簡介：漢坦病毒HANTAANVIRUSHV屬于布尼亞病毒科BUNYAVIRIDAE漢坦病毒屬HANTAVIRUS是腎綜合征出血熱HEMRHAGICFEVERWITHRENALSYNDROMEHFRS的病原體。HFRS是嚴(yán)重危害人體健康的急性病毒性傳染病臨床上尚無特異性治療藥物疫苗的研制及應(yīng)用是預(yù)防和控制其流行的重要措施。HV病毒的核酸為單股負(fù)鏈RNA基因組由L、M、S三個片段組成分別編碼病毒的聚合酶、包膜糖蛋白G1、G2和核衣殼蛋白NP。M片段編碼的G1、G2包膜糖蛋白含有病毒的毒力位點、中和性抗原及型特異性抗原位點等多種抗原決定簇因此M片段是一個很好的疫苗候選抗原1。根據(jù)血清學(xué)檢查引起HFRS的病原體主要是漢坦病毒的兩個亞型即漢灘病毒HTNV和漢城病毒SEOV但是近年來出現(xiàn)了很多病毒變異株。傳統(tǒng)疫苗制作過程復(fù)雜、時間長其保護作用比較單一、造價高且有病毒毒力“返祖”現(xiàn)象多抗原組分可誘發(fā)自身免疫性疾病等缺點所以需要研制一種新型高效疫苗。核酸疫苗具有制作過程簡單經(jīng)濟可靠、不接觸病原體、可以精選所需要的基因片段、不表達(dá)無關(guān)抗原等優(yōu)點給HV疫苗的研制提供了新的思路。針對目前一般核酸疫苗免疫原性較低及HV混合感染的現(xiàn)象我們在實驗中使用兩個啟動子、以HTNV和SEOV的M2基因片段為抗原基因利用反向疫苗學(xué)技術(shù)構(gòu)建兩個啟動子頭尾相接的順式和頭頭相接的反式雙價真核表達(dá)載體觀察兩個載體能否在真核細(xì)胞中表達(dá)及其對動物的免疫效果。同時探討兩個啟動子及啟動子的排列方式對其免疫活性是否有影響以期構(gòu)建出一種多基因高效疫苗為HV疫苗的研制奠定基礎(chǔ)。方法一、構(gòu)建PETBLUE2CM1重組表達(dá)載體一真核表達(dá)元件的獲取參照載體構(gòu)建方法設(shè)計引物擴增真核表達(dá)元件即CMV啟動子、多克隆酶切位點及POLYA部分將此真核表達(dá)元件命名為CM1。利用PCR在CM1的兩端添加合適的酶切位點根據(jù)添加酶切位點的順序不同將片段分為正向和反向稱為正向CM1和反向CM1。將PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳后回收20℃保存。二PETBLUE2CM1載體的構(gòu)建將得到的正向CM1和反向CM1分別插入PETBLUE2載體中構(gòu)建PETBLUE2正向CMI和PETBLUE2反向CMI重組載體。酶切鑒定后進(jìn)行序列分析。二、兩型M2基因片段的獲取應(yīng)用反向疫苗學(xué)技術(shù)對兩性M2基因片段的抗原決定簇、跨膜蛋白等進(jìn)行預(yù)測分析確定PCR擴增的片段。設(shè)計兩對引物擴增HTNV76118M2和SEOVSEOULBJHD01M2片段簡稱SEOM2并利用PCR在基因的兩端添加CPG序列和合適的酶切位點。瓊脂糖凝膠電泳回收后20℃保存。三、構(gòu)建PETBLUE2正向反向CM176118M2載體按載體構(gòu)建的常規(guī)方法將76118M2片段分別插入PETBLUE2正向CM1和PETBLUE2反向CM1重組表達(dá)載體中構(gòu)建PETBLUE2正向CM176118M2和PETBLUE2反向CM176118M2載體。酶切鑒定后進(jìn)行序列分析。四、單質(zhì)粒單啟動子載體的構(gòu)建一PCDNA3176118M2載體的構(gòu)建將76118M2片段插入真核表達(dá)載體PCDNA31中構(gòu)建PCDNA3176118M2載體。酶切鑒定后進(jìn)行序列分析。二PCDNA31SEOM2載體的構(gòu)建、將SEOM2片段插入真核表達(dá)載體PCDNA31中構(gòu)建PCDNA31SEOM2載體。酶切鑒定后進(jìn)行序列分析。五、單質(zhì)粒順式和反式雙啟動子雙基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建將PETBLUE2正向CM176118M2和PETBLUE2反向CM176118M2載體中含真核表達(dá)元件和目的基因的部分分別插入PCDNA31SEOM2中構(gòu)建單質(zhì)粒順式PCDNA31SEOM2CM176118M2和反式PCDNA31SEOM2CM176118M2真核表達(dá)載體。六、雙啟動子雙基因載體在真核細(xì)胞中的瞬時表達(dá)將構(gòu)建的單質(zhì)粒順式和反式雙啟動子雙基因載體轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞VERO6培養(yǎng)48小時后用間接免疫熒光檢測其在真核細(xì)胞中的表達(dá)情況。七、雙啟動子雙基因載體在動物體內(nèi)免疫活性的檢測一動物免疫取90只小鼠隨機分為6組分別注射PCDNA31、PCDNA3176118M2、PCDNA31SEOM2、PCDNA3176118M2與PCDNA31SEOM2聯(lián)合、順式PCDNA31SEOM2CM176118M2和反式PCDNA31SEOM2CM176118M2質(zhì)粒質(zhì)粒通過肌肉注射兩周以后加強免疫一次共免疫三次。二血清特異性抗體及細(xì)胞因子的檢測初次免疫后1D、7D、17D、31D、60D、90D后收集各免疫組小鼠的血清及脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液用ELISA法檢測各組血清中特異性IGG抗體、脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子IFNΓ、IL4及IL10水平。用MTT法檢測脾淋巴細(xì)胞增殖水平從而判斷質(zhì)粒對動物的免疫效果。