差X±S，進(jìn)行單因素方差分析，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義后組間均數(shù)用兩兩比較方法，由統(tǒng)計(jì)軟件SPSS115完成。結(jié)果1集落細(xì)胞的形態(tài)學(xué)鑒定，原位聯(lián)苯胺染色法證明所培養(yǎng)的是造血紅系祖細(xì)胞。21％甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳顯示RNA電泳圖的5S18S28S三條帶型整齊，無明顯拖尾及彌散，說明RNA結(jié)構(gòu)完整，無明顯降解。3逆轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增三組均有目的基因HOXB6和內(nèi)參照GAPDH基因的CDNA的產(chǎn)生，與DNA分子MARKER相比示擴(kuò)增產(chǎn)物大小分別為119BP和141BP。4HOXB6基因MRNA在6個(gè)組即正常的紅系祖細(xì)胞，HCMV感染后的紅系祖細(xì)胞，以及ATRA和AS2O3處理過的紅系祖細(xì)胞和先感染HCMV后用ATRAAS2O3處理的紅系祖細(xì)胞中定量表達(dá)情況，經(jīng)過單因素方差分析和SPSS115FWINDOWS統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，在正常培養(yǎng)體系中紅系祖細(xì)胞隨第3天，第7天，第10天時(shí)間推移持續(xù)表達(dá)HOXB6基因，且表達(dá)持續(xù)上調(diào)；在HCMV感染后，紅系祖細(xì)胞HOXB6基因的表達(dá)隨著第3天，7天，10天時(shí)間的推移與空白對(duì)照組比較，明顯持續(xù)下調(diào)，即表達(dá)被抑制；ATRA組與空白對(duì)照組比較，能持續(xù)顯著上調(diào)紅系祖細(xì)胞的HOXB6基因的表達(dá)，且隨著第3天，第7天，第10天時(shí)間延長(zhǎng)，表達(dá)量逐漸升高；ATRA也能上調(diào)對(duì)HCMV感染后的第3天和第7天紅系祖細(xì)胞的HOXB6基因的表達(dá)，但是ATRA對(duì)HCMV感染后的第10天紅系祖細(xì)胞HOXB6基因的表達(dá)與空白對(duì)照組相比統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著差異；AS2O3與空白對(duì)照組比較，能隨著時(shí)間推移逐漸下調(diào)紅系祖細(xì)胞和HCMV感染后的紅系祖細(xì)胞的HOXB6基因的表達(dá)，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與HCMV組比較，結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論1HOXB6基因在臍血紅系造血祖細(xì)胞中持續(xù)穩(wěn)定的表達(dá)，且與紅系造血有密切的相關(guān)性。2HCMV感染能誘導(dǎo)臍血紅系造血祖細(xì)胞HOXB6基因表達(dá)下調(diào)，HCMV有可能通過調(diào)控HOXB6基因表達(dá)異常而引起造血系統(tǒng)損害。3ATRA和AS2O3可以調(diào)控HOXB6基因的表達(dá)。4本實(shí)驗(yàn)采用TRIZOL試劑提取臍血紅系造血祖細(xì)胞總RNA，所得產(chǎn)物RNA純度高，完整性好，產(chǎn)物濃度無明顯差異，無DNA污染，操作簡(jiǎn)便，適合于從細(xì)胞中提取總RNA的實(shí)驗(yàn)。5本實(shí)驗(yàn)采用FQRTPCR技術(shù)具有檢測(cè)范圍寬，敏感性高，精確度高，無PCR后處理步驟，避免了交叉污染，產(chǎn)出率高，可以進(jìn)行多重檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)，該方法是一種對(duì)HOX基因在紅系造血祖細(xì)胞表達(dá)進(jìn)行定量或定性研究的理想方法，是當(dāng)今研究MRNA表達(dá)水平較可靠的技術(shù)之一。