結(jié)果一、PETBLUE2重組片段載體的鑒定一真核表達(dá)元件的獲取PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后獲得大小約為1000BP的條帶與預(yù)期結(jié)果一致。二PETBLUE2重組片段載體的鑒定用XHOL單酶切PETBLUE2正向CM1和PETBLUE2反向CM1重組片段載體酶切產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后前者得到兩個大小約為4200BP和350BP的條帶后者獲得兩個大小約為3700BP和850BP的條帶與預(yù)期結(jié)果一致經(jīng)序列分析所得的結(jié)果與GENEBALLK中相應(yīng)的核苷酸序列比對同源性達(dá)100％。二、雙型M2基因片段的獲取PCR擴增的76118M2產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后獲得大小約1300BP條帶擴增SEOM2獲得大小約10001BP條帶與預(yù)期結(jié)果一致。三、PETBLUE2正反向CM176118M2載體的鑒定所得的正向和反向載體經(jīng)XHOL單酶切后瓊脂糖凝膠電泳前者獲得兩個大小約為5500BP和350BP的條帶后者獲得兩個大小約為3700BP和2100BP的條帶與預(yù)期結(jié)果一致。經(jīng)序列分析所得的結(jié)果與GENEBANK中相應(yīng)的核苷酸序列比對同源性達(dá)100％。四、單質(zhì)粒單啟動子載體的鑒定一PCDNA3176118M2載體的鑒定所得的載體經(jīng)PSTI單酶切后瓊脂糖凝膠電泳獲得大小約為5200BP和1000BP的兩個條帶與預(yù)期結(jié)果一致。經(jīng)序列分析所得的結(jié)果與GENELBANK中相應(yīng)的核苷酸序列比對同源性達(dá)100％。二PCDNA31SEOM2載體的鑒定所得的載體經(jīng)PSTI和ECI雙酶切鑒定后瓊脂糖凝膠電泳獲得兩條大小約為4200BP和1900BP的條帶與預(yù)期結(jié)果一致。經(jīng)系列分析所得的結(jié)果與GENEBDANK中相應(yīng)的核苷酸序列比對同源性達(dá)100％。五、順式和反式雙啟動子雙基因載體的酶切鑒定單質(zhì)粒順式和反式雙啟動子雙基因載體經(jīng)XHOI單酶切后瓊脂糖凝膠電泳前者獲得兩個大小約為6500BP和1800BP的條帶后者獲得兩個大小約為4700BP和3600BP的條帶與預(yù)期結(jié)果一致。六、雙啟動子雙基因真核表達(dá)載體在真核細(xì)胞中的瞬時表達(dá)將構(gòu)建的兩種載體轉(zhuǎn)染VERO6細(xì)胞后均可在細(xì)胞漿中觀察到綠色熒光說明兩個重組質(zhì)粒都能在真核細(xì)胞VERO6中正常表達(dá)。七、雙啟動子雙基因真核表達(dá)載體在動物體內(nèi)的免疫活性檢測ELISA結(jié)果顯示雙啟動子雙基因載體免疫組小鼠產(chǎn)生的抗體和細(xì)胞因子水平明顯高于其他四組差異顯著P結(jié)論1、成功構(gòu)建了漢坦病毒順式和反式雙啟動子雙基因真核表達(dá)載體。2、與單啟動子單基因載體相比雙啟動子雙基因載體誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生的細(xì)胞免疫和體液免疫效應(yīng)更好。3、與兩個單啟動子單基因載體聯(lián)合免疫相比單質(zhì)粒雙啟動子雙基因載體引起的免疫效應(yīng)更好。4、與反式雙啟動子雙基因載體相比順式雙啟動子雙基因載體免疫活性更好。

簡介：目的①獲取馬鞍山市吸毒者、性病門診患者、孕婦、有償供血者艾滋病、梅毒、丙肝、乙肝感染現(xiàn)狀②了解上述人群及馬鞍山市大學(xué)生對艾滋病的認(rèn)知情況為在上述人群中開展行為干預(yù)提供依據(jù)結(jié)論①馬鞍山市性病門診患者和吸毒者梅毒感染率較高吸毒者和有償供血者丙肝感染率較高并存在感染HIV性病的高危因素艾滋病在吸毒人群中有流行跡象應(yīng)加強對吸毒、性病等高危人群的監(jiān)測和行為干預(yù)②馬鞍山市上述高危人群和脆弱人群對艾滋病防治知識有一定的認(rèn)識但其認(rèn)知情況仍不全面和深入還存在感染HIV性病的高危因素在上述人群中開展健康教育與行為干預(yù)不僅必要而且必須

簡介：該文分三部分第一部分RHIFN、IFNΑ和IFNΑ、IFNΑ突變體抗病毒效應(yīng)的對比分析及IFNΑ誘導(dǎo)MXA的表達(dá)目的為了進(jìn)一步研究不同亞型不同品牌基因工程干擾素的抗病毒效應(yīng)及其IFNΑ的抗病毒機理結(jié)論進(jìn)口和國產(chǎn)不同品牌的IFN和IFNΑ上述3種病毒抗病毒作用具有同等效果FNΑ突變體抗病毒較FNΑ無明顯的差別FNΑ可誘導(dǎo)WI38細(xì)胞產(chǎn)生MXA抗病毒蛋白第二部分RHIFN、IFNΑ和IFNΑ、IFNΑ突變體對腫瘤細(xì)胞生長的抑制作用目的為了比較不同品牌不同亞型基因工程Α干擾素及IFNΑ或FNΑ突變體的抗腫瘤效應(yīng)結(jié)論進(jìn)口和國產(chǎn)的不同品牌IFN、IFNΑ對上述五種各瘤細(xì)胞株均有較明顯的生長抑制效應(yīng)而且抑制百分率均相近IFNΑ和IFNΑ也均有明顯的腫瘤生長抑制作用IFNΑ突變體的抗腫瘤生長制率較IFNΑ可提高57﹪第三部分IFN或IFNΑ基因工程干擾素對NK活性的影響及IFNΑ、IFNΑ突變體促NK活性的對比分析目的為了研究不同品牌IFN或IFNΑ免疫調(diào)節(jié)作用及IFNΑ和IFNΑ突變體的促NK活性的對比研究結(jié)論進(jìn)口和國產(chǎn)的不同品牌IFN和IFNΑ均具有同等的免疫調(diào)節(jié)功效IFNΑ突變體的NK殺傷效率應(yīng)較IFNΑ可提高5﹪左可

簡介：目的腎綜合征出血熱是由布尼亞病毒科漢坦病毒屬中某些病毒引起的以發(fā)熱、出血和急性腎功能損傷為特征的急性病毒性傳染病血清學(xué)調(diào)查證實在五大洲都有漢坦病毒疫源地存在因此漢坦病毒的血清學(xué)檢測一直受到人們的重視分子生物學(xué)技術(shù)使人工體外生產(chǎn)病毒特異蛋白成為可能并可在此基礎(chǔ)上建立新的血清學(xué)方法用于臨床患者的實驗室輔助診斷我們采用基因工程技術(shù)將漢坦病毒S基因克隆并使其在大腸桿菌中獲得了表達(dá)以親和層析法純化的融合蛋白為抗原建立間接ELISA方法用于臨床患者血清學(xué)檢測獲得了滿意的結(jié)果結(jié)論1我們成功地克隆并構(gòu)建了原核表達(dá)載體PGEX6P1HANS2GLUTATHIONESEPHAROSE4B柱層析法是較為理想的蛋白純化方法3用重組的NP作為抗原用于出血熱病人的血清學(xué)診斷有著良好的應(yīng)用前景

簡介：SARSCOV是一種新型的單鏈RNA人畜共患病病毒，該病毒主要通過近距離氣溶膠和親密接觸傳播，在家庭和醫(yī)院有顯著的聚集現(xiàn)象?？諝鈧鞑ジ腥臼芏喾N因素制約，其中最重要的是SARSCOV在氣溶膠狀態(tài)下的存活力，以及環(huán)境的溫度、濕度、紫外線和空氣中各種化學(xué)污染物質(zhì)。本研究旨在通過對SARS病人定點收治醫(yī)院小湯山醫(yī)院、309醫(yī)院室內(nèi)空氣SARSCOV污染的研究，為更好地控制SARSCOV的空氣傳播感染提供實驗依據(jù)。實驗采用FAⅡ型空氣微生物采樣器在醫(yī)院病房區(qū)、病房陽臺、內(nèi)走廊、排風(fēng)扇和護士站五個地點持續(xù)采樣，之后進(jìn)行空氣樣本的洗脫、VEROE6細(xì)胞培養(yǎng)、RTPCR及序列測定。其結(jié)果病房區(qū)、病房陽臺、內(nèi)走廊、排風(fēng)扇和清潔區(qū)五個地點均有SARSCOVRNA的檢出，其中以小湯山醫(yī)院排氣口下風(fēng)向的陽性率最高583％，護士站相對較低250％；從309醫(yī)院一名確診為SARS病人病房內(nèi)的空氣樣本中分離出一株活性SARSCOV稱之為LK309株，并穩(wěn)定傳代；與恢復(fù)期SARS病人血清免疫熒光染色陽性，RTPCR擴增產(chǎn)物的測序結(jié)果顯示LK309株與已知SARSCOV的同源性在98％以上。相關(guān)數(shù)據(jù)表明SARS病人定點收治醫(yī)院空氣中SARSCOV的污染比較嚴(yán)重，急性后期的病人仍然從呼吸道大量排毒；但在病房室內(nèi)外的空氣中幾乎沒有檢測到活的SARSCOV，初步評估認(rèn)為，SARS病人病房采取通風(fēng)和消毒的措施對降低室內(nèi)污染程度是非常有益的；而空氣消毒和環(huán)境因素對SARS病毒的存活有較大的影響，故SARS病人病房排出的空氣對周邊環(huán)境造成的危害很小。針對SARSCOV空氣分離株LK309，根據(jù)引物步移法的原則，通過覆蓋全基因組的75對特異型引物對LK309株進(jìn)行全序測定。參考BJ01株、初次測序結(jié)果和驗證結(jié)果重新得到了LK309的全基因組序列長度為29，716BP，序列GC平均含量為408％，共預(yù)測了14個CDS和三段非編碼區(qū)5UTR“243BP”、3UTR“344BP”以及基因間區(qū)域“184BP”，所預(yù)測的基因編碼為“SARSCOVGP”系列。3端非編碼區(qū)的二級結(jié)構(gòu)預(yù)測顯示，可形成冠狀病毒中高度保守的發(fā)卡型“偽結(jié)”，包括兩個可交互作用的莖環(huán)結(jié)構(gòu)，可能在病毒入侵宿主的過程中起到重要作用。和其他17株病毒序列相比較，共有8個SNP位點，全部位于編碼區(qū)；通過CLUSTALW構(gòu)建進(jìn)化樹分析圖，與其它已知序列的同源率998％以上。應(yīng)用SEQUIN軟件已向GENBANK提交，ACCESSIONNUMBER為AY595412。為了方便對未知樣本中病毒的基本特征進(jìn)行快速檢測，本研究在WINDOWS系統(tǒng)下，嘗試建立以APACHEPHPMYSQL組合為基礎(chǔ)的數(shù)據(jù)庫。通過查詢界面、二次查詢界面可以對數(shù)據(jù)庫進(jìn)行有效的訪問和管理。

簡介：點擊查看更多乙型肝炎病毒S區(qū)、前C-C區(qū)基因變異與機體特異性免疫反應(yīng).pdf精彩內(nèi)容。

簡介：南開大學(xué)碩士學(xué)位論文含有EB病毒相關(guān)抗原的重組蛋白疫苗的構(gòu)建和表達(dá)姓名冷勁申請學(xué)位級別碩士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師呂亦晨20040501含有EB稍毒柜美抗穗馳重綴餐白疰營瓣鞫建幫衰遮ABSTRACTEPSTEINBAXRVIRUSEBVINFECTIONISCLOSELYRELATEDWITHSEVERALMALIGNANTEPITHELIALANDLYMPHATICTUMORS，SUCHASNASOPHARYNGEALCARCINOMANPC，BTTRKITT’SLYMPHOMABL，HODGKIN’SDISEASEHDANDMALIGNANTTYMPHOMASINIMMTMEDEFICIENTPATIENTSINNPC，EBVONLYSELECTIVELYANDSTEADILYEXPRESSESAFEWLATENTNUCLEARANTIGENSANDMEMBRANEPROTEINSEBNALNUCLEARANTIGEN1，LMPL1ATENTMEMBRANEPROTEIN1ANDLMP21ATENTMEMBRANEPROTEIN2HOWEVERLMP1CANTRANSFORMHUMANLYMPHOEYTESANDEPITHELIAINTOMALIGNANCYTHEREFORE，EBNAL峭1ANDLMP2P2WERECHOSENTOBETHETARGETANTIGENSFORTHEDEVELOPMENTOFATHERAPEUTICPROTEINVACCINEAGAINSTNPCBASEDON也ECELLMEDIATEDIMMUNITYCONSIDERINGTHEPOSSIBLEDIFFICULTIESOFEXPRESSINGTHEFULL一LENGTHLMP2PROTEINTHESUBCLONESP2251，P2254ANDP2345WEREPREPAREDINADDITIONTOTHECLONEOFTHEFULL1ENGTHLMP2GENEFOREBNAL，THEREPEATSEQUENCEOFGLYALAINTHEPROTEINWASBYPASSEDANDTHESUBCLONESEL一169ANDEL564BASEDONTHECODINGSEQUENCESOFTHENTERMINALANDCTERMINALOFEBNAIPROTEINWERERESPECTIVELYPREPAREDBESIDES，TOMAKEUSEOFTHEDELIVERYFUNCTIONOFTHEANTHLAXTOXINLETHALFACTOR’SLFN／A3FRAGMENT，THEABOVEANTIGENGENEFRAGMENTSWEREFUSEDWITHLFN／A3INTOTHEPETT5BEXPRESSIONPLASMIDSFORPOSSIBLEEXPRESSIONINTHEECOTIHOSTSTRAINSBL21DE3PLYSSANDBL21DE3CODONPLUSTHERECOMBINANTFUSIONPROTEINSOFLFNP2251A3P2251，LFNE1169，H3E1169，LFNE1564ANDA3EL一564WEREOBTAINED，EXAMINEDBYWESTERNBLOTTINGANDPURIFIEDINSMALLSCALE，WHICHLAIDAFOUNDATIONFORTHEFUTUREDEVELOPMENTOFTHEVACCINE。KEYWORDSEPSTEINBOARVIRUS；LMP2；EBNAL；LFN／A3；PETL5B2

簡介：自殺的流行病學(xué)研究顯示，老年人的自殺率是所有年齡群體中最高的，無論是中國還是世界其他各國。然而，相比于社會對青少年自殺的熱切關(guān)注，老年人群的高自殺率并沒有得到相應(yīng)的社會關(guān)注度。在眾多的影響因素中，社會公眾對老年自殺的態(tài)度，包括老年人自己對自殺的態(tài)度，非常重要。研究公眾對老年人自殺的態(tài)度的重要性表現(xiàn)為第一，態(tài)度是行為的重要預(yù)測變量第二，態(tài)度可以通過心理行為方式進(jìn)行改變第三，態(tài)度會影響社會資源的投入度。因此，本研究試圖探討社會公眾及老年群體自身對老年自殺的態(tài)度，及認(rèn)知教育改變態(tài)度的可行性分析。研究在杭州市區(qū)進(jìn)行，為獲得公眾對老年自殺態(tài)度的特點，將公眾對年輕人自殺的態(tài)度納入差異性比較。研究隨機選擇了4個年齡組15～19歲161人，20～34歲210人，35～59歲207人及60歲以上198人的公眾進(jìn)行自殺態(tài)度的量表調(diào)查和半結(jié)構(gòu)性訪談。所有年齡組的人都被近乎平均地分為兩組，分別調(diào)查他們對年輕人自殺的態(tài)度（15～19歲79人，20～34歲106人，35～59歲105人及60歲以上96人）和對老年人自殺的態(tài)度（15～19歲82人，20～34歲104人，35～59歲102人及60歲以上102人）。描述性統(tǒng)計被用以描述各個年齡群體的態(tài)度在各個維度上的表現(xiàn)。T檢驗和方差分析被用以比較各年齡群體的態(tài)度差異。在上述統(tǒng)計的基礎(chǔ)上，再結(jié)合針對54名老年人的半結(jié)構(gòu)化訪談，專門性了解他們對老年自殺的態(tài)度以及他們所認(rèn)識的老年人的社會價值，結(jié)合現(xiàn)有的態(tài)度改變和干預(yù)的研究成果，進(jìn)而整理出初步的認(rèn)知教育方案。通過專家討論，初步形成針對老年自殺，公眾態(tài)度的認(rèn)知教育干預(yù)方案，然后對57名非老年被試和19名老年被試分別進(jìn)行認(rèn)知教育干預(yù)，了解干預(yù)改變公眾對老年自殺態(tài)度的可行性和有效性。量表和訪談的統(tǒng)計結(jié)果表明，公眾對老年自殺的態(tài)度特點如下1相比年輕人自殺，公眾認(rèn)為老年自殺的社會重要性程度較低。老年人更歧視老年自殺，且對老年自殺預(yù)防持相對不肯定態(tài)度2大部分被試對自殺學(xué)基本知識不了解，尤其老年被試3在自殺歸因方面，87％的老年人將“身體問題”列在首位，且近13的老年人不認(rèn)可老年人自身的社會價值。調(diào)查結(jié)果顯示公眾的態(tài)度不利于老年自殺的識別和預(yù)防，對此態(tài)度進(jìn)行干預(yù)，使其發(fā)生積極的正面的變化，有利于從社會環(huán)境方面為老年自殺的預(yù)防工作提供良好的氛圍。基于公眾對老年自殺態(tài)度的認(rèn)知教育干預(yù)結(jié)果顯示，對非老年被試，干預(yù)后有2個態(tài)度維度發(fā)生顯著性變化，即認(rèn)為老年自殺的預(yù)防難度下降，以及老年自殺未遂和死亡不同。而對老年被試，僅在預(yù)防難度態(tài)度維度上發(fā)生顯著性變化。此外，干預(yù)后兩組被試在自殺學(xué)基本知識的正確回答率大幅上升，特別是非老年被試。干預(yù)結(jié)果顯示這種干預(yù)從短期來看有積極效果，特別在自殺學(xué)基本知識的普及上。不過，這種效果主要源自于被試（社會普通人群）對自殺學(xué)相關(guān)知識上的進(jìn)一步了解，在態(tài)度的認(rèn)知層面上發(fā)生一定程度的變化，而對于如何改變態(tài)度的情感和行為傾向維度，則有待于進(jìn)一步研究。另外，本干預(yù)屬于探索性研究，老年被試樣本容量較少，且考慮到方案實施的現(xiàn)實性和可操作性，在干預(yù)時間、方式和測量手段上有一定的局限性，但可為后續(xù)基于老年自殺預(yù)防的態(tài)度干預(yù)研究提供前期鋪墊。