簡(jiǎn)介：河北醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文調(diào)肝解毒方藥對(duì)癲癇大鼠認(rèn)知障礙的干預(yù)作用研究姓名裴林申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)中西醫(yī)結(jié)合臨床指導(dǎo)教師李佃貴20070401英文縮寫GLUGABAAⅣ啤AMWMTAESYTEPMTOFTCPUSTMA1RGLUTAMATE谷氨酸GAMAAMINOBUTYRICACIDY一氨基丁酸YAMINO一3HYDROXY一5一METHYL一4一ISOXAZOLEPROPIONATEY．氨基一3．羥基．5．甲基．4．異惡唑丙酸MORRISWATERMAZETESTMORRIS水迷宮試驗(yàn)ALTEMATIVEELECTROSTIMULUSYMAZETEST交替電刺激Y迷宮試驗(yàn)ELEVATEDPLUSMAZETEST抬高迷宮試驗(yàn)OPENFIELDTEST曠場(chǎng)活動(dòng)試驗(yàn)DENTATEGYMS齒狀回CAUDATEPUTAMEN尾殼核SHORTTERMMEMORY短時(shí)記憶LONGTERMMEMORY長(zhǎng)時(shí)記憶ADENOSINEAIRECEPTOR腺苷AI受體

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R7722密級(jí)⑧單位代碼10422學(xué)號(hào)M2010075∥菇辦孑碩士學(xué)位論文論文題目ANALYTICALSTUDYOFVIRALCORNEALENDOTHELIITIS病毒性角膜內(nèi)皮炎的I臨床分析作者姓名ASADMUHAMMAD學(xué)院名稱MEDICALUNIVERSITY專業(yè)名稱OPHTHALMOLOGY指導(dǎo)教師PROFESSORXINYIWU合作導(dǎo)師2013年5月4E1SHANDONGUNIVERSITYMASER’STHESIS目錄中文摘要5英文摘要7符號(hào)說明8前言9資料和方法12結(jié)果14討論21結(jié)論22綜述23綜述參考文獻(xiàn)55致謝64刊物65

簡(jiǎn)介：重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文編碼小鼠PGC1Α基因的重組腺病毒的構(gòu)建和鑒定姓名馬仕坤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（內(nèi)分泌）指導(dǎo)教師李啟富20070401重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生論文DNASEDNTPEBEDTAFCSGFPHRPIGO嗍BATUCP1LEPTMPGCNRF1MTL下AUGLLL喇STAEDEOXYRIBONUCLEASCDEOXYRIBONUCLEOSIDETRIPHOSPHATEENLIDIUMBROMIDEETHYLENEDIAMINETETRAACETICACIDFETALEALFSERUMGREENFLBORESEENCEPROTEINHORSERADISHPEROXIDASEIMMUNOGLUBULINWHITEADIPOSETISSUEBROWNADIPOSETISSUEPEROXISOMEPROLIFERATORACTIVATEDRECEPTORFFCOACTIVATORNUCLEARRESPIRATORYFACTORSMITOCHONDRIALTMSCRIPTIONFACTORMICROGRAMMIEROLITRETRISHYDROXYMETHYLAMINOMETHANETRIS／ACCTATEELECTROPHORESISBUFFER2DNA酶三磷酸脫氧核糖核苷溴乙錠乙二胺四乙酸胎牛血清綠色熒光蛋白辣根過氧化物酶免疫球蛋白白色脂肪組織褐色脂肪組織線粒體內(nèi)膜解偶聯(lián)蛋白1瘦素過氧化物酶增殖體激活受體輔激動(dòng)子核呼吸因子1線粒體轉(zhuǎn)錄因子A微克微升三羥甲基氨基甲烷THS／乙酸電泳緩沖液

簡(jiǎn)介：目前國(guó)內(nèi)外對(duì)HBV宮內(nèi)感染的機(jī)制尚不清楚治療也很難奏效因此研究HBV宮內(nèi)感染發(fā)生的機(jī)制及其影響因素篩查高危孕婦探討有效的阻斷措施切斷傳播途徑將對(duì)控制和預(yù)防乙肝有著十分重要的意義普遍認(rèn)為HBV宮內(nèi)感染的途徑為經(jīng)胎盤傳播及經(jīng)精子傳播其中經(jīng)胎盤傳播是主要途徑但其機(jī)制不清該研究在病例選擇上排除經(jīng)精子傳播的可能通過檢測(cè)HBSAG陽性孕婦外周血、胎盤、新生兒臍血感染HBV的情況探討HBV宮內(nèi)感染經(jīng)胎盤傳播的機(jī)制及其影響因素為防治HBV宮內(nèi)感染提供理論依據(jù)該研究表明1、胎盤感染是HBV經(jīng)胎盤傳播導(dǎo)致宮內(nèi)感