簡介：點擊查看更多腺相關(guān)病毒介導(dǎo)血小板源性生長因子治療急性心肌梗死的實驗研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文老年輕度認(rèn)知障礙發(fā)病機制、影像學(xué)改變及治療的相關(guān)研究姓名宋守君申請學(xué)位級別碩士專業(yè)老年醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師王傳馥2001410復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士研究生畢業(yè)論文中文摘要321名老年人MCI120名，對照201名的血壓、血糖、血尿酸水平測定了234名老年人MCI84名，對照150名的12功能包括外周血管阻力、心輸出量、心排指數(shù)、每搏射血量、射血時間、心率；并對322名老年人MCI123名，對照199名進(jìn)行眼底動脈硬化情況檢查，對照其相應(yīng)的MMSE得分，研究動脈硬化與認(rèn)知功能的相關(guān)性。結(jié)果表明1兩組對象TC、LDL、HDL、LPA、眼底檢查、心功能及舒張壓之間存在顯著性差異P005；2動脈硬化的相關(guān)指標(biāo)如TC、LDL、HDL、SVR、SV、ET、舒張壓及眼底檢查即使在控制年齡、性別、文化程度后仍與認(rèn)知功能顯著相關(guān)P60歲及31名健康老年人進(jìn)行左右海馬結(jié)構(gòu)體積測量，并計算其標(biāo)準(zhǔn)化后的平均體積，對照其相應(yīng)的MMSE得分，進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計學(xué)分析處理。結(jié)果顯示1BLCI組與健康對照組海馬結(jié)構(gòu)體積之間差異具有顯著性213019V239022CM3，P005，側(cè)別之間亦無顯著性差異P005。這表明老年MCI患者海馬結(jié)構(gòu)體積較正常人群明顯下降，海馬結(jié)構(gòu)體積測量對區(qū)分MCI與健康人群及早期診斷MCI有重要價值，可作為臨床診斷MCI的重要指標(biāo)?！诘谒牟糠謴?fù)方海蛇膠囊RSC治療老年輕廢認(rèn)知障礙MCI的研究報告

簡介：東南大學(xué)碩士學(xué)位論文乙型肝炎病毒母嬰阻斷的研究姓名余敏敏申請學(xué)位級別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師韓國榮20041220蔓塑查蘭些蘭垡堡塞ASTUDYONMATERNALINFANTILETHEINTERRUPTIONOFTRANSMISSIONOFHBVABSTRACT0BJECTIVE1TOINVESTIGATETHEBESTMATERNALINFANTILEINTERRUPTIONMETHODOFHBM2TOSTUDYTHEMECHANISMANDEFFECTOFINTERRUPTINGINTRAUTERINEINFECTIONOFHBV3TOEVALUATETHEEFFECTOFTWODOESOFHBIGINBLOCKINGINTRAUTERINEINFEETIONOFHBV4TOINVESTIGATETHEMODEOFHBVMOFLYEARAGEOFINFANTSWHOHAVERECEIVEDPROTECTIVEMETHODS5TOEXPLORETHEMECHANISMOFINTRAUTERINEINFECTIONOFHBVMETHODS1COMPARETHESERLLMHBVMFROMBIRTHTO12MONTHSOF977CASESOFINFANTSWHOARCDIVIDEDINTO5GROUPS2126PREGNANTWOMENWITHHBSAGPOSITIVEAREDIVIDEDINTOINTERRUPTINGANDNONINTERRUPTINGINTRAUTERINEINFECTIONGROUPRANDOMLYTHEEFFECTOF2GROUPSISCOMPARED3THEEFFECTOF2KINDSOFDOESOFHBIGINL50CASESOFTLBSAG十／HBEAGPREGNANTWOMENISCOMPARED4OBSERVETHEMODESOFHBVMOF138CASESOFINFANTSINLYEAROLD5TLYMPHOTCYTIECELLSUBGROUPSOF90INFANTSISDETECTEDBYFLOWCYTOMETRYANDISCOMPAREDBETWEENTHEINTRAUTERINEINFECTIONMADTHENONINTRAUTERINEINFECTIONGROUPRESULT。。1THEINCIDANCEOFPROTECTIONISHIGHESTOTHERWISETHEINCIDANCEOFIMMUNIZATIONFAILUREISLOWESTINTHEINTRAUTERINEINTERRUPTIONGROUP21THEINCIDANCEOFINTRAUTERINEANDCHRONICITYHBVINFECTIONINTHEINFANTSOFTHESTUDYGROUPISMUCHLOWERTHANTHATOFTHECONTROLGROUP3THEDETECTIONRATEOFANTIHBSINNEWBORNSOFSTUDYGROUPARESIGNIFICANTLYHIGHERWHILETHEINCIDENCEOFINTRAUTERINEHBVINFECTIONARELOWERTHANTHATINTHECONTROLGROUP4THEREARE6MODESOFHBVMINTOTAL5THECD4TLYMPHOCYTICCELLCOUNTISLOWERWHILETHECD8TLYMPHOCYTICCELLCOUNTISHIGHERINTHEINTRAUTERINEINFECTIONGROUPTHANTHATINTHECONTROLGROUPCONCLUSION一1INTRAUTERINEINTERRUPTIONCOMBININGINMAANITYOFINFANTSISTHEBESTONEAMONGTHE5METHODS2THEEFFECTOFINTERRUPTINGINTRAUTERINEGROUPISBETTERTHANTHATOFCONTROLGROUP3LARGEDOESOFHBIGTHERAPYONPREGNANTWOMENOFHBSAG十／HBEAGMAYPREVENTINTRAUTERINEINFECTIONEFFECTIVELY4EVERYMODEHASDIFFERENTCLINICALNLEANANDALLINFANTSSHOULDBEFOLLOWEDUPTOFINDLIVERLESIONINTIME一5THEINTRAUTERINEINFECTIONOFHBVMAYBERELATEDTOLOPSIDEDDEVELOPMENTOFTLYMPHOTCYTICCELLSUBGROUPSIKEYWORDS】HEPATITISBVIRUSVACCINEVERTICALTRANSMISSIONINTRAUTERINEINFECTIONMATERNALINFANTILEINTERRUPTIONTLYMPHOTCYTICCELLSUBGROUPII

簡介：第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文重組腺病毒介導(dǎo)反義CMYC基因?qū)θ烁伟┘?xì)胞治療的有效性及安全性研究姓名余昌中申請學(xué)位級別博士專業(yè)人體解剖學(xué)指導(dǎo)教師應(yīng)大君200151因在肝臟細(xì)胞的高效轉(zhuǎn)移。但是，腺病毒載體介導(dǎo)的肝癌基因治療的真正應(yīng)用于臨床，還必需解決臨床安全性問題，即其臨床使用對機體的毒副作用。因此臨床應(yīng)用前對其安全性進(jìn)行評價至關(guān)重要一；，，≈櫪究采用免疫組化法，以檢測CMYC、BEL2癌基因在肝癌組織中表達(dá)情況，探討其在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其在判斷預(yù)后中的價值。采用構(gòu)建成功的ADASMYC，利用反義基因在翻譯水平上阻斷CMYC的過表達(dá)，抑制肝癌細(xì)胞的生長并促使其凋亡，以尋找肝癌基因治療新的有效方法。經(jīng)BEAGLE犬肝動脈、門靜脈途徑注射重組腺病毒介導(dǎo)反義C．MYC基因AD．ASMYC載體，觀測其在體內(nèi)是否能有效轉(zhuǎn)導(dǎo)入正常肝細(xì)胞、持續(xù)時間、體內(nèi)器官分布及毒副作用，以評價ADASMYC治療肝癌的臨床前期安全性。／本研究獲得以下主要結(jié)果、1．原發(fā)性肝癌組織中CMYC蛋白陽性表達(dá)率較高，BCL．2蛋白陽性表達(dá)率雖然較低，但其陽性表達(dá)往往伴隨著CMYC蛋白陽性表達(dá)，二者聯(lián)合檢鋇4有助于判斷肝癌的惡性程度及預(yù)后。2．重組腺病毒介導(dǎo)的反義C．MYC基因ADASMYC滴度較高，可達(dá)到510”PFU／ML，并可高效轉(zhuǎn)導(dǎo)入4種人肝癌細(xì)胞系BEL．7402、QSG．7701、SMMC7721、HCC．9204、人胚11,倍體細(xì)胞2BS及正常人肝細(xì)胞L02細(xì)胞。3．AD．ASMYC能夠引起人肝癌細(xì)胞CMYC、BCL．2RNA及C．MYC、BCL．2蛋白表達(dá)下調(diào)，抑制肝癌細(xì)胞生長和導(dǎo)致肝癌細(xì)胞凋亡。4．C．MYC表達(dá)水平不同的肝癌細(xì)胞系，AD．ASMYE的作用效果不同，與細(xì)胞CMYC表達(dá)水平高低有關(guān)，C．MYC表達(dá)高者治療效果更明顯。說明反義C．MYC基因療法對不同的細(xì)胞類型治療效果有差異性。5．通過兩種肝癌細(xì)胞系BEL．7402、SMMC．7721裸鼠皮下移植瘤的體內(nèi)實驗證實，瘤內(nèi)直接注射ADASMYC治療裸鼠皮下移植肝癌有效。6．經(jīng)犬肝動脈或門靜脈途徑注射AD．ASMYC均可持續(xù)轉(zhuǎn)導(dǎo)至肝細(xì)胞達(dá)3周，病毒可播散至脾臟、腎臟、胃、心臟及皮膚，但對組織器官無明

簡介：貴陽醫(yī)學(xué)院2013屆碩士研究生論文0中國圖書資料分類法分類號R7491單位代碼10660學(xué)號S100427貴陽醫(yī)學(xué)院貴陽醫(yī)學(xué)院20102010屆臨床醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位材料臨床醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位材料臨床論文部分臨床論文部分非癡呆性血管性認(rèn)知功能障礙患者非癡呆性血管性認(rèn)知功能障礙患者膽堿酯酶和乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶活性研究膽堿酯酶和乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶活性研究研究生徐源導(dǎo)師隋建美教授年級2010級專業(yè)外科學(xué)（神外）2013年04月20日貴陽醫(yī)學(xué)院2013屆碩士研究生論文2非癡呆性血管性認(rèn)知功能障礙患者非癡呆性血管性認(rèn)知功能障礙患者膽堿酯酶和乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶活性研究膽堿酯酶和乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶活性研究神經(jīng)外科（專業(yè)名稱），研究生（徐源），導(dǎo)師（隋建美教授）摘要認(rèn)知功能障礙泛指各種原因?qū)е碌牟环N程度的認(rèn)知功能損害，在老年人口中發(fā)病率較高。認(rèn)知功能障礙的危險因素包括年齡、遺傳、生活方式、頭部創(chuàng)傷、精神疾病等。血管性認(rèn)知功能障礙VULARCOGNITIVEIMPAIRMENTVCI泛指由各類腦血管病所致的癡呆綜合征，VCI概念中不僅包括血管性癡呆VULARDEMENTIAVD，而且還包括已經(jīng)有認(rèn)知功能障礙但尚未發(fā)展達(dá)到癡呆的患者，即血管性輕度認(rèn)知功能障礙VULARMILDCOGNITIVEIMPAIRMENTVMCI。目前由血管性因素引發(fā)的認(rèn)知功能障礙的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，嚴(yán)重地影響中老年人群的健康和生活質(zhì)量，已成為當(dāng)今嚴(yán)重的社會問題。VCI的病因和發(fā)病機制尚未完全闡明清楚，因而是當(dāng)前中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病研究的熱點。中樞膽堿能系統(tǒng)CHOLINERGICSYSTEM中神經(jīng)遞質(zhì)受體在維持意識的清醒和學(xué)習(xí)記憶中起重要作用。越來越多的研究表明VCI的發(fā)生過程與膽堿能系統(tǒng)病理改變有關(guān)。在VCI的發(fā)生過程中，中樞膽堿能系統(tǒng)受損與VD患者認(rèn)知功能損害有關(guān)，已發(fā)現(xiàn)VD患者和VD動物模型腦組織中神經(jīng)型乙酰膽堿能受體NEURONALACETYLCHOLINERECEPTSNACHRS表達(dá)低下，配體受體結(jié)合率降低；腦組織中乙酰膽堿酯酶ACETYLCHOLINESTERASEACHE和膽堿乙?；窩HOLINEACETYLTRANSFERASECHAT均有不同程度損害，從而導(dǎo)致乙酰膽ACETYLCHOLINACH合成、釋放、攝取等相關(guān)功能降低，導(dǎo)致大腦功能紊亂。臨床上采用降低膽堿脂酶活性的藥物來減少乙酰膽堿的分解，提高這一神經(jīng)遞質(zhì)的水平，可在一定程度上改善VCI患者定向障礙和記憶力降低等癥狀。通過檢測非癡呆性血管性認(rèn)知功能障礙患者血膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶CHAT及膽堿酯酶ACHE活性的變化，初步探討非癡呆性血管性認(rèn)知障礙的發(fā)生機制。方法選擇61例非癡呆性血管性認(rèn)知功能障礙患者作為研究組，其檢測符合ROCKWOOD認(rèn)知功能障礙診斷標(biāo)準(zhǔn)但未達(dá)到NINDSARIIEN血管性癡呆診斷標(biāo)準(zhǔn)。76例健康老年人作為對照組，兩組均清晨空腹抽取靜脈血并分離血漿。應(yīng)

簡介：目的嗅質(zhì)或氣味能通過嗅覺通路影響腦功能。通過神經(jīng)行為學(xué)觀察確定嗅質(zhì)丁香酚EG可以改善C57BL6對EG的嗅覺認(rèn)知能力；在此基礎(chǔ)上研究EG干預(yù)后小鼠嗅上皮嗅覺受體SMEG的基因表達(dá)變化，及通過EG干預(yù)體外嗅覺感覺神經(jīng)元OSNS的培養(yǎng)，對OSNS的MEG的基因表達(dá)變化進(jìn)行檢測。探討嗅質(zhì)改善嗅覺認(rèn)知及其機制。方法EG干預(yù)小鼠從出生開始PNDO分別至6W和10W，對EG6W和6W對照組，EG10W組和10W對照組。然后進(jìn)行嗅質(zhì)偏愛和嗅質(zhì)辨識實驗，檢測小鼠對EG的嗅覺認(rèn)知的變化；通過REALTIMEPCR技術(shù)，比較EG6W和6W對照組，EG10W和10W對照組的嗅上皮MEG的基因表達(dá)差異，對MEG基因變化與EG的嗅覺認(rèn)知行為學(xué)之間可能的聯(lián)系進(jìn)行探討；利用OMP和TUJ1的免疫細(xì)胞化學(xué)和RTPCR實驗對體外培養(yǎng)的OSNS進(jìn)行鑒定，后利用30ΜM，100ΜM和300ΜMEG分別干預(yù)OSNS培養(yǎng)，再通過REALTIMEPCR技術(shù)對各組MEG的基因表達(dá)進(jìn)行檢測，對EG改善嗅覺認(rèn)知的機制進(jìn)一步探討。結(jié)果1EG6W和6W對照組，EG10W和10W對照組神經(jīng)行為學(xué)結(jié)果之間的比較，EG6W組對EG的嗅覺辨識時間明顯快于6W對照組，EG10W組對EG的嗅覺辨識時間亦明顯快于6W對照組；2REALTIMEPCR技術(shù)對上述各組嗅上皮MEG的基因表達(dá)差異檢測，發(fā)現(xiàn)EG6W組的MEG基因表達(dá)量明顯高于6W對照組，EG10W組的MEG基因表達(dá)量明顯高于10W對照組，且EG6W組和EG10W組的MEG基因表達(dá)量約為相應(yīng)對照組的9倍；3經(jīng)OMP和TUJ1的免疫細(xì)胞化學(xué)和RTPCR鑒定，體外培養(yǎng)的多數(shù)細(xì)胞為OSNS。EG不同濃度干預(yù)OSNS的培養(yǎng)后，REALTIMEPCR檢測各組MEG基因表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)30ΜMEG和100ΜG組的MEG基因表達(dá)量明顯高于空白對照組，分別約為空白組的2倍和4倍，300ΜMEG組的MEG基因表達(dá)量與空白組之間沒有明顯差異。結(jié)論1EG能夠改善小鼠對EG的嗅覺認(rèn)知能力；2EG干預(yù)能夠誘導(dǎo)小鼠嗅上皮MEG基因表達(dá)；3EG體外干預(yù)能夠誘導(dǎo)OSNS的MEG基因表達(dá)。