染的必要條件即首先感染胎盤再進(jìn)一步感染胎兒但如何感染胎兒其具體機(jī)制還不清楚有待于今后進(jìn)一步研究2、HBSAG陽性、HBCAG高滴度是宮內(nèi)感染的主要影響因素可將其作為產(chǎn)前檢查方法篩查高危人群3、用ELISA倍比稀釋法檢測(cè)HBSAG滴度方法科學(xué)、簡(jiǎn)便、實(shí)用性強(qiáng)孕婦對(duì)周血HBSAG滴度11000時(shí)傳染性強(qiáng)應(yīng)警惕宮內(nèi)感染的發(fā)生4、HBCAG是一項(xiàng)新的反映HBSAG陽性孕婦外周血HBV傳染性的指標(biāo)它與HBVDNA陽性符合率極高并具有相同的特異性HBCAG的檢測(cè)不需要特殊的設(shè)備儀器與檢測(cè)HBVDNA相比前者操作簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)實(shí)用更適合各大、中、小型醫(yī)療單位應(yīng)用

簡(jiǎn)介：目的構(gòu)建免疫豁免分子HLAG和FASL的慢病毒表達(dá)載體，經(jīng)過293T細(xì)胞包裝后感染人胚胎干細(xì)胞HUMANEMBRYONICSTEMCELL，HES，篩選出能穩(wěn)定表達(dá)HLAG和FASL的HES細(xì)胞陽性克隆，分別建立能夠穩(wěn)定地構(gòu)成性表達(dá)HLAG、FASL和HLAGFASL的HES細(xì)胞系，為進(jìn)一步研究這些細(xì)胞系的生物學(xué)特性，并最終建立免疫豁免的人類組織工程種子細(xì)胞奠定基礎(chǔ)。方法⑴HLAG慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建從正常孕婦剖宮產(chǎn)后胎盤提取總RNA，用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成為CDNA，設(shè)計(jì)對(duì)應(yīng)引物PCR擴(kuò)增出HLAG產(chǎn)物并回收將目的基因片段與帶有EGFP熒光標(biāo)記和新霉素篩選標(biāo)記的EXNEGLV183空白載體連接為重組HLAG慢病毒表達(dá)載體EXHLAGLV183并測(cè)序。⑵FASL慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建設(shè)計(jì)引物從EXL0009M02載體上分離出FASL片段并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將回收的目的片段與帶有MCHERRY熒光標(biāo)記和嘌呤霉素篩選標(biāo)記的的EXNEGLV111空白載體連接為重組FASL慢病毒表達(dá)載體EXFASLLV111并測(cè)序。⑶重組慢病毒表達(dá)載體的包裝將上述構(gòu)建的兩種表達(dá)載體分別與HIVPACKINGMIX包裝質(zhì)粒按1∶1稀釋于OPTIMEM培養(yǎng)液中，并與同樣稀釋于OPTIMEM中的25倍含量的LIPOFECTAMINE2000脂質(zhì)體混合后轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞6小時(shí)，換液后48小時(shí)觀察熒光判斷包裝效率并提取上清液測(cè)定滴度。⑷HES的擴(kuò)增人胚胎干細(xì)胞HES接種于經(jīng)絲裂霉素處理的飼養(yǎng)層MEF上，在含20％KNOCKOUTSR血清，78％DMEMF12培養(yǎng)液，1％NEAA，1％L谷氨酰胺以及01％Β巰基乙醇和BFGF的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，每天換液一次，每34天按1∶2比例傳代擴(kuò)增一次。⑸HLAGFASL慢病毒感染HES細(xì)胞將病毒液和溴化季銨陽離子POLYBRENE加入到無飼養(yǎng)層條件下培養(yǎng)的HES中培養(yǎng)2小時(shí)后補(bǔ)加同體積病毒液，2小時(shí)后離心HES23次后加到飼養(yǎng)層上常規(guī)培養(yǎng)。48小時(shí)后觀察熒光表達(dá)。結(jié)果①經(jīng)過電泳及測(cè)序鑒定成功構(gòu)建了含有EGFP熒光標(biāo)記和新霉素篩選標(biāo)記的重組HLAG慢病毒表達(dá)載體EXHLAGLV183。②經(jīng)過電泳及測(cè)序鑒定成功構(gòu)建了含有MCHERRY熒光標(biāo)記和嘌呤霉素篩選標(biāo)記的重組FASL慢病毒表達(dá)載體EXFASLLV111。