簡介：福建醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文攜帶血管生成素1基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的實驗研究姓名劉君申請學(xué)位級別碩士專業(yè)外科學(xué)（脊柱外科）指導(dǎo)教師徐皓20100301福建醫(yī)科大掌2007鲴L碩士研究生畢皿矗魯文CONSTRUCTIONOFRECOMBINANTADENOVIRUSVECTORSENCODINGANGIOPOIETIN1GENEANDTRANSFECTIONONBONEMARROWMESENCHYMALSTEMCELLSABSTRACTOBJEETIVES1TOCONSTRUCTANDIDENTIFYTHERECOMBINANTADENOVIRUSVECTORSENCODINGRATANGIOPOIETINLANG1GENE．2EVALUATETHEEFFECTSOFANGLGENETRANSFECTIONONPROLIFERATIONOFBONEMARROWMESENCHYMALSTEMCELLSBMSCSINVITRO．METHODS1THETOTALRNAWASISOLATEDFROMPLACENTAOFRAT．THEANG1GENESEQUENCEWASAMPLIFIEDBYRTPCRANDTHENCLONEDINTOSHUTTLEPLASMIDPADTRACKCMVANDTRANSFORMEDINTO。BJ5183CARRYINGBACKBONEPLASMIDPADEASY1TOOBTAINADENOVIRUSPLASMIDTHROUGHHOMOLOGOUSRECOMBINATION．111ERECOMBINANTVECTORWASSELECTEDBYKANAMYCIN．IDENTIFIEDBYDIGESTIONWITHPACIANDPCR，ITWASAMPLIFIEDBROADLYINXL10GOLDCOMPETENTBACTERIAANDWASPACKAGEDANDAMPLIFIEDIN293CELL．THEINFECTIOUSTITEROFTHERECOMBINANTADENOVIRUSWASTESTEDBYGFPEXPRESSION．2BMSCSWEREHARVESTEDFROMBONEMARROWOFSDRATBYDENSITYCENTRIFUGATIONANDTHECELLSWERETESTEDCD90ANDCD45BYFLOWCYTOMETRY．THESUCCESSFULLYPACKAGEDVIRUSWERETRANSFECTEDTOBMSCSANDEXPRESSIONOFANG1GENEWASCONFIRMEDBYGFPEXPRESSIONUNDERTHEFLUORESCENCEMICROSCOPE．WESTERNBLOTWERECARRIEDOUTTOMONITORTHEEXPRESSIONOFANG一1PROTEININMESENCHYMALSTEMCELLSANDFINALLYEVALUATEDTHEEFRECTOFANGLONTHEPROLIFERATIONOFBMSCSUNDERHYPOXIACONDITIONINVITROBYMTTASSAY．RESULES1THERESULTING1534BPANGLGENEFRAGMENTWASCONFIRMEDBYSEQUENCINGANDCOMPARINGWITHTHESEQUENCEOFTHEANG1GENESEQUENCESREPORTEDINGENEBANK．AFTEREXTRACTINGOUTRECOMBINANTPLASMIDWHICHISISOLATEDFROMPOSITIVETRANSFORMEDCLONESTHEPADEASY一1一ANG1WASALSOIDENTIFIEDTOBECORRECT．THEVIRUSTITREIS2．44X10，U／M1．2BMSCSWERESUCCESSFULLYHARVESTEDFROMBONEMARROWOFSDRATANDIDENTIFIEDBYFLOWCYTOMETRY．AFTERPRIMARYCULTUREOF34DAYS，CULTUREDCELLSDISPLAYEDTYPICALFUSIFORMSHAPEANDTHEGRO叭HSTATUSWASLIKE“COBBLESTONES’’OR‘‘WHIRLPOOL’’UNDERLIGHTMICROSCOPEANDCOULDBEDIFFERENTIATEDINTOOSTEOBLASTCELLS，ADIPOCYTEANDNEURONLIKECELLSINVITRO．AFTERTHETRANSFECTIONOFPADEASY1ANGLTHEEXPRESSIONOFANGLPROTEININBMSCSWASDETECTEDBYWESTERNBLOT．MTTASSAYSUGGESTEDTHATANG1PROTEINEXPRESSINGINTHEBMSCSHAVENOSIGNIFICANTEFFECTONTHEPROLIFERATIONOFBMSCSNANG一1VSNP0．05；HANGIVSHP0．05．CONCLUSIONTHERECOMBINANTADENOVIRUSNAMEDPADEASYLANG一1CARRYINGANG1GENEHADBEENCONSTRUCTEDSUCCESSFULLYANDWASTRANSFECTEDINTOBMSCSSTABLYATHIGHEFFICIENCY．MOREOVERTHEEXPRESSIONOFANGLINBMSCSHAVENOSIGNIFICANTEFFECTONTHEPROLIFERATIONOFBMSCSINVITRO．【KEYWORDSLBONEMESENCHYMALSTEMCELLS；ANGIOPOIETINL；ADENOVIRUSVECTOR4