③包裝載體過程中摸索發(fā)現(xiàn)在載體與轉(zhuǎn)染試劑比例為1∶25且轉(zhuǎn)染時(shí)間為6小時(shí)的情況下，表達(dá)載體包裝效率最高。在此條件下包裝質(zhì)粒并提取病毒上清液，用孔稀釋法測(cè)定兩種載體包裝后的病毒滴度分別為10109TUML和53108TUML，具備感染目的細(xì)胞的條件。④MEF飼養(yǎng)層細(xì)胞的制備將取自孕135天的小鼠胚胎的胚胎成纖維細(xì)胞（MOUSEEMBRYONICFIBROBLAST，MEF）進(jìn)行傳代培養(yǎng)至23代，當(dāng)細(xì)胞匯合度到達(dá)80％時(shí)用濃度為10ΜGML的絲裂霉素C處理2小時(shí)可明顯抑制MEF的分裂，形成利于HES細(xì)胞生長(zhǎng)的飼養(yǎng)層細(xì)胞。⑤HES細(xì)胞的培養(yǎng)在含有飼養(yǎng)層細(xì)胞的條件下每天換液可保證絕大多數(shù)細(xì)胞在45天內(nèi)不斷生長(zhǎng)且不發(fā)生分化。在無飼養(yǎng)層條件下，HES細(xì)胞在MATRIGEL處理過的細(xì)胞培養(yǎng)板上可貼壁生長(zhǎng)至細(xì)胞匯合度到達(dá)40％。⑥分別用HLAG，F(xiàn)ASL慢病毒液感染HES細(xì)胞，感染48H后在熒光顯微鏡下可觀察到帶有相應(yīng)熒光標(biāo)記的陽性細(xì)胞。結(jié)論⑴本實(shí)驗(yàn)使用總RNA提取和反轉(zhuǎn)錄PCR的方法可以從人胎盤組織中擴(kuò)增出HLAG目的基因片段，并成功構(gòu)建了HLAG重組慢病毒載體EXHLAGLV183。⑵本實(shí)驗(yàn)使用PCR方法可以從含有目的基因片段的哺乳動(dòng)物真核表達(dá)載體中擴(kuò)增出FASL目的基因片段，并成功構(gòu)建了FASL重組慢病毒載體EXFASLLV111。⑶本實(shí)驗(yàn)摸索出在慢病毒載體與轉(zhuǎn)染試劑LIPOFACTAMINE2000比例為1∶25且轉(zhuǎn)染時(shí)間為6小時(shí)的情況下，包裝效率最高且可以收集獲得較高的病毒滴度。⑷HES細(xì)胞在MATRIGEL處理過的培養(yǎng)板上可以貼壁生長(zhǎng)，雖然比在相同培養(yǎng)液條件下飼養(yǎng)層細(xì)胞上的生長(zhǎng)狀態(tài)要差，但仍可以進(jìn)行短時(shí)間的培養(yǎng)與擴(kuò)增。⑸利用本實(shí)驗(yàn)所制得的含有HLAG和FASL慢病毒質(zhì)粒的病毒液均可以成功感染HES細(xì)胞，并獲得含有HLAG和FASL目的基因片段的HES細(xì)胞。

簡(jiǎn)介：第一軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文用LMP1構(gòu)建重組慢病毒載體及建立轉(zhuǎn)基因小鼠模型姓名楊玉芳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)病理學(xué)指導(dǎo)教師丁彥青20040518用LMPL構(gòu)建重組慢病毒載體及建立轉(zhuǎn)基因小鼠模型博士研究生導(dǎo)師楊玉芳丁彥青教授中文摘要EB病毒與多種人類腫瘤相關(guān)，尤其與鼻咽癌密切相關(guān)，但由于缺乏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)方面的證據(jù)，EB病毒在鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展中所起的作用一直是研究的熱點(diǎn)。但至今尚未能用EB病毒或其致瘤基因建立鼻嘲癌動(dòng)物模型，分析原因，我們認(rèn)為主要與沒有利用鼻咽組織相對(duì)特異性啟動(dòng)子有關(guān)。為了解決這一問題，本研究利用嗜上皮細(xì)胞特異性啟動(dòng)子EDL2，攜帶增強(qiáng)型綠色熒光蛋白報(bào)告基因ENHANCEDGREENFLUORESCENTPROTEIN．EGFP與EB病毒潛伏膜蛋白LMPL，構(gòu)建融合蛋白基因載體。本研究擬分別構(gòu)建EDL2一EGFP慢病毒表達(dá)載體、EDL2．N．LMPLEGFP慢病毒表達(dá)載體、EDL2一B．LMPL．EGFP慢病毒表達(dá)載體；將EB病毒潛伏膜蛋白LMPL與增強(qiáng)型綠色熒光蛋白EGFP作為目的基因，通過顯微注射技術(shù)，建立攜帶靶基因的轉(zhuǎn)基因小鼠，為進(jìn)一步建立鼻咽癌動(dòng)物模型探索新途徑。研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下一、成功構(gòu)建了ED．L2一EGFP慢病毒載體、EDL2一NLMPL．EGFP慢病毒載體、EDL2．BLMPLEGFP慢病毒表達(dá)載體以PEDL2一NLMPL質(zhì)粒為模板，通過PCR法擴(kuò)增ED．L2啟動(dòng)予序列，上游57端引入PACI酶切位點(diǎn)，下游57端引入BAMHI酶切位點(diǎn)，PCR產(chǎn)物膠回收純化與PUCLL8載體16。C進(jìn)行連接。利用基因重組技術(shù)，首先將EDL2啟動(dòng)子序列克隆入慢病毒載體，然后分別將N．LMPL及BLMPL克隆入含E1一L2啟動(dòng)子的慢病毒載體中。抽提質(zhì)粒，重組載體酶切鑒定、基因測(cè)序，選

簡(jiǎn)介：目的探討異丙酚復(fù)合芬太尼全憑靜脈麻醉與硬膜外麻醉兩種不同的麻醉方法對(duì)青年患者小手術(shù)后認(rèn)知功能的影響。方法收集石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院擇期行小手術(shù)（手術(shù)時(shí)間結(jié)果1T2時(shí)，三組出現(xiàn)認(rèn)知功能受損病例為33例，在所有觀察者中占367％。其中，對(duì)照組、全麻組和硬膜外組中發(fā)生為133％430，567％1730和40％1230，T3時(shí)已基本恢復(fù)。與對(duì)照組比較，全麻組和硬膜外認(rèn)知功能受損病例明顯增高P00010039而后兩組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005。2T2時(shí)，三組出現(xiàn)術(shù)后認(rèn)知功能患者共5例，占56％。其中，對(duì)照組、全麻組和硬膜外組中發(fā)生了33％130，67％230和67％230。卡方檢驗(yàn)顯示，不同組內(nèi)出現(xiàn)認(rèn)知功能障礙的病例之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義Χ2046，P005。T3時(shí)，對(duì)照組中出現(xiàn)1例，其余兩組得分已基本恢復(fù)至術(shù)前水平。3T1和T3時(shí)，抑郁自評(píng)量表得分顯示與對(duì)照組比較，全麻組、硬膜外組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P026，P071；與T1時(shí)比較，麻醉組得分稍有降低，但沒有明顯差異P005。4六項(xiàng)分測(cè)定中，聯(lián)想學(xué)習(xí)兩次信度系數(shù)分別為020和042，其余分布在064085之間。結(jié)論1青年患者，在全身麻醉或硬膜外麻醉下施行小手術(shù)后，術(shù)后3天均可影響記憶力、注意力計(jì)算力某項(xiàng)功能，出現(xiàn)一過性的減退，但并不能導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙的發(fā)生，且術(shù)后30天測(cè)定表明受損功能已基本恢復(fù)。2圍手術(shù)期，青年患者可出現(xiàn)輕度的情緒波動(dòng)，但均能通過自我調(diào)節(jié)的方式有效疏導(dǎo)和緩解。3六項(xiàng)分測(cè)驗(yàn)中，累加、視覺再認(rèn)、算術(shù)、數(shù)字廣度和數(shù)字符號(hào)不同時(shí)間測(cè)定的穩(wěn)定性好，準(zhǔn)確性高。其中，視覺再認(rèn)學(xué)習(xí)效應(yīng)較為明顯，實(shí)施時(shí)應(yīng)考慮適當(dāng)延長(zhǎng)間隔時(shí)間。

簡(jiǎn)介：目的檢測(cè)分析正常人淋巴細(xì)胞和體外EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞兩者宿主細(xì)胞差異表達(dá)基因篩選發(fā)現(xiàn)EBV誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的候選關(guān)鍵基因探討EBV誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的分子機(jī)制。方法采集7例健康獻(xiàn)血員新鮮外周靜脈血分離出人淋巴細(xì)胞在體外利用EBV誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化建立淋巴母細(xì)胞模型分別保存正常人淋巴細(xì)胞與體外EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞。采用AGILENT444K人類全基因組表達(dá)譜芯片檢測(cè)、比較分析正常人淋巴細(xì)胞與體外EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞的宿主細(xì)胞差異表達(dá)基因篩選出FOLDCHANGE≥2的基因?yàn)楸磉_(dá)顯著上調(diào)基因FOLDCHANGE≤05為表達(dá)顯著下調(diào)基因。采用實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證基因芯片檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果1EBV轉(zhuǎn)化后的淋巴細(xì)胞永生化經(jīng)傳代培養(yǎng)和顯微鏡下觀察獲得體外EBV轉(zhuǎn)化的淋巴母細(xì)胞模型。利用LIMMA算法以TTESTP〈00001篩選差異表達(dá)基因共篩選出2916個(gè)明顯差異表達(dá)PROBES其中上調(diào)基因1328個(gè)下調(diào)基因1007個(gè)581個(gè)PROBES在HUGO未映射有基因含EST65個(gè)系統(tǒng)構(gòu)建了7例同源正常淋巴細(xì)胞NM和體外EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞TRANS的宿主細(xì)胞差異基因表達(dá)譜。HIERARCHICALCLUSTERING分析顯示差異表達(dá)基因能夠很好地區(qū)分正常淋巴細(xì)胞和EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞。2差異表達(dá)基因的生物信息學(xué)分析GENEONTOLOGY分類中BP分析顯示共958個(gè)上調(diào)基因參與272個(gè)BP分類其中與細(xì)胞周期和有絲分裂相關(guān)的“MPHASE”“CELLCYCLEPROCESS”“CELLCYCLEPHASE”“CELLCYCLE”“MITOTICCELLCYCLE”“MPHASEOFMITOTICCELL”“MITOSIS”“NUCLEARDIVISION”和“GANELLEFISSION”等10個(gè)BP分類EASESCE最低均870個(gè)上調(diào)基因參與82個(gè)MF分類其中主要涉及基因和蛋白結(jié)合活性如“ADENYLNUCLEOTIDEBINDING”“ATPBINDING”“NUCLEOSIDEBINDING”“PURINENUCLEOSIDEBINDING”和“NUCLEOTIDEBINDING”的EASESCE得分最低均利用“KEGGPATHWAY”“BIOCARTA”和“REACTOME”數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行PATHWAY分析顯示當(dāng)EASESCE將上調(diào)和下調(diào)差異表達(dá)基因涉及的生物學(xué)功能進(jìn)行“FUNCTIONALANNOTATIONCLUSTERING”分析結(jié)果顯示上調(diào)基因涉及的生物學(xué)功能分類聚集為73個(gè)集合其中ENRICHMENTSCE分?jǐn)?shù)最高的功能集合主要涉及細(xì)胞周期和細(xì)胞分裂下調(diào)基因涉及的生物學(xué)功能分類聚集為71個(gè)集合ENRICHMENTSCE分?jǐn)?shù)最高的功能集合主要涉及細(xì)胞凋亡。利用STRINGGENERANKPATHWAY及GO分類等生物信息學(xué)軟件綜合分析差異表達(dá)基因并按照基因的權(quán)重度排序分選出排序前100位差異表達(dá)基因其中上、下調(diào)基因各50個(gè)。對(duì)此100個(gè)基因進(jìn)行生物學(xué)功能分析及預(yù)測(cè)上調(diào)基因IGF1GOT2GOT1AURKBCDK2AURKABRCA1PLK1KIF20AKIF18B等主要參與“CELLCYCLE”“MITOSIS”“PROTEINBIOSYNTHESIS”“CHROMOSOMESEGREGATION”等生物學(xué)過程上調(diào)基因E2F1PTPN11PIK3R3PLCG2下調(diào)基因FOSPXNPRKCQFYNZAP70PROK2FCN1HCK等則與腫瘤相關(guān)信號(hào)通路密切相關(guān)如“P53PATHWAY”“ANGIOGENESIS”“VEGFSIGNALINGPATHWAY”“FGFSIGNALINGPATHWAY”“IGFPATHWAYPROTEINKINASEBSIGNALINGCADE”等下調(diào)基因CD3GCD3DCD247S100A8CD4GZMAITKCLUGZMHGZMK等主要與細(xì)胞凋亡、機(jī)體免疫調(diào)節(jié)、應(yīng)激等生物學(xué)過程有關(guān)如“APOTOSIS”“TBCELLACTIVATION”“IMMUNESYSTEMPROCESS”“RESPONSETOSTIMULUS”等。其中部分基因如E2F1PLK1PTPN11FOSIGF1CDK2等參與多種生物學(xué)行為。3綜合信號(hào)通路、基因生物學(xué)分類、基因間相互作用分析與預(yù)測(cè)結(jié)果提示EBV可上調(diào)宿主細(xì)胞E2F1PLK1BIRC5等調(diào)控細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡上調(diào)宿主細(xì)胞PTPN11等促進(jìn)腫瘤血管生成與分化下調(diào)宿主細(xì)胞FYN等降低宿主細(xì)胞免疫功能。4實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示經(jīng)內(nèi)參校正后與正常人淋巴細(xì)胞相比E2F1PTPN11PLK1BIRC5轉(zhuǎn)錄水平在EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞表達(dá)上調(diào)FYN轉(zhuǎn)錄水平在轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞表達(dá)下調(diào)結(jié)果與基因芯片檢測(cè)結(jié)果一致。結(jié)論1首次構(gòu)建了正常人淋巴細(xì)胞和體外EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞的差異基因表達(dá)譜首次發(fā)現(xiàn)正常淋巴細(xì)胞和轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞的宿主細(xì)胞基因表達(dá)模式存在明顯差異。2表明EBV轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞是一個(gè)多基因參與多通路涉及、病毒基因與宿主基因相互作用的過程。推測(cè)EBV主要通過促進(jìn)細(xì)胞周期和阻礙宿主免疫功能誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化。3推測(cè)E2F1PLK1PTPN11BIRC5FYN是EBV誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵分子其中E2F1可能在細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、端粒末端轉(zhuǎn)移酶活性等途徑中具有中樞作用。

簡(jiǎn)介：西南大學(xué)碩士學(xué)位論文人乳頭瘤病毒11型全基因組轉(zhuǎn)基因小鼠基因元件的設(shè)計(jì)與構(gòu)建姓名張一申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)基礎(chǔ)獸醫(yī)指導(dǎo)教師黎曉敏20070601西南大學(xué)碩士學(xué)位論文基因E6的轉(zhuǎn)錄水平。研究結(jié)果1用核酸凝膠電泳和測(cè)序的方法驗(yàn)證所構(gòu)建的質(zhì)粒C與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的相符。2轉(zhuǎn)染入角質(zhì)形成細(xì)胞后實(shí)驗(yàn)組觀察到熒光表達(dá)。3RTPCR檢測(cè)HPVLLE6在轉(zhuǎn)錄水平上的表達(dá)為陽性。4轉(zhuǎn)染的角質(zhì)形成細(xì)胞和對(duì)照組的角質(zhì)形成細(xì)胞相比，傳代次數(shù)增加了3倍。結(jié)論體外初步檢驗(yàn)表明，構(gòu)建的序列保留了野生型HPVLL的致病特點(diǎn)，并且CRE／LOXP系統(tǒng)能夠在細(xì)胞內(nèi)將HPVLL切割為游離狀態(tài)，同時(shí)使熒光蛋白有效表達(dá)。因此，在質(zhì)粒C上的這段序列具備了制作HPVLL轉(zhuǎn)基因小鼠病理模型的潛力。關(guān)鍵詞HPVLL轉(zhuǎn)基因CRC／LOXP可控表達(dá)Ⅱ

簡(jiǎn)介：流感作為一種常見病和多發(fā)病對(duì)人類健康危害極大，而目前臨床用于治療乙肝的藥物療效卻不是十分讓人滿意。CLEVUDINE具有顯著抗HBV活性同時(shí)沒有明顯的毒性，尤其是它對(duì)病毒的持續(xù)抑制作用可以保持至停藥后6個(gè)月，這是其它抗乙肝病毒藥物無法相比的。另外和其它抗乙肝藥物聯(lián)合使用可以使抗乙肝病毒療效提高。因此CLEVUDINE最近被認(rèn)為是治療慢性乙肝病毒感染的臨床候選藥物之一。已報(bào)道的CLEVUDINE的合成方法主要有三種，在參考文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，本課題擬訂了一條較為合理的合成路線，并對(duì)合成進(jìn)行了工藝改進(jìn)，以新型氟代劑ET3N3HF取代KHF2和48％HF進(jìn)行氟代反應(yīng)，使反應(yīng)條件大大改善。本課題還在減少反應(yīng)步驟，提高了反應(yīng)收率方面進(jìn)行了嘗試，最終，以左旋核糖為原料經(jīng)9步反應(yīng)合成目標(biāo)化合物CLEVUDINE，反應(yīng)總收率為5％。

簡(jiǎn)介：作為近幾年興起于西方的性別研究的重要一支，性別操演理論對(duì)改變?nèi)藗冴P(guān)于性別本質(zhì)的深層思維方式和認(rèn)知模式具有重要的戰(zhàn)略意義。1990年朱迪斯巴特勒在性別麻煩中首次提出了性別操演理論，其根本目的在于解構(gòu)性別的本體概念，同時(shí)將性別建構(gòu)為流動(dòng)性的和過程性的身份。不論是在性別研究領(lǐng)域，還是在女性主義文學(xué)領(lǐng)域，性別操演理論均起到了顛覆性的作用。本論文旨在探索運(yùn)用性別操演理論分析性別、種族、文化等邊緣身份話題的適用性，同時(shí)借用紫色、骨、孫行者、中國(guó)娃娃等美國(guó)少數(shù)族裔文本研究性別操演理論在文學(xué)文本中的適用性和局限性，進(jìn)一步推進(jìn)性別操演理論的研究。本論文分為五個(gè)部分第一部分介紹了朱迪斯巴特勒和她提出的性別操演理論以及其他學(xué)者對(duì)性別操演理論的相關(guān)研究，主要介紹了兩種相關(guān)理論，即身份扮演理論和社會(huì)角色構(gòu)建論，解釋了一些對(duì)于性別操演理論的誤解，澄清理論本質(zhì)。第二部分借用文學(xué)文本紫色分析性別操演理論對(duì)性別身份認(rèn)知的指導(dǎo)作用。在闡述黑人女性茜莉在惡劣的社會(huì)環(huán)境下進(jìn)行自我性別認(rèn)知的過程的同時(shí)，進(jìn)一步闡述男性同樣受到社會(huì)規(guī)范的限制和壓抑，從而推翻了傳統(tǒng)性別的二元對(duì)立模式，提出性別消解才是解決性別身份認(rèn)知問題的有效方式。第三部分將性別操演理論從性別的單一范疇拓展到種族范疇。利用性別與種族問題的相關(guān)性將操演理論運(yùn)用到對(duì)種族問題的探究。借助亞裔美國(guó)作家伍慧明的骨、湯亭亭的孫行者和黃準(zhǔn)美的中國(guó)娃娃，全方位探討個(gè)人種族身份扮演和群體種族身份扮演等問題，開啟種族身份認(rèn)知的新視角。第四部分闡述性別操演理論對(duì)于當(dāng)代性別研究的進(jìn)一步發(fā)展。認(rèn)為性別操演理論的提出拓展了性別研究范疇，區(qū)分了性別的規(guī)定性和述行性差異，探索了性別與其他邊緣身份研究的動(dòng)態(tài)關(guān)系。第五部分對(duì)全文進(jìn)行了總結(jié)。性別操演理論作為當(dāng)代西方性別研究的重要一支，對(duì)傳統(tǒng)研究范疇的固化模式進(jìn)行了反思，同時(shí)彌補(bǔ)了其對(duì)于其他邊緣群體的忽視，推動(dòng)了當(dāng)前西方性別研究的進(jìn)一步發(fā)展。本論文將性別操演理論從單一的性別范疇進(jìn)一步延伸到種族身份認(rèn)知的探究中，擴(kuò)大了性別操演理論的適用范圍，同時(shí)運(yùn)用性別操演理論研究非洲族裔和亞洲族裔女性文學(xué)文本，為族裔文學(xué)提供了新的視角。此外，在對(duì)四部族裔作品進(jìn)行并置分析的同時(shí)，試圖發(fā)現(xiàn)少數(shù)族裔的群體身份特征。促進(jìn)少數(shù)族裔的個(gè)人身份認(rèn)知和集體身份認(rèn